1、ICS 65.120 B 25 DB11 北京市地方标准 DB11/T 17592020 全株玉米青贮饲料分级技术规范 Technical specification for grading of whole corn silage feed 2020 - 09 - 17发布 2021 - 01 - 01实施 北京市市场监督管理局 发布 DB11/T 17592020 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 技术要求 . 1 5 综合分级 . 3 6 测定方法 . 3 附录A（资料性） 30h 中性洗涤纤维降解率的测定 . 5 附
2、录B（资料性） 氨态氮/总氮含量的测定 . 7 附录C（资料性） 气相色谱法测定青贮饲料中有机酸含量 . 9 DB11/T 17592020 II 前 言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起 草。 本文件由北京市农业农村局提出并归口。 本文件由北京市农业农村局组织实施。 本文件起草单位：北京市畜牧总站。 本文件起草人：郭江鹏、赵连生、付瑶、马露、王俊、齐志国、吕中旺、卜登攀、陈雅坤、沈旖帆、 梁晓维。 DB11/T 17592020 1 全株玉米青贮饲料分级技术规范 1 范围 本文件规定了全株玉米青贮饲料技术要求、综合分级和测定方法。
3、 本文件适用于对全株玉米青贮饲料的分级。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白质的测定 凯氏定氮法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 10468 水果和蔬菜产品pH值的测定方法 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20194 动物饲料中淀粉含量的测定 旋光法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 20806 饲料中中性
4、洗涤纤维(NDF)的测定 NY/T 1459 饲料中酸性洗涤纤维的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 全株玉米青贮饲料 whole corn silage feed 将新鲜全株玉米收获调制后，置于密闭条件下，通过乳酸菌等微生物厌氧发酵作用制成的饲料。 3.2 30h 中性洗涤纤维降解率 neutral detergent fiber degradation rate for 30 hours 饲料中中性洗涤纤维通过体外发酵30 h所降解的部分占原样中中性洗涤纤维的百分比。 4 技术要求 4.1 感官分级 DB11/T 17592020 2 全株玉米青贮饲料感官分级指标包
5、括气味、色泽、质地和籽实破损度4项指标，分级按照表1的指标 设定进行判定。以4项感官指标单项得分之和作为分级依据，判定81100分为优良、6180分为中等、 4160分为较差、040分为差，感官评分记为S1。 表1 全株玉米青贮饲料感官评分 评分 气味 （25分） 色泽 （25分） 质地 （25分） 籽实破碎度 （25分） 1825分 酸香味，无丁酸味 黄绿色，淡绿色 松散柔软、不粘手 无可见完整籽实 1017分 醋酸味较强，酸香味较弱 黄褐色，淡褐色或淡黄色 柔软、水分稍干或稍湿 整粒籽实1-2个，半粒籽实很少 19分 刺鼻酸味，丁酸味颇重 墨绿色，淡黄褐色 略带粘性，干燥 整粒籽实超过3个
6、，半粒籽实多 0分 腐烂味、霉烂味，有很强的丁酸味 严重变色，褐色或黑色 腐烂发粘、结块 无籽实 4.2 营养分级 全株玉米青贮饲料营养分级指标包括干物质、粗蛋白质、中性洗涤纤维、30h 中性洗涤纤维降解率、 酸性洗涤纤维、淀粉6项指标，分级按照表2的指标设定进行判定。以6项营养指标中单项得分最低的分 级及评分判定为该全株玉米青贮饲料的营养分级及评分，营养评分记为S2。 表2 全株玉米青贮饲料营养评分 分级 干物质，%鲜重 粗蛋白质，%DM 中性洗涤纤维，%DM 30h 中性洗涤纤维降解率，%DM 酸性洗涤纤维，%DM 淀粉，%DM 优良 （81100分） 3038 8 45 55 27 30
7、 中等 （6180分） 2830 或3840 7 4550 5055 2730 2530 较差 （4160分） 2528 或4042 7 5055 4550 3032 2025 差 （040分） 25或42 7 55 45 32 20 4.3 发酵分级 全株玉米青贮饲料发酵分级指标包括pH值、氨态氮/总氮、乳酸/总酸、乙酸/总酸、丁酸/总酸，分 级按照表3指标设定进行判定。以5项发酵指标单项得分之和作为分级依据，判定81100分为优良、61 80分为中等、4160分为较差、040分为差，发酵评分记为S3。 表3 全株玉米青贮饲料发酵评分 pH值 (20分) 氨态氮/总氮，% （30分） 乳酸/
