1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材 中扑尔敏 检验 气相色谱 和 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for chlorpheniramine in biological samples GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事
2、技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1） 提出并 归口。 本标准起草单位： 北京市公安局法医检验鉴定中心 、 公安部物证鉴定中心 。 本标准起草人：乔静、杨士云、常洪发、张大明 、于忠山、何毅、王芳琳 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材中扑尔敏检验 气相色 谱和气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材 （血、尿、肝、肾 、 胃及胃内容 等） 中扑尔敏的气相色谱（ GC） 定量 检验方法和 气相色谱 -质谱（ GC-MS） 定性定量 检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材中扑尔敏的定性 分析和 定量分析 。 其他 可疑 样品 中
3、 扑尔敏 的定性分 析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本 文件 的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件 。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件 。 GB/T 6682 分析实验室用水规格 和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本 文件 。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对 生物检材 进行提取、净化及浓缩 后 ， 采 用 气 相色谱 -质谱 法 定性 定量 ， 气相色谱法 定量， 以保留时间、质谱特征离子碎片峰和 相
4、对 丰度 比 作为定性 判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的 三 级水 。 除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括： a) 甲醇； b) 乙腈； c) 三 氯甲烷 ； d) 异丙醇； e) 氨水； f) 1.0mol/L氢氧化钠 溶液：称取 氢氧化钠 固体 4.0g，加入一定量的水溶解并 稀释 至 100mL； g) 磷酸盐缓冲液： 称 取磷酸二氢钠 （ NaH2PO42H2O） 6.0g，加入 水 450mL，用 1.0mol/LNaOH溶 液 调 节 至 pH=10.00.1后，定
5、容至 500mL； h) 氨水 /三氯甲烷 /异丙醇（体积比为 2:78:20）混合溶剂； GA/T 2 i) 甲醇 /乙腈 （体积比为 15:85） 混合溶剂 ； j) 固体碳酸盐缓冲剂：碳酸钠和碳酸氢钠按 1:1 比例混匀； k) 无水硫酸钠； l) 标准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶 液 ： 根据扑尔 敏标准物质纯度 和盐型换算后 ， 称取适量， 用甲醇配 制 1.0mg/mL 扑尔敏标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。 或采用市售标 准溶液 ； 2) 0.1mg/mL 标准工作 溶 液： 移 取 1.0mg/mL 的扑尔敏标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容
6、至 10mL， 密封，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 6 个月。 实验中所用其他 浓度的 标准工作溶 液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 固相萃取柱 ： C18 固相萃取柱或其他等效固相萃 取柱 ， 使用前依次用甲醇 5.0mL 及水 5.0mL 淋 洗，保持柱面湿润 。 6 仪器 和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱 联用 仪 ：配电子轰击源（ EI） ； b) 气相色谱仪 ：配火焰离子化检测器（ FID） ； c) pH 计 ； d) 振
7、 荡器 ； e) 电子天平 ； f) 浓缩器； g) 离心机 。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材 样品 1.0g 2.0g 于具盖离 心管中。 加入 甲醇 /乙腈 混合溶剂 8.0mL，振荡 5min， 8000r/min 离 心 10min， 分离 有机相；重复提取一 次，合并两次提取的有机相，用 无水硫酸钠（ 15.0g） 脱水 后， 置于浓缩器上浓缩至干， 残留物用甲醇 100L 溶解 ，供仪器分析。 7.1.1.2 固相萃取 GA/T 3 移取血液等液体
8、检材 样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材 样品 1.0g 2.0g于具盖离心 管中。 加入磷酸盐缓冲液 6.0mL（尿液中 仅 加 1g固体碳酸盐缓冲剂） ，混匀 ， 超声 15min， 8000r/min离 心 20min， 取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中 ， 控制流速为 0.5mL/min， 再用水 6mL淋洗， 控制 流 速 为 5.0mL/min； 挤干水 分 或离心或真空抽固相萃取柱 2min，用氨水 /三氯甲烷 /异丙醇 （体积比： 2/78/20） 混合溶剂 6mL洗脱，收集洗脱液 ，并 置于浓缩器上 50下浓缩至干， 残留物 用 100L甲醇 溶解
