1、ICS 13.310 A 92 GA 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA/T 法庭科学 疑似毒品中甲卡西酮、卡西酮、 4-甲基甲卡西酮检验 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for methcathinone,cathinone and mephedrone in suspected drugs LC-MS - - 发布 - - 实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本部分按照 GB/T 1.1 2009给 出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件的发布机构不承担识
2、别这些专利的责任。 本部分由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC1）提出并归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心，福建省 公安厅 。 本标准主要起草人：常颖，高利生，李航麒 ， 郑珲，张春水，赵阳，贺剑锋，翟晚枫，黄星 ， 刘克 林，李彭 ，赵彦彪，郑晓雨，杨虹贤， 徐鹏，钱振华等。 GA/T 1 法庭科学 疑 似 毒品 中甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基 甲 卡西酮 检验 液相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭 科学 领域疑似 毒品中 甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基 甲 卡西酮 的液相色谱 -质谱 （ LC-MS） 定性 检验方法和
3、定量 检验 方法 。 本标准适用于 法庭 科学 领域疑似 毒品 体外 样品中 甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基 甲 卡西酮 的定性 分析和 定量 分析 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4883 2008 数据的统计处理和解释 正态样本离群值的判断和处理 GB/T 6682 分析 实验室用水规格和试验方法 JJF 1059.1 2012 测量不确定度评定与表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的
4、术语和定义适用于本 文件 。 4 原理 对疑似毒品样品中的 甲 卡西酮 （结构式参见 附 录 A 中 图 A.1）、卡西酮（结构式参见图 A.2）和 4- 甲基 甲 卡西酮（结构式参见图 A.3） 进行提取 。采 用 液相色谱 -质谱 检测，以保留时间 、 质谱特征离子 碎片峰 和 离子丰度比 作为定性判断依据 ， 用 外标单点 法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱 纯，试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 甲酸； d） 标准溶液： GA/T 2 1） 标准物质 溶液 ： 1.0m
5、g/mL甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基 甲 卡西酮等三种 标准物质溶液； 2） 标准工作溶液： 分别移取甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮 等三种 标准物质溶液适量 ， 用甲醇稀释，配制成 0.1g/mL的甲卡西酮、卡西酮和 4-甲基 甲 卡西酮标准工作溶液 。 5.2 材料 材料包括： a） 具盖 离心管； b） 有机微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器和设备 仪器和 设备 包括： a） 液相色谱仪（ LC） ： 配有二极管阵列（ DAD）或紫外检测器（ UV）； b） 液相色谱 -质谱仪（ LC-MS）： 配电喷雾离子源、 三重 四 极 杆质量分析器 ； c） 电子天平：分度值 d： 0
6、.01mg； d） 离心机； e） 涡旋振荡器； f） 10mL、 1mL和 100L移液器或移液管； g） 10mL瓶口移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 称取样品约 10mg于具盖离心管中 ，加入 10mL甲醇，密封并振荡 10min， 6000r/min离心 5min，离心 后取出适量上清液稀释，用 0.22m的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。 同时用 LC-MS分析标准工作溶液进行质量控制。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： C18柱 （