8、总酸，% （25分） 乙酸/总酸，% （15分） 丁酸/总酸，% （10分） 3.9 （1720分） 8 （2430分） 60 （2125分） 20 （1215分） 2 （810分） DB11/T 17592020 3 表3 全株玉米青贮饲料发酵评分（续） pH值 (20分) 氨态氮/总氮，% （30分） 乳酸/总酸，% （25分） 乙酸/总酸，% （15分） 丁酸/总酸，% （10分） 3.94.2 （1316分） 810 （1823分） 5060 （1620分） 2030 （811分） 210 （57分） 4.24.4 （912分） 1012 （1217分） 4050 （1115分） 30
9、40 （57分） 1020 （34分） 4.44.8 （58分） 1215 （611分） 3040 （610分） 4050 （24分） 2030 （02） 4.8 （04分） 15 （05分） 30 （05分） 50 （01分） 30 （-10-1） 4.4 卫生要求 全株玉米青贮饲料卫生指标应符合GB 13078 的要求。 5 综合分级 在全株玉米青贮饲料卫生指标符合GB 13078要求的前提下，对其按照以下规则进行综合评分和分 级。 综合评分包括感官评分、营养评分和发酵评分，规定感官评分占总分30%，营养评分占总分40%，发 酵评分占总分30%。按式（1）计算综合评分： . （1） 式中：
10、 Q 综合评分； S1感官评分； S2营养评分； S3发酵评分。 根据综合评分对青贮饲料进行分级，判定81100分为优良、6180分为中等、4160分为较差、0 40分为差。 6 测定方法 6.1 取样方法 按照GB/T 14699.1的规定执行。 6.2 试样制备 营养指标分析样品制备，按照GB/T 20195的规定执行。 发酵指标分析样品制备，快速用切刀或剪刀将青贮饲料样品切成0.2 cm0.5 cm长，称取20.00 g 于200 mL具塞三角瓶中，加入180 mL蒸馏水，摇匀，置于4 冰箱浸出24 h，并不时摇动，用滤纸过滤， 得到试样浸出液。 6.3 感官评估 DB11/T 1759
11、2020 4 称取500 g样品,均匀放置在不透明的白色瓷盘中，并保持室内空气的流通，通过嗅觉和视觉等感官 器官进行辨别。 6.4 干物质测定 按照GB/T 6435的规定测定水分含量，按式（2）计算干物质含量： DY -= 1 . （2） 式中： Y干物质含量（%）； D饲料水分含量（%）。 6.5 粗蛋白质含量测定 按照GB/T 6432的规定执行。 6.6 中性洗涤纤维含量测定 按照GB/T 20806的规定执行。 6.7 30h 中性洗涤纤维降解率测定 体外发酵法测定30h 中性洗涤纤维降解率，参见附录A。 6.8 酸性洗涤纤维含量测定 按照NY/T 1459的规定执行。 6.9 淀粉
12、含量测定 按照GB/T 20194的规定执行。 6.10 pH值测定 按照GB/T 10468的规定执行。 6.11 氨态氮/总氮含量测定 苯酚-次氯酸盐显色法测定青贮饲料中氨态氮/总氮含量，参见附录B。 6.12 有机酸含量测定（乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、总酸） 气相色谱法测定青贮饲料中有机酸含量，参见附录C。总酸为乳酸、乙酸、丙酸和丁酸之和。 6.13 卫生指标测定 按照GB 13078的规定执行。 DB11/T 17592020 5 A A 附 录 A （资料性） 30h 中性洗涤纤维降解率的测定 A.1 试剂 按照比例配置缓冲液：准确称取1.00 g 碳酸氢氨（NH4HCO3）、8.75
13、 g碳酸氢钠（NaHCO3） 、1.55 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）、1.43 g 磷酸氢二钠（Na2HPO4）、0.52 g 硫化钠（Na2S）、0.15 g 硫酸镁（MgSO4 7H2O）、0.002 g 氯化钴（CoCl6H2O）、0.015 g 氯化锰（MnCl24H2O）、0.017 g 氯化钙（CaCl22H2O）、 0.012 g 氯化铁（FeCl36H2O）和1.25 mg刃天青，将上述试剂溶解于1000 mL的蒸馏水中，混合均匀， 将高纯CO2缓慢的通入到溶液底部，直至pH值到6.8，试验前预热至39 。 A.2 仪器 试验用仪器包括： 发酵瓶（100 mL）； CO2钢
