1、ICS 13.310 A 92 GA 中华人民共和国公共安全行业标准 GA/T 法庭科学 疑似毒品中二亚甲基双氧安非他 明检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for methylene dioxyamphetamine in suspected drugs LC and LC-MS - - 发布 - - 实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化
2、技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本 标准 起草单位：公安部物证鉴定中心 、 陕西省公安厅 。 本 标准 主要起草人： 高利生 、张春水、郑珲、翟晚枫、 杨永登 、 常颖、赵阳、 贺剑锋、 刘克林、黄 星、王一、王 蔚 昕、赵彦彪、李彭 、杨虹贤、郑晓雨 。 GA/T 1 法庭 科学 疑似毒品中 二亚甲基双氧安非他明检验 液相色谱和液相色谱 -质谱法 1 范围 本 标准 规定了 法庭 科学领域疑似毒品中 二亚甲基双氧 安非他明 （ MDMA） 的 液相色谱 -质谱（ LC-MS） 定性 检验 方法 和液相色谱（ LC）定量 检验 方法 。 本 标准
3、 适用 于 法庭科学 领域疑似 毒品 样品 中 MDMA的定性 分析和 定量 分析 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4883 2008 数据的统计处理和解释 正态样本离群值的判断和处理 GB/T 6682 分析 实验室用水规格和试验方法 JJF 1059.1 2012 测量不确定度评定与表示 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界 定的术语和定义适用于本 文件 。 4 原理 对疑似毒品样品中的 MDM
4、A 进行提取。采用液相色谱 -质谱检测，以保留时间、质谱特征离子碎 片峰和 离子 丰度 比 作为定性判断依据；采用液相色谱检测，用标准曲线法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为 色谱 纯，试 剂包括： a） 乙腈； b） 甲醇； c） 甲酸 ； d） 水合磷酸二氢钠 ：分析纯 ； e） 浓磷酸； f） 三乙胺； GA/T 2 g） 内标物： 苯乙胺 ； h） 标准溶液： 1） 标准物质溶液： 1.0mg/mLMDMA标准物质溶液； 2） 标准工作溶液按实验需求分为以下三类： 定性用标准工作溶液：
5、移取 1.0mg/mL的 MDMA标准物质溶液适量 ，用甲醇稀释，配制 成 1ng/mL的 MDMA标准工作溶液； 其余浓度定性用标准工作溶液，按实验需求由 1.0mg/mL的 MDMA标准物质溶液稀释配制； 外标法用标准工作溶液：使用 1.0mg/mL MDMA标准物质溶液 ， 用甲醇逐级稀释 ，配 制 成 0.1mg/mL、 0.05mg/mL、 0.01mg/mL、 0.005mg/mL、 0.001mg/mL的 MDMA标准工 作溶液； 内标法用标准工作溶液： 称取 苯乙胺 500mg，用甲醇定容到 50mL容量瓶中，配制成 10.0 mg/mL苯乙胺 内标储备溶液（置于冰箱中保存，
6、有效期 12个月）。使用时用甲醇稀释， 配制成 0.1mg/mL的 苯乙胺 溶液 。内标法用标准工作溶液 制备方法参见附录 A中表 A.1， 移取相应体积的 1.0mg/mL MDMA标准物质溶液 、 0.1mg/mL苯乙胺 溶液至 1mL容量瓶 中，用甲醇定容至刻度， 配制 MDMA浓度分别为 0.1mg/mL、 0.05mg/mL、 0.01mg/mL、 0.005mg/mL、 0.001mg/mL的 MDMA标准工作溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖 离心管； b) 有机微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器和设备 仪器和 设备 包括： a） 液相色谱仪（ LC） ： 配有二极管阵
7、列（ DAD）或紫外检测器（ UV）； b） 液相色谱 -质谱仪（ LC-MS）： 配电喷雾离子源、 三重 四 极 杆质量分析器 ； c） 电子天平：分度值 d： 0.01mg； d） 离心机； e） 涡旋振荡器； f） 真空抽 滤 泵； g） 超声清洗仪； h） 10mL和 1mL移液器或移液管； i） 10mL瓶口移液器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 GA/T 3 称取样品约 10mg于具盖离心管中 ，加入 10mL甲醇，密封并振荡 10min， 6000r/min离心 5min，离心 后取出适量上清液稀释，用 0.22m的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析
8、。 同时用 LC-MS分析 定性用 标准工作溶液进行质量控制。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱 -质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a） 色谱柱： poroshell 120 C18 （ 3.0mm50mm,2.7m） 或其他等效柱 ； 注： poroshell 120 C18柱为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b） 流动相 ： A： 0.2%甲酸 溶液 ， B：甲醇； c） 梯度程序： 见表 1； 表 1
9、梯度洗脱程序 时间 min A B 0 80% 20% 3 74% 26% 7 40% 60% 10 23% 77% 10.01 5% 95% 10.5 5% 95% d） 流速： 0.3mL/min； e） 离子源：电喷雾离子源； f） 扫描方式：正离子模式； g） 毛细管 电压 ： 4000V； h） 干燥气： 10L/min； i） 干燥气温度： 350 ； j） 雾化气： 25psi； k） 后处理时间（平衡时间）： 3.5min； l） 后处理流速： 0.4mL/min； m） MDMA的 离子对和 Fragmentor电压 、 碰撞能量 (CE)： 见表 2。 表 2 质谱参考 条
10、件 名称 母离子 子离子 Fragmentor 电压 V 碰撞能量 eV MDMA 194.1 163.0 80 10 135.0 21 7.1.2.2 进样 GA/T 4 分别吸取（空白）甲醇溶液、 定性用 标准工作溶液和样品提取液适量，按 7.1.2.1条件进样分析。 7.1.3 记录 分别记录标准物质和 样品中目标物 的 保留时间 、 定性离子对 及 离子 丰度 比 。 7.2 定量分析 7.2.1 外标法 7.2.1.1 标准 工作曲线绘制 按照 7.2.1.4.1条件分析 外标法 标准工作溶液， 以标准工作溶液中目标物的峰面积值为纵坐标，目标 物浓度为横坐标， 绘制成线性范围为 0.
