1、ICS 65.020.20 CCS B 05 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 5348 2021 大丽花脱毒种苗生产技术规程 201 - 01 - 21 发布 2021 - 02 - 21 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 5348 2021 I 前 言 本 文件 按照 GB/T 1.1 2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构与起草规则的规定 起草。 本 文件 由河北省林业和草原局提出。 本 文件 由河北农业大学起草。 本 文件 主要起草人： 陈段芬、向地英、牛善策、郝丽红、王丽霞、谷桂 恕、邸葆、邓运川、梁娟 。 DB13/T 5348 2021 1
2、大丽花脱毒种苗生产技术规程 1 范围 本 文件 规定了大丽花无菌苗培育、脱毒苗培养、脱毒苗快繁、原种苗培育、生产用苗繁育以及病 虫害防治 等内容 。 本 文件 适用于大丽花脱毒苗生产繁育环节。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适 用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 SN/T 2964 植物病毒检测规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 大丽花
3、大丽花（ Dahlia pinnata Cav.） 是菊科大丽花属植物。 3.2 脱毒原种苗 脱毒组培瓶苗移栽于无病原、虫源的种苗圃内存活的植株。 4 无菌苗培育 4.1 外植体选择和处理 以大丽花顶芽或带腋芽茎段为外植体材料。将外植体用 市售 洗洁精稀释 100 倍后浸泡 5 min，用 自来水冲洗 2 h，之后用 75% 酒精浸泡 30 s，再用 0.1% 升汞处理 4 min 7 min，并用无菌水冲洗 5 8 次，消毒滤纸吸干水分。 4.2 培养基配制 培养基配制按 NYT/T 2306执行。 DB13/T 5348 2021 2 4.3 接种 接种操作按 NY/T 2306执行。 4
4、.4 初代培养 切取经消毒处理的茎尖接种到初代培养基中培养 7天后，将无污染茎尖转接到新的初代培养基。 培养基配方： MS + 6-BA 4 mg/L + NAA 0.2 mg/L+蔗糖 40 g/L+琼脂 6 g/L，在培养基 中加入 2 g/L的 活性炭。 4.5 继代培养 初代培养产生的无菌小苗高 5 cm 10 cm时，切取其带一对芽的茎段，接种到继代培养基上。 继代培养基配方： MS + 6-BA 1.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L+蔗糖 40 g/L+琼脂 6 g/L。 5 脱毒苗培养 5.1 培养基配制 培养基配方为 MS + 6-BA 4 mg/L +NAA 0.2
5、 mg/L+蔗糖 40 g/L+琼脂 6 g/L。 待培养基温度降至 50 60 后，将 25 mg/L 病毒唑（三氮唑核苷） 用经高温灭菌 后的注射器以 0.22 m 孔径的水相滤膜过滤 后加入培养基中。 5.2 茎尖处理 切取无菌苗嫩尖，在超净工作台上，解剖镜下剥取 0.2 mm 0.4 mm的茎尖分生组织圆锥体，置于培 养基上进行暗培养，待生长点开始萌动后，转移到光照条件下进行培养。 待苗高 5 cm 10 cm时切取无菌苗嫩尖 1 cm，接种在添加有病毒唑的培养基上， 40天后切取茎尖转 移到不含病毒唑的 MS+ 6-BA 4 mg/L +NAA 0.2 mg/L+蔗糖 40 g/L+
6、琼脂 6 g/L茎尖诱导培养基上进行培养。 30天后转移到 MS+ 6-BA 1.5 mg/L +NAA 0.3 mg/L+蔗糖 40 g/L+琼脂 6 g/L继代培养基上。 5.3 病毒检测 待试管苗长到 5 cm 10 cm时，切取叶片或幼嫩组织，按 SN/T 2964 进行病毒检测，不得检出大丽 花花叶病毒 (DMV)、黄瓜花叶病毒（ CMV）和烟草花叶病毒（ TMV）。 6 脱毒苗快繁 6.1 初代培养和继代培养 经鉴定的脱毒苗按 4.4和 4.5给出的方法进行快繁。 6.2 生根培养 待脱毒苗长到 5 cm 10 cm 时，截取 2 cm 茎尖或茎段接种于生根培 养基上。 生根培养基