14、瓶； 水浴恒温培养箱； pH计。 A.3 瘤胃液采集 瘤胃液供体需为3头以上健康、泌乳期相同、体况相近的泌乳牛。 于晨饲前1 h通过瘤胃瘘管采集瘤胃液，混合后装于保温瓶（保温瓶内装39 的热水预热处理）， 密封好后迅速带回实验室，用4层纱布过滤，过滤同时通入CO2，整个操作置于39 水浴中进行，直至 接种完毕。 A.4 接种 准确称取0.5 g饲料样品于150 mL厌氧发酵瓶中。接种前向每个瓶中持续通入CO2 5 s后，接种时迅 速将每个瓶中加入预热的液体培养基50 mL和经4层纱布过滤的新鲜瘤胃液25 mL，向瓶中持续通入CO2 5 s后，立即加上瓶塞，盖紧橡胶塞及铝盖并用压杆器压紧瓶口，将
15、发酵瓶放于39 恒温培养箱中发酵。 A.5 降解率测定 发酵30 h，取出发酵瓶，震荡、经300目尼龙袋过滤。 用蒸馏水冲洗上述过滤降解残渣，直至水澄清，65 下烘干至恒重（约48 h）。饲料降解率按式 （A.1）计算： %100)1( -= BAP . （A.1） 式中： DB11/T 17592020 6 P 30h 中性洗涤纤维降解率（%）； A 残渣中中性洗涤纤维重量（g）； B 放入发酵瓶中的样品中性洗涤纤维重量（g）。 DB11/T 17592020 7 B B 附 录 B （资料性） 氨态氮/总氮含量的测定 B.1 试剂 试验用试剂包括： 亚硝基铁氰化钠（Na2Fe(CN)5NO
16、2H2O）； 结晶苯酚（C6H5O）； 氢氧化钠（NaOH）； 磷酸氢二钠（Na2HPO67H2O）； 次氯酸钠（NaClO）：含活性氯5.25 %； 氯化铵NH4Cl； 苯酚显色剂：将取0.1 g 亚硝基铁氰化钠、20 g 结晶苯酚，蒸馏水定容至2 L，溶液放入棕色 瓶中210 避光保存，保质期6个月； 次氯酸盐试剂：称取10 g 氢氧化钠、75.7 g 磷酸氢二钠溶于蒸馏水中。待冷却后。加100 mL 次氯酸钠混匀后定容于2 L，溶液使用滤纸过滤后210 避光保存，保质期6个月； 氨标准储备液：准确称取1.0045 g 氯化铵溶于适量蒸馏水中，用稀盐酸调节pH值至2.0，用 蒸馏水定容至1
17、 L，得到含氨浓度为32 mg/dL的标准储备液。 B.2 仪器 试验用仪器包括： 分光光度计； 恒温水浴锅； 移液枪：100 mL、1 mL、5 mL。 B.3 测定步骤 B.3.1 标准曲线的建立 用蒸馏水稀释氨标准储备溶液，得到氨态氮浓度分别为：32 mg/dL、16 mg/dL、8 mg/dL、4 mg/dL、 2 mg/dL、1 mg/dL和0 mg/dL的系列标准液。取系列标准工作液各40 mL至贴好标签的试管中，依次加 入2.5 mL苯酚显色液、2 mL次氯酸盐试剂。注意加入每种试剂后均要混匀。将样品放置37 水浴中发 色30 min。冷却后，使用分光光度计在波长550 nm测定
18、吸光度。以吸光度和标准液浓度为坐标轴建立标 准曲线。 B.3.2 样品的检测 向每支试管中加入40 mL6.2中所述制备的青贮饲料浸出液，按检测步骤测定样本液的吸光度。 B.3.3 水分测定 DB11/T 17592020 8 按GB/T 6435的规定执行。 B.3.4 总氮的检测 按GB/T 6432的规定执行。 B.3.5 结果计算 氨态氮的含量按式（B.1）计算： 11 111 )180( Mm DmNCW += . （B.1） 式中： W 氨态氮含量，单位为占总氮的质量百分比（总氮%）； C1 样液的浓度（mg/dL）； N 稀释倍数； D1 样品的水分含量（%）； M1 试样的总氮
19、含量，单位为占鲜样的质量百分比（鲜样%）； m1 制取青贮液时样品重量（g）。 DB11/T 17592020 9 C C 附 录 C （资料性） 气相色谱法测定青贮饲料中有机酸含量 C.1 试剂和材料 乳酸、乙酸、丙酸、丁酸标准品，超纯水，15%高碘酸溶液。 C.2 仪器 气相色谱仪、火焰离子化检测器（FID）。 C.3 测定程序 C.3.1 上机前处理 取正文中所述制备青贮饲料浸出液1 mL于1.5 mL离心管中，加入0.4 mL 15%高碘酸溶液，以10 000 r/min离心10 min，取上清液上机分析。 C.3.2 气相色谱条件 色谱柱：2.0 m3.9 mm不锈钢柱，內填充0.1
20、71 mm0.149 mm粒度的Porapak Q；柱温：210 ； 气化室温度：220 ；检测器温度：230 ；载气：氮气，柱前压0.26 MPa；焰气：氢气，0.05 MPa； 空气：0.25 MPa；进样量：2.0 mL。 C.3.3 采用外标法定量 C.3.4 水分测定 按GB/T 6435的规定执行。 C.3.5 结果计算 饲料中VFA和乳酸含量按式（C.1）计算： 2 2222 )180( m MDmCX += . （C.1） 式中： X VFA和乳酸含量（%）； C2 外标法得到试样中乙酸、丙酸、丁酸或乳酸的量浓度（mmol/mL）； D2 样品的水分含量（%）； M2 乙酸、丙酸、丁酸或乳酸的摩尔质量（g/mol）； m2 制取青贮液时样品重量（g）。 _