11、001mg/mL 0.1mg/mL的 MDMA标准工作曲线 。 7.2.1.2 标准工作曲线监测 采用 浓度为 0.005mg/mL和 0.1mg/mL的 外标法用 标准 工作 溶液作为监测样品，建立标准工作曲线时， 每个监测样品各分析 10次，计算 MDMA峰面积的平均值及标准偏差（ SD）。每次检验前先分析监测样 品， 监测样品的结果在平均值 3SD之间，标准工作曲线有效 ； 监测样品的结果 超出 平均值 3SD，应重 新绘制标准工作曲线。 7.2.1.3 样品提取 平行称取样品 2份各约 10mg于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度，则平行称取样品 6份）， 加入 10mL甲醇，
12、 密封并振荡 10min， 6000r/min离心 5min，离心后取出适量上清液稀释，用 0.22m的有 机系微孔滤膜过滤 ， 供 LC-DAD或 LC-UV分析。 可根据实验情况调整样品称量重量。 7.2.1.4 仪器检测 7.2.1.4.1 液相色谱仪 条件 以下为参考条件，按照本 方 法所获得的液相色谱图参见 附录 B，可根据不同品牌仪器和不同样品等 实际情况进行调整： a） 检测器：二极管阵列或可变波长紫外检测器； b） 色谱柱： ODS， (150mm4.6mm,5m） ； c） 柱温： 30 ； d） 缓冲液：磷酸缓冲溶液（ 36mmol/L， 0.25%三乙胺 v/v） 。 以
13、配制 2000mL 为例：称取水合磷酸 二氢钠固体 11.4g，量取浓磷酸 5mL 及 三乙胺 5mL，用 水定容至 2000mL 的容量瓶中，摇匀。 用真空抽滤泵 过滤 ，超声清洗仪 超声，即可使用； e） 流动相： A： 缓冲液 ， B： 乙腈 ； f）梯度程序： 见 表 3； GA/T 5 表 3 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 93% 7% 16 93% 7% g） 流速： 1.0mL/min； h） 检测波长： 205nm，带宽 ： 4nm。 7.2.1.4.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、 外标法用 标准工作溶液和样品提取液 适量 ，按 7.2.1.4.1条件进样分析。
14、 7.2.1.5 计算 7.2.1.5.1 含量计算 用标准工作曲线和公式（ 1）对样品进行定量，计算 Xi。 100% iiVXC m= （ 1） 式中： Xi 样品中目标物含量 ， 用百分比（ %）表示 ； Ci 从标准曲线上得到的目标物浓度，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； V 样品的定容体积 （含稀释倍数） ，单位为毫升（ mL）； m 样品的取样量，单位为毫克（ mg）。 7.2.1.5.2 相对相差计算 对两个平行测定数据按照公式（ 2）进行相对相差（ RD）计算。 100%120X - XRD = X （ 2） 式中： 相对相差， 用百分比（ %）表示 ； 1、 2 两个样品平
15、行定量测定的含量数值； 0 两个样品平行定量测定含量的平均值。 7.2.1.5.3 异常值检验 根据 GB/T 4883 2008， 按照公式（ 3）对 6份（ 或 5份）平行测定数据进行 格拉布斯（ Grubbs） 可疑 值判别。 i0i X -XG= s （ 3） 式中 ： 可疑值 ； 0 平均值 ； GA/T 6 6 个（或 5 个）数据的单次测定标准差 ； Grubbs 统计量。 7.2.2 内标法 7.2.2.1 标准 工作曲线绘制 按照 7.2.1.4.1 分析 内标 法用 标准工作溶液， 记录 目标物和 苯乙胺 的峰面积，以峰面积比值为纵坐标， 浓度比值为横坐标， 绘制成线性范围
16、为 0.001mg/mL 0.1mg/mL 的 MDMA 标准 工作曲线 。 7.2.2.2 标准工作曲线监测 采用 浓度为 浓度为 0.005mg/mL和 0.1mg/mL的 内标 法用 标准工作 溶液作为监测样品，建立标准工作 曲线时，每个监测样品各分析 10次，计算 MDMA与 苯乙胺 峰面积比值的平均值及 SD。每次检验前先分 析监测样品， 监测样品的结果在平均值 3SD之间， 标准工作曲线有效， 监测样品的结果 超出 平均值 3SD， 应重新绘制标准工作曲线。 7.2.2.3 样品制备 平行称取样品 2 份各约 10mg 于具盖离心管中 （如需提供定量结果的不确定度，则平行称取样品
