1、WS 中华人民共和国卫生行业标准 ws/T 6 3一1996 尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法 Urine-Determination of thiodiglycolic acid -Gas chromatographic method 1996一10一14发布1997一05一01实施 中华人民共和国卫生部发布 中华人民共和国卫生行业标准 尿中亚硫基二乙酸的气相色谱测定方法WS/T 63一1996 Urine-Determination of thiodiglycolic acid 一Gas chromatographic method 主题内容与适用范围 本标准规定了尿中亚硫基二乙酸(TD
2、GA)的气相色谱侧定方法。本法最低检测浓度为0. 25 mg/I。 本标准适用于接触氯乙烯的工人尿中亚硫基二乙酸的测定。 2原理 尿样经酸化后蒸至近干，放冷后用甲醇一乙醚混合液溶解亚硫基二乙酸，将溶剂浓缩后，用重氮甲烷 甲醋化.然后进行气相色谱分析，以保留时间定性，峰高定量。 3仪器 I1气相色谱仪，火焰光度检测器。 3.2微量进样器，10 pL, 3.3瓷蒸发皿，10 mLo 3.4刻度离心管，10 mL。事先要进行刻度校正，并经硅烷化处理(经1+9二甲基二氯硅烷甲苯液浸 泡，取出晾干，再经300-C烘烤3 h), 3.5分液漏斗，30 mLo I6具支试管(大型气泡采样管外套管)。 3.7
3、聚乙烯塑料瓶，100 Ml。 3.8尿比重计。 4试剂 本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。 4.1实验用水，蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。 4.2盐酸,p2o=1. 19 g/mL. 4.3盐酸溶液，6 mol/Lo 4.4氢氧化钾溶9,400 g/Le 4. 5甲醇。 4.6乙醚。 4. 7甲醇一乙醚混合液(2十I). 4.8固定相:聚乙二醇20 Mo 4.9担体:Chromosorb W AW DMCS,80-100目。 4.10二甲基二氯硅烷甲苯溶液，1+9, 中华人民共和国卫生部1996门0门4批准1997一05一01实施 1 WS T 63 1996 4.11 rfTi
4、l甲Oh.制备方法见附录入 乙.12一_.珑一乙酸.制备方去IIl附录H 门3二旋从一乙一t际准液:准确称取50 mg亚硫基几乙酸.用甲醇溶解，在50 mI容量瓶中用甲醇稀 任至刻度此杯液I m t相当于1 mg亚硫撰二乙酸，于4(冰箱中至少可使用一个月。临用前用乙醚稀 译成1 nil卞目“j于10 vg亚硫基二乙酸的标准i1用液 4. 14质控样:用加标模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。 采样、运输和贮存 用聚乙烯塑料瓶收集接触抓乙烯的工人班后尿或班前尿样，测比重后按约99+1的比例加入盐酸 (4.1)酸化、混匀，于4(冰箱中可保存两周，分析前将尿液彻底混匀。 6分析步骤 6
5、.1仪器操作条件 色谱柱:柱长。2m，内径，3 mm，玻璃柱 固定液:担体=5:100 柱温:180 C。 载气(纯氮)50 ml./min, 燃气(氢气)60 ml./min;助燃气(空气):70 mI,/min,氧/氢;0.23, 光电倍增管高压:750 V o 6.2样品处理 6.2.1取lm工(或2 ml)尿样于蒸发皿内，加。. 1 m工，盐酸(4.2),混匀用蒸汽加热使样品蒸发至湿结 晶状态，随即取下放冷至室温。在不断搅拌下或摇动下沿蒸发皿四周加入。.3 ml(或。. 6 mL)甲醇一乙 醚混合液(4. 6).使内容物溶脱皿壁，加入3 ml乙醚(4. 5)。将上清液移入刻度离心管中，