7、100mm 2.1mm, 1.8m）或其他等效柱 ； b） 流动相： A： 0.1%甲酸 溶液 ， B： 乙腈； c） 梯度程序： 见表 1； 表 1 梯度洗脱条件 时间 min A B 0 90% 10% 2.8 90% 10% GA/T 3 3.0 60% 40% 5.0 60% 40% 5.1 90% 10% d） 柱温： 35C； e） 进样体积： 5L； f） 流速： 0.3mL/min； g） 离子源：电喷雾离子源（ ESI）； h） 检测方式：正离子模式； i） 扫描模式：多反应监测 MRM； j） 雾化气、干燥气和碰撞气：均为高纯氮气； k） 雾化气压力： 25 psi； l）
8、 干燥气温度： 350 ； m） 干燥气流量： 10L/min； n） 定性定量离子和毛细管出口电压 Fragmentor，碰撞能量（ CE）见表 2，相关图谱参见附录 B。 表 2 质谱参考 条件 名称 定量离子对 定性离子对 毛细管出口电压 V 碰撞能量 eV 甲卡西酮 164.2 131.1 164.2 131.1 85 20 164.2 77.2 50 卡西酮 150.1 117.0 150.1 117.0 80 25 150.1 105.1 20 4-甲基甲卡西酮 178.2 160.2 178.2 160.2 85 10 178.2 145.1 20 7.1.2.2 进样 分别吸取
9、（空白）甲醇溶液、标准工作溶液和样品提取液适量 ，按 7.1.2.1条 件进样分析。 7.1.3 记录 分别记录标准物质和 样品中目标物 的 保留时间 、 定性离子对 及 离子丰度比 。 7.2 定量分析 7.2.1 含量范围预分析 预分析的目的在于要对样品中的 甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基 甲 卡西酮 含量进行初测，以计算准确定 量分析时所用样品的称量重量，从而保证准确定量时样品溶液中目标物的最终浓度尽可能接近所使用标 准工作液的浓度。 如果样品溶液中目标化合物的浓度过高，可适当减少样品称量重量，或将样品提取液用甲醇稀释后 进行分析。 GA/T 4 如果样品溶液中目标化合物的浓度过低，可
10、适当增加样品称量重量，或将样品提取液挥干、定容后 进行分析。 按照公式（ 1）计算样品中目标组分的百分含量。 ( )0 1 2 3 02 0100 0C A V V Vw A V m += （ 1） 式中： w 样品中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基甲卡西酮 )的百分含量 ， 用百分比（ %）表示 ； C0 标准工作液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )的浓度，单位为 毫克每毫升（ mg/mL） ； A 样品溶液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )的色谱峰面积值； V1 样品溶液初次定容体积，单位为 毫升（ mL） ； V2 从 V1中移取样品溶液的体积，单位为 毫
11、升（ mL） ； V3 将 V2稀释时加入甲醇的体积，单位为 毫升（ mL） ； A0 标准工作液中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )的色谱峰面积值； m 用于测定的样品的称量重量，单位为 毫克（ mg） 。 7.2.2 准确定量 分析 7.2.2.1 称量重量的计算 根据 预分析中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )含量测定结果，选择合适的定容体积、稀释倍数 （样品提取操作参数选择参见 附录 C），并按照公式（ 2）计算出样品称量重量 （ m） 。 0 100C V Dm w= % （ 2） 式中 ： m 称量重量，单位为 毫克（ mg） ； C0 标准工作液中 甲
12、卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )的浓度，单位为 毫克每毫升（ mg/mL） ； V 初次定容体 积， 单位为 毫升（ mL） ； D 稀释倍数； w 样品中 甲卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )的预分析百分含 量 ， 用百分比（ %）表示 。 7.2.2.2 样品提取 根据 7.2.2.1计算结果，平行称取样品 2份 于具盖离心管中 （如需 提供定量结果的不确定度，则平行 称取样品 6份） ，根据预分析含量范围，加入相应初次定容体积的甲醇。密封并振荡 10min，振荡均匀 后用 0.22m有机系微孔滤膜过滤 ；如果样品溶液需要稀释，移取 1mL样 品提取液至另一试管中，按
