1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 血液、尿液中 缩节胺和矮壮素检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for mepiquat and chlormequat in blood and urine samples LC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国
2、刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC1） 提出并 归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 ，浙江 省公安厅 ， 司法部司法鉴定科学技术研究所 ，江西 省 公安厅。 本标准起草人：王炯、 张云峰 ，傅 得 锋 、宣宇、王洪宗。 GA/T 1 法庭科学 血液、尿液中 缩节胺和 矮壮素检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 血液、尿液中 缩节胺 和 矮壮素的液相色谱 -质谱（ LC-MS）检验方法。 本标准适用于 法庭科学 血液、尿液 中的 缩节胺 和 矮壮素 的定性 分析 和定量 分析 。 其他可疑 样品 中 缩 节胺和矮壮素 的定性分
3、析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 血液、尿液 样品 样进行提取 及 净化， 采用液 相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和 相对 丰度比 作为定性判断依据； 以峰面 积为依据，采用外标法 进行定
4、量分析 。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符 合 GB/T 6682 中规定的 一 级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括： a) 乙腈 （ 色谱纯 ） ； b) 甲醇 （ 色谱纯 ） ； c) 甲酸 （色谱纯） ； d) 甲酸铵 （色谱 纯） ； e) 氨水 ； f) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据缩节胺和矮壮素标准物质的纯度 ， 各 称取适量， 分别用甲 醇配制 1.0mg/mL 缩节胺和矮壮素标准物质溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准 溶液 ； 2) 0.1mg/mL 混合 标准 工作 溶 液：移取
5、 1.0mg/mL 的 缩节胺和矮壮素 标准物质溶液各 1.0mL， 用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3 个月。实验中所用 其 他 浓度的混合标准工作 溶 液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到 ； GA/T 2 3) 10.0g/mL 缩节胺和矮壮素 单一标 准工作溶液 ： 移取 1.0mg/mL 的 缩节胺和矮壮素 标准物 质溶液各 0.1mL， 用甲醇定容至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的 单一标准工作 溶液 ，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3 个月。 实验中所用 其他 浓度的单一标准工作 溶液均由 10.0g
6、 /mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注 ：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料 包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相 萃 取柱： Oasis WCX 固相萃取柱 或 其他 等效固相萃取柱 ，使用前依次用 3mL 甲醇、 3mL pH 值 为 8 的氨水活化 ； 注： Oasis WCX 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 d) 有机系微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 液相色谱 -质谱
7、仪 ： 配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器 ； b) 固相萃取装置 ； c) 离心机 ； d) 移液器； e) 振荡器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 固相萃取 准确 移 取 血液 、 尿液 检 材 样 品 1mL 于具盖离心管中 ， 用 4 倍体积 pH 值为 8 的 氨 水 稀释 ， 振荡 10min， 8000r/min 离心 30min， 上清液 转移至 已 活化好的固相萃取柱中 ， 控制上清液过柱流速为 0.5mL/min，依 次 用 3mL 水、 3mL 甲醇淋洗， 弃 去淋洗液 ， 挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱 2m
8、in，精密吸取 3mL 甲酸 /水 /乙腈 （ 体积比 2:50:48）混合 溶液洗脱 ，收集洗脱液 ，用 有机系 微孔滤膜 过滤 ， 作为 检材样品提 取液，供仪器 分析。 7.1.1.2 质控样品的制备 取 等量相 似 基质的 空白样品 （若 无相似 基质空白 样品可用血液替代） 两 份 于具盖离心管中 ，一份 作 为空白样品 ， 一份添加 缩节胺或矮壮素 标准物 质 ， 作为添加样品 （添加样品浓 度为 20ng/mL） ， 与检材样 品平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 （ 液相色谱 -质谱 条件 ） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不
9、同样品等实际情况进行调整 ： GA/T 3 a) 色谱柱： BEH HILIC柱 （ 2.1mm50mm， 1.7m） 或 等效色谱柱 ； 注： BEH HILIC 柱 是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效 产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 柱温： 30； c) 流动相： A：乙腈 ， B： 5mmol/L甲酸铵水溶液（甲酸调 pH值至 3.5） ； d) 洗脱方式：梯度洗脱， 梯度见表 1； e) 流速： 0.5mL/min； f) 进样体积： 2L； 表 1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 m
10、L/min A B - 0.5 90% 10% 1.5 0.5 50% 50% 2.2 0.5 50% 50% 2.5 0.5 90% 10% 4 0.5 90% 10% g) 离子源：电喷雾电离源（ ESI） ； h) 检测方式 ： 正离子； i) 扫描方式： 多反应离子监测（ MRM） ； j) 雾化气、脱溶剂气：氮气； k) 碰撞气：氩气 ； l) 离子源温度： 150 ； m) 雾化气 温度： 350； n) 脱溶剂气流量： 750L/hr； o) 锥孔气流量： 50L/hr； p) MS参考条件（定性离子、定量离子、锥孔电压、碰撞能） 见表 2。 表 2 MS 质谱 条件 名称 定性
11、离子 对 定量离子 对 锥孔 电压 V 碰撞能 eV 矮壮素 122.058.8 122.058.8 34 18 122.062.9 18 缩节胺 114.058.0 114.098.2 44 20 114.098.2 20 7.1.3 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标 准工作溶液，按 7.1.2 的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 GA/T 4 7.2.1 样品提取 移取血液等液体 检材 样品 1.0mL 5.0mL两份 ， 按 7.1.1进行操作。 另取等量 相似 基质的空白样品 三 份， 其中 两份分别添加 缩节胺和 矮 壮素 标准 物质 ， 作为添加样品 （ 添 加样品
12、中目标物含量应为检材 样品 中目标物含量的 (10050)% ），另一份 作为空白样品，与检材 样品 平行 操作 ， 得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1.2规定的条件进行 。 7.2.2.2 进样 分 别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2的分析条件每个样品进样分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品 提取液平行进样 2 3 次 的 目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算 含量： 添样添 样添样 VM
13、A VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中 目标 物添加量，单位为微 克 （ g ） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差： %
14、10021 = X XXRD . (2) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2 两个检材 样品 平行定量测定的含量数值； X 两个检材 样品 平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 GA/T 5 8.1.1 阳 性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度比与浓度接近的 标准溶液相比，相对偏差不超过表 3规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 表 3 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子
15、丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 8.1.2 阴 性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 相关图谱 及检出限 参 见 附录 A。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验。 GA/T 6 A A 附 录 A （资料性附录） 缩节胺和矮壮素的 相关图谱 和检出限 A.1 缩节胺 的 分子结构图 缩节胺的分子结构 图 见图 A.1。 N+ 图 A.1 缩节胺分子结构 A.2 缩节胺液相色谱质谱 图 缩节胺液相色谱质谱图 见图 A.2。 图 A.2 缩节胺 液相色谱质谱图 A.3 矮壮素 的分子结构图 矮壮素的分子结构图见图 A.3。 GA/T 7 C l N + C l 图 A.3 矮壮素的分子结构 A.4 矮壮素 液相色谱质谱图 矮壮素 液相色谱质谱图 见图 A4。 图 A.4 矮壮素 液相色谱质谱图 GA/T 8 A.5 检出限 LC-MS 分析， 检出限为 10ng/mL（ g）。 _