6、再用少量乙醚 (每次2-3 ml)洗涤残渣两次，合并醚液，于温水浴中(约45 C)浓缩至1 mL, 6.2.2取约200 mg亚硝基甲N于具支试管中，加。.5-1 ml乙醚，试管口处用橡皮塞与分液漏斗内 盛氢氧化钾溶液(4. 3)联接，通入样品管的玻璃滴管用硅橡胶管与支管相接。打开分液漏斗活塞，让氢 氧化钾溶液徐徐下滴.此时重氮甲烷气体就由支管导入样品管底部，使样品发生重氮化反应，直至醚液 变微黄色为止。再放置10 min，加入1 ml，甲醇(4.4)，细心在温水浴上赶走过剩的重氮甲烷和乙醚，使 最后体积在室温下定容为1. 0 ml。 6.3标准曲线的绘制 取6支刻度离心管，按下表配制标准管。
7、 亚硫基二乙酸标准管的制备 针号012345 亚硫基二乙酸标准应用液.mL 乙醚mL101.0:.:，:，:.:1.000 TDGA含量p80246810 以下按6.2.2条的分析步骤操作。取2-5川酒旨化后的溶液注入色谱仪，测定各管的峰高值。1-5 管的峰高值减去零管值后，取其对数为纵坐标，亚硫基二乙酸含量为横坐标，绘制标准曲线。 6.4样品测定 取按6.2条处理后的2-5 pL样品溶液注入色谱仪，测定峰高值，减去标准空白(0管)的峰高值， 从标准曲线或回归方程查出或求出样品中亚硫基二乙酸的含量。在测定前后以及每测定10次样品后测 一次质控样。色谱图见下图。 WS/T 63 -1996 TD
8、GA8 Vg 5111几n 作接触者加亚硫丛_二乙酸尿 尿样色谱图 2计算 式中: 按式(1)计算尿样换算成标准比重(1-020)下的浓度校正系数k, 1. 020一1.000 冰头伙U比里一I. vvv 按式(2)计算尿中亚硫基二乙酸的浓度。 X=mk/V X尿中亚硫基二乙酸的浓度，mg/I; m由标准曲线回归方程计算或查得的亚硫基二乙酸含量,pgo V分析时取尿样量,ml。 (1) (2) 8说明 8门本法的最低检测浓度为。.25 mg/I;线性范围。. 110 mg/I;精密度:10%-5. 9yo(亚硫基二乙 酸浓度2-6 mg/I_,=12);加标回收率:88%103%(尿中亚硫基二
9、乙酸浓度为2-8 mg/I,n=6), 8.2火焰光度检测器的响应值的对数值与样品浓度的对数值呈直线关系，所以要用双对数坐标纸或将 数值先经讨数处理后用直角坐标纸作标准曲线图。 8.3火焰光FITY检测器开机后需要较长时间才能稳定，所以仪器最好24 h连续运转，同时每天需要作标 准曲线和每测走立。次样品加一次质控样或标准管进行检查。 8.4样品不宜完全蒸干;乙醚的转移、浓缩，离心管的刻度准确与否以及定容时样液的温度所造成的体 积影响都是测定误差的重要来源。 8.5尿样的采集时间最好是采班后2-10 h的尿，或下一个班前晨尿。因其代谢产物在一般环境中不 存在，故样品受污染的可能性很小。 8-6重
10、氮甲烷气体有剧毒，因此一定要在通风柜内操作;重氮甲烷容易爆炸，应严格按操作步骤进行. 实验时应戴防护眼镜。 8.7质控样使用加标的模拟尿时可考察准确度和精密度。使用接触者尿和加标的正常尿时可考察精密 度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中的部分主要成分。 WS/T 63一1996 附录A 亚硝墓甲膝的制备 (参考件) A1 亚硝基甲睬(Nitrous methyl urea)，分子式:CH,N (NO)CONH,，由盐酸甲胺和脉制备而成。 仪器 圆底烧瓶，100 m工 烧杯.500 mL. 球形回流冷凝管。 电炉，1 000W. 玻璃搅拌棒。 温度计，一loc。 抽滤漏斗娜9 Cm)及抽滤瓶。