7、配方： 1/2 MS + NAA 0.1 mg/L + 蔗糖 30 g/L + 琼脂 6 g/L。 6.3 培养条件 DB13/T 5348 2021 3 光照强度 30 molm-2s-1 60 molm-2s-1，白天温度 25 2 ，夜间温度 18 2 。每天照 光 12 h 14 h。 7 原种苗培育 7.1 炼苗 待脱毒苗基部有 3 5 条根，长度 1 cm 2 cm 时，即可进行炼苗。炼苗方法按 NY/T 2306 执行。 7.2 移栽 7.2.1 基质准备 在满足脱毒苗 正常生长条件下，可因地制宜选择基质。可用草炭珍珠岩蛭石 =2 1 1的混合 材料。基质用 0.5 g/L多菌灵
8、 50% 可湿性粉剂喷透备用。 7.2.2 栽 植 取出脱毒小苗，用清水洗掉根系表面的培养基，之后用 0.1%高锰酸钾溶液快速漂洗根部，栽于苗 床、营养钵或穴盘中，浇透水后用遮光率为 50%的遮阳网遮荫 ，再 用防虫网隔离。 7.3 移栽后管理 7.3.1 光照 遮荫 7 d 10 d后，光强逐渐增加到 120 molm-2s-1 180 molm-2s-1。 7.3.2 温度和湿度 移栽 7 d 10 d后，保持环境温度 20 25 ，相对湿度 50% 60%。 7.3.3 水肥 管理 移栽 7 d 10 d后 ，视基质状况适时浇水，基质湿度保持在 60% 70%。每 7 d 10 d施一次
9、与 MS培养 基浓度一致的大量元素营养液。 8 生产用苗繁育 8.1 扦插 繁殖 原种苗株高 30 cm以上时，用消毒刀具截取带有 2 4节的茎段，基部扦插于苗床、营养钵或穴盘。 插后浇透水，用遮光率为 50%的遮阳网遮荫，相对湿度保持 75% 90%。 等茎段基部生根后，逐步掀开遮 阳网。 8.2 繁殖年限 脱毒原种苗繁 育生产用苗，繁殖年限限制在 2 3年。 8.3 壮苗标准 壮苗标准为：茎粗壮，节间短，无徒长；叶色深绿；须根发达，生长健壮；无病斑，无虫害。 DB13/T 5348 2021 4 9 病虫害防治 苗期 主要病害有白粉病、灰霉病、褐斑病等；主要虫害有蚜虫、红蜘蛛等。施用药剂防
10、治病虫害 应符合农药合理使用准则 GB/T 8321（所有部分）的规定。 主要病虫害 防治方法见附录。 DB13/T 5348 2021 5 附 录 A （资料性 ） 大丽花苗期病虫害及防治方法 表 A.1 大丽花苗期病虫害及防治方法 _ 病虫害名称 危害症状 防治方法 白粉病 主要危害大丽花叶片和叶柄。发病叶片 出现白色霉层，严重时会使叶片皱缩反 卷，导致叶片脱落， 整株死亡。 控制浇水，适量增施磷钾肥，加强通风，使 植株生长健壮，提高抗病能力。 发病初期， 摘除病叶，用 50%粉锈宁可湿性粉剂 800 1000 倍液或 70%甲基托布津 1000 倍液进行喷雾防 治。每周 1 次，连续换药
11、喷洒 3 5 次。 灰霉病 受害植株 叶缘处和茎部发生近圆形至不 规则形病斑，淡褐色至褐色，有时呈轮 纹、水渍状，湿度大时长出灰霉。发病 严重时茎部倒伏，整株死亡。 使用洁净基质育苗；避免育苗密度过大；加 强通风透光；浇水时避免喷淋和苗床积水。 发病初期及时摘 除病叶，并 喷洒 75%百菌清可湿 性粉剂 500 倍液或 40%多硫悬浮剂 500 600 倍 液， 7 10 天喷洒 1 次，连续 2 3 次。 褐斑病 受害叶片产生褐色斑点，之后变成暗褐 色，最终干枯脱落。 加强通风；适量增施磷钾肥，提高植株抗病 性；控制浇水量，需要浇 水应在天气晴朗的早 上进行； 发病初期及时摘除烧毁病叶，喷洒
12、 75%百菌清可湿性粉剂 700 800 倍液或其他 杀菌剂，每周 1 次，连续喷洒 3 5 次。 蚜 虫 主要危害嫩芽和叶片，受害叶片变黄卷 曲，嫩芽受到危害时生长缓慢，嫩茎扭 曲，严重时生长点坏死。 悬挂黄板诱杀； 危害较重时，可用 2.5%溴 氰菊酯乳油 1500 2000 倍液或 5%啶虫脒 500 600 倍液喷洒植株。 红蜘蛛 受害叶片出现黄白色小斑点，呈星点状， 之后逐渐变红，造成植株生长缓慢，叶 片失绿、卷曲，枯黄脱落。 用 40%的三氯杀螨醇乳油 1500 2000 倍液或 50三氯杀螨砜可湿性粉剂 1500 2000 倍液 或 40氧化乐果 1000 1500 倍液喷雾防治， 每隔 7 天喷 1 次， 连续喷洒 2 3 次。