13、照稀 释倍数进行稀释定容，离心后取上清液 供 LC-MS分析。 7.2.2.3 含量计算 按照公式（ 1）计算样品中 甲 卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )百分含量。 7.2.2.4 相对相差计算 GA/T 5 对两个平行测定数据按照公式（ 3）进行相对相差（ RD）计算。 100%120X - XRD = X （ 3） 式中： 相对相差， 用百分比（ %）表示 ； 1、 2 两个样品平行定量测定的含量数值； 0 两个样品平行定量测定含量的平均值。 7.2.2.5 异常值检验 根据 GB/T 4883 2008， 按照公式（ 4）对 6份（ 或 5份）平行测定数据进行 格拉布斯（ G
14、rubbs） 可疑 值判别。 i0i X -XG= s （ 4） 式中 ： 可疑值 ； 0 平均值 ； 6 个（或 5 个 ）数据的单次测定标准差 。 Grubbs 统计量。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，样品中目标物的色谱峰保留时间与 浓度接近的定性 用 标准 工作 溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与 浓度接近 的定性用 标准 工作 溶液一致，且离子丰度比与浓度接近的 定性用 标准 工作 溶液相比，相对偏差不超过表 3规定的范围，空白 甲醇溶液 无干扰，则可判断样品中检出目标物。 表 3 离子丰度比的最
15、大允许偏差范围 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 阴性结果评价：样品未出现与 1ng/mL 定性用标准工作 溶液一致的色谱峰，空白 甲醇溶液 无干扰， 则可判断检材样品中未检出目标物。 LC-MS分析，检 出 限为 1ng/mL。 8.2 定量结果评价（外标法及内标法） 8.2.1 含量结果有效性 对两个平行测定数据进行相对相差（ RD）计算， 当 RD10%时，数据有效；当 RD 10%时，需要 重新检验。 GA/T 6 8.2.2 异常值检验 对 6份（ 5份） 平行测定数据进行 Grubbs可疑值判别， GiGn（ 95）
16、时 ，数据有效， GiGn（ 95） 时，应剔 除该数据， 但只能剔除 1个数据，否则本次测定无效，需要重新检验。 当测定次 数 n=6 时 ， G6（ 95） =1.822；当测定次数 n=5 时， G5（ 95） =1.672。 8.2.3 含量结果计算 以 2 份 样品含量测定的平均值作为含量结果 （ 如需提供定量结果的不确定度 ，则以 6 份或 5 份样品 含量测定的平均值作为含量结果）。 8.3 含量结果表述 定量检验完成后，检验结果应表述为：从样品中检出 甲 卡西酮 (卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮 )成分，其 中 甲卡西酮（ 卡西酮或 4-甲基 甲 卡西酮） 含量为 . %。 8
17、.4 测量不确定度的评定与表述 如需提供测量不确定度，测定结果的不确定度评定与表述按 JJF 1059.1 2012的规定执行。 GA/T 7 附录 A （ 资料性附录 ） 甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮结构式 A.1 甲卡西酮 结构式见图 A.1。 N H O 图 A.1 甲 卡西酮 结构式 A.2 卡西酮 结构式见图 A.2。 N H 2 O 图 A.2 卡西酮 结构式 A.3 4-甲基甲卡西酮结构式见图 A.3。 图 A.3 4-甲基甲 卡西酮 结构式 GA/T 8 附录 B （ 资料性附录 ） 甲 卡西酮 、卡西酮和 4-甲基甲卡西酮相关谱图 B.1 甲卡西酮的 质谱图 见图
18、 B.1。 a） 甲卡西酮的 MRM图谱 b） 甲卡西酮 164.2 77.2的提取 MRM图谱 c） 甲卡 西酮 164.2 131.1的提取 MRM图谱 图 B.1 甲 卡西酮质谱图 B.2 卡西酮的质谱图见图 B.2。 a） 卡 西酮的 MRM图 谱 b） 卡西酮 150.1 117的提取 MRM图谱 GA/T 9 c） 卡西酮 150.1 105.1的提取 MRM图谱 图 B.2 卡西酮质谱图 B.3 4-甲基甲卡西酮的质谱图见图 B.3。 a） 4-甲基甲卡西酮的 MRM图谱 b） 4-甲基甲卡西酮 178.2 160.2的提取 MRM图谱 c） 4-甲基甲卡西酮 178.2 145.1的提取 MRM图谱 图 B.3 4-甲基甲卡西酮质谱图 GA/T 10 附录 C （ 资料性附录 ） 外 标 定量法标准溶液制备操作参数 外标定量法样品提取操作参数选择见表 C.1。 表 C.1 外标定量法样品提取操作参数选择表 预分析含量 初次定容体积 mL 稀释倍数 标准溶液浓度 mg/mL 50% 100% 20 21 0.1 30% 50% 20 11 0.1 10% 30% 10 11 0.1 5% 10% 30 - 0.1 2% 5% 20 - 0.1 1% 2% 10 - 0.1 0.1% 1% 10 - 0.01 _