11、水泵或真空泵。 熔点测定器。 月. . 六J J 月q 哎 口 C U J了 矛 O U 卜q : JI . 月 . 目 . 曰1 月 . . 闷. . 月 . . J I 翻. t A A A A A A A A A A2原料 所用原料均为化学纯或为工业品。 A2门盐酸甲胺。 A2. 2尿素。 A2.3亚硝酸钠。 A2.4冰块。 A2.5粗食盐粒。 A2. 6硫酸，Pzo=1. 84 g/mL, A3反应式 CH,NH,CI十NH2CONH:-CH,NHCONH,+NH,CI CH,NHCONH,+HNO, -CH,N(NO)CONH,+H,O AQ步骤 在圆底烧瓶中，放入10g盐酸甲胺，加
12、40 mL水，再加30 g尿素。将烧瓶在电炉上和缓地回流 2 h 45 min，再剧烈回流15 min。将烧瓶放冷至室温。以11g亚硝酸钠加入反应瓶的溶液中，然后将反 应瓶冷却至。左右。 用冰盐水将大烧杯四面围住，烧杯内放60-100 g冰块及10g浓硫酸，用玻璃棒在不停地搅拌下. 一面将放冷的反应液缓缓有控制地注入(虹吸的办去)盛有硫酸及冰块的烧杯中，其注入速度以烧杯内 温度不超过。C为准。也可再放适量冰块到烧杯中，以保持烧杯内的反应温度。产品呈白色泡沫状浮在 液面，抽滤压干，再用510 mL冷水洗一次，再抽干，真空千燥或阴凉处晾干。沸点123-124C。产率: 66%-72%. A5注意事
13、项 A5.，本品应冷藏保存，在不太高的温度(盛夏室温)下有时会强烈分解，因此更不能烘烤。 4 WS/T 63一1996 A5.2本品无需进一步精制，抽干后即可使用，不必干燥处理 附录B 亚硫荃二乙酸的制备 (参考件) 亚硫基二乙酸是由氯乙酸与硫化钠缩合而成。是制备唾啼的中间体。 B1反应式 CICH,COOH十NazS -S (CH,COOH) z B2仪器 玻璃三角烧瓶，500 mL, 抽滤漏斗.9cm)及抽滤瓶。 水泵或真空泵。 熔点测定器。 玻璃搅棒。 月. . 门2 一 q 月 ， . 门 了 门乙 八乙 ， ， L B B B B B B3试剂 化学纯或工业纯。 B3. 1氯乙酸。
14、B3. 2碳酸氢钠。 B3. 3硫化钠。 B3.4冰块。 B3. 5粗粒食盐。 B3.6硫酸,Pzo=1. 84 g/mL, B3.7活性炭。 Bq反应步骤 将94.5 g氯乙酸放在盛有150 mL水的三角烧瓶中，周围用冰盐水致冷，加进84 g碳酸氢钠。将 132 g无水硫化钠，放进另一盛有185 mL水的烧杯中。温度保持在25-30的条件下.将饶杯内的硫化 钠水溶液缓慢边搅边倒入上述三角烧瓶的反应液中。让反应液在冰水浴中静置1h后，将75 mL浓硫酸 缓慢注入反应液中，边加边搅动(温度保持在25-30C)。再用乙醚反复萃取亚硫基二乙酸(最好用流动 式连续提取36 h)。合并所有萃取的乙醚溶液
15、，将醚蒸干，得粗制品，产率:8800, 用200 ml,水及少量活性炭溶解并煮沸粗制品，过滤，浓缩到约75 mL，放冰浴中，析出结晶，再抽 滤并压干。用热水反复重结晶几次，就可得到熔点为129C的白色亚硫基二乙酸精品。 B5参考文献 Bankanbus,Preparation of 1,4-thiazine.J. Am. Chem. Soc. ,1948,70;684. wS/T 6 3一1996 附加说明: 本kt准由I!生部I?生监督司提出。 本际准讨1北京市劳动卫生职业病防治研究所负责起草。 本标准王要起草人陈震阳。 本标准由卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所负责解释。