17、6 份），加入 10mL甲醇，充分振荡，离心后移取上清液 100L 于 1mL容量瓶中，向容量瓶中加入 0.1mg/mL 苯乙胺 100L，用甲醇定容至刻度， 振荡均匀后 用 0.22m有机 系 微孔滤膜 过滤 ， 供 LC-DAD 或 LC-UV 分析。 可根据实验情况调整样品称量重量。 7.2.2.4 仪器检测 7.2.2.4.1 液相色谱仪 条件 同 7.2.1.4.1。 7.2.2.4.2 进样 分别吸取（空白）甲醇溶液、内标 法用 标准工作溶液和加入内标的样品提取液 适量 ，按 7.2.1.4.1条 件进样分析。 7.2.2.5 计算 7.2.2.5.1 含量计算 用标准工作曲线和公
18、式（ 4）对样品进行定量，计算 含量 Xi。 100% i VX k C m= 内 （ 4） 式中： Xi 样品中目标物含量 ， 用百分比（ %）表示 ； k 从标准曲线上得到的目标物和内标的浓度比； C 内 内标浓度，单位为毫克每毫升（ mg/mL）； V 样品的定容体积 （含稀释倍数） ，单位为毫升（ mL）； m 样品的取样量，单位为毫克（ mg）。 7.2.2.5.2 相对相差计算 GA/T 7 同 7.2.1.5.2。 7.2.2.5.3 异常值检验 同 7.2.1.5.3。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，样品中目标物的色谱峰保留时间与
19、 浓度接近的定性 用 标准 工作 溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与 浓度接近 的定性用 标准 工作 溶液一致，且离子丰度比与浓度接近的 定性用 标准 工作 溶液相比，相对偏差不超过表 4规定的范围，空白 甲醇溶液 无干扰，则可判断样品中检出目标物。 表 4 离子丰度比的最大允许偏差范围 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 阴性结果评价：样品未出现与 1ng/mL 定性用标准工作 溶液一致的色谱峰，空白 甲醇溶液 无干扰， 则可判断检材样品中未检出目标物。 LC-MS分析，检 出 限为 1n
20、g/mL。 8.2 定量结果评价（外标法及内标法） 8.2.1 含量结果有效性 对两个平行测定数据进行相对相差（ RD）计算， 当 RD10%时 ，数据有效； 当 RD 10%时 ，需要 重新检验。 8.2.2 异常值检验 对 6份（ 5份）平行测定数据进行 Grubbs可疑值判别， GiGn（ 95） ， 数据有效， GiGn（ 95） 时，应剔除 该数据，但只能剔除 1个数据，否则本次测定无效，需要重新检验。 当测定次数 n=6时 ， G6（ 95） =1.822；当测定次数 n=5时， G5（ 95） =1.672。 8.2.3 含量结果计算 以 2 份样品含量测定的平均值作为含量结果（
21、 如需提供定量结果的不确定度，则以 6 份或 5 份样品 含量测定的平均值作为含量结果）。 8.3 含量结果表述 定量检验完成后，检验结果应表述为：从样品中检出 MDMA成分，其中 MDMA含量为 . %。 8.4 测量不确定度的评定与表述 如需提供测量不确定度，测定结果的不确定度评定与表述按 JJF 1059.1 2012的规定执行。 GA/T 8 附录 A （资料性附录） 内标定量法 标准溶液制备操作参数 内标 法 用 标准 工作 溶液制备操作参数选择见表 A.1。 表 A.1 内标 定量法标准溶液制备操作参数选择表 浓度级别 1.0mg/mL MDMA 标 准 物质溶液 体积 L 0.1
22、 mg/mL 苯乙胺 溶液 体积 L 定容体积 mL MDMA 浓度 mg/mL 1 100 1 0.001 5 100 1 0.005 10 100 1 0.01 50 100 1 0.05 100 100 1 0.1 GA/T 9 附录 B （资料性附录） MDMA 相 关谱图 MDMA 的 液相色谱图和 特征离子质量色谱 图 见图 B.1 和图 B.2。 图 B.1 MDMA 液相色谱图 图 B.2 MDMA 特征离子质量色谱图 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0 . 0 1 2 . 5 1 5 . 0 m i n - 2 5 0 25 50 75 1 0 0 1 2 5 m A U 检测器 A C h 1 :2 0 5 n m M D M A /1 3 .2 1 0