9、 ，供仪器 分析。 7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加扑尔敏标准物质，作为添加样品，添加样品的浓度为 1.0g/mL(g)，与检材样品 平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （ 气相色谱 -质谱仪条件 ） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS 毛细色谱柱 （ 30m0.25mm0.25m） 或等效 色谱 柱 ； 注： DB-5MS 毛细色谱柱是 Agilent 公司产
10、品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 150保持 1min，以 10/min速率升温至 280，保持 20min； c) 进样口温度： 280； d) 传 输线温度： 260； e) 载气：氦气； f) 电子轰击能量： 70eV； g) 离子源温度： 250； h) 倍增器电压：自动调谐值； i) 扫描方式：全扫描（ SCAN）； j) 溶剂延迟： 3min； k) 柱流量： 1mL/min； l) 进样方式：分流进样 ，分流比： 10:1； m) 质量范围： 40amu 45
11、0amu。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材 样品 1.0g 2.0g两份，按 7.1.1进行操作。 GA/T 4 另取等量相同基质的空白样品三份，其中两份添加扑尔敏标准物质作为添加样品（添加样品中目标 物含量应为检材样品中目标物含量的 (10050)% ），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作 ， 得 到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1
12、 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 检测器： FID； b) 色谱柱： DB-5 毛细色谱柱 (30m0.25mm0.25m)或等效 色谱 柱 ； 注： DB-5毛细色谱柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 c) 色谱柱温程： 150保持 1min，以 10/min速率升温至 280，保持 20min； d) 进样口温度： 280； e) 检测器温度： 280； f) 载气：氮气； g)
13、进样方式：分流进样； h) 分流比： 10:1； i) 柱流量： 1mL/min。 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱 条件 按 7.1.2.1 规定的条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液， 按 7.1.2.1 的 分析条件每个样品进样分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应 不少于 6 次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算 含量 记录各样品 提取液 平行进样 2 3 次 的 目标物质的 保留时间和 峰面积值，按公式 （ 1） 计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材 样品 中目标物
14、的含量 ，单位为微克每克 （ g/g） 或 微克每毫升（ g/mL)； A 样 案件样品中目标物峰面积 平均值 ； M 添 检材样品提取液 中标准物质 添加量，单位为微克 （ g） ； V 样 检材 样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积 平均值 ； M 样 检材 样品的取样量 ，单位为克 （ g） 或 毫升（ mL） ； V 添 添加样品的定容体积 ，单位为毫升 （ mL） 。 GA/T 5 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品 中目标物 含量，按公式 （ 2） 计算相对相差： %10021 = X XXRD . (2
15、) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两个 检材 样品平行定量测定的含量数值； X 两个 检材 样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液 一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰， 则可判断检材样品中检出目标物。 相关 图谱 参见附录 A。 表 1 特征离子丰度比的最大允许相对
16、偏差范围 相对离子丰度 50% 20% 50% 10% 20% 10% 最大允许 相对 偏差 10% 15% 20% 50% 8.1.2 阴 性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱 峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物 。 方法检出限参见附录 A。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验 。 GA/T 6 附 录 A （资料性附录） 扑尔敏的 相关实验数据和图 谱 A.1 扑尔敏
17、在血液中的回收率 扑尔敏在血液中的回收率 见表 A.1。 表 A.1 扑尔敏在血液中的回收率 操作方法 回收率 2mL 血液添加 2g 扑尔敏， 15%甲醇 /乙腈提取 80.4% 2mL 血液添加 2g 扑尔敏， C18 柱固相提取 91.4% A.2 扑尔敏检出限 本方法扑尔敏检出限为 0.1g/mL(g)。 A.3 扑尔敏 的 质谱图 扑尔敏的质谱图见图 A.1。 (mainlib ) (+) -Chlorphen iramin e 10 30 50 70 90 110 130 150 170 190 210 230 250 270 290 0 50 100 15 30 42 58 63 72 78 89 103 115 125 139 152 167 180 203 216 230 274 ClN CL N N 图 A.1 扑尔敏质谱图 （ 特征离子： 203（基峰） ， 58， 167， 72） _
