1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中地芬尼多 检验 气相色谱和 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for diphenidol in biological samples GC and GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术
2、委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位：中国人民公安大学、公安部物证鉴定中心、山西医科大学。 本标准 主要 起草人：何洪源、于忠山、廉洁、贠克明、尉志文。 GA/T 1 法庭科学 生物检材中地芬尼多 检验 气相色谱和 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物 检材 （ 血、尿、肝、肾 、 胃及胃内容等 ） 中地芬尼多的气相色谱（ GC） 检验方法和 气相色谱 -质谱（ GC-MS）检验方法。 本标准适用于 法庭科学生物 检材 中 地芬尼多 的 定性 分析和 定量分析 。 其他可疑样品 中地芬尼多的 定性分析和定量分析可参照使用。
3、 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品 作对照，按平行操作的要求， 对 生物检材 进行 提取、净化及浓缩后， 采用 气 相色谱 法 定 量 、气相色谱 -质谱 法 定性定量 ，以保留时间 、 质谱特征离子碎片峰 和 相对丰度 比 作为定性 判断依据； 以 峰面积 为依据 ，
4、 采 用外标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试 剂包括 ： a) 无水乙醇； b) 甲醇； c) 二氯甲烷； d) 乙酸乙酯； e) 磷酸二氢钠； f) 磷酸氢二钠； g) 硼砂； h) 氢氧化钠； i) 磷酸盐缓冲液（ pH 值 6）：取磷酸氢二钠（ Na2HPO412H2O）试剂 8.812g，磷酸二氢钠 （ NaH2PO42H2O）试剂 27.37g，加入 200mL 水溶解，稀释至 1000mL； GA/T 2 j) 硼砂 -氢氧化钠缓冲液（ pH 值 10）：取硼砂（ N
5、a2B4O710H2O）试剂 2.38g, 氢氧化钠试剂 0.86g, 加入 100mL 水溶解，并用 水稀释至 500mL； k) 标准 溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据地芬尼多标准物质的纯度， 称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 地芬尼多标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标 准溶液 ； 2) 0.1mg/mL 标准 工作 溶 液：移取 1.0mg/mL 的地芬尼多标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3 个月。实验中所用 其他 浓度的标准 工作 溶 液均由 1.0mg/mL 标准物
6、质溶液用甲醇稀释得到； 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管； c) 固相萃取柱： Oasis HLB 固相萃取柱或 其他 等效固相萃取柱 ， 使用前依次用甲醇 、 水活化 。 注： Oasis HLB 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6 仪器和设备 仪器和设备 包括 ： a) 气相色谱仪：配有氮磷检测器（ NPD）； b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 移液器；
7、d) 电子天平； e) 超声振荡器； f) 振荡器； g) 离心机； h) 浓缩 器 。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g于具盖离心 管中，加入乙酸乙酯或二氯甲烷 5.0mL 10.0mL，振荡 5min， 8000r/min离心 10min，分离有机相 ， 重复 提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 50浓缩至干，残留物用无水乙醇 50L 100L溶解， 作为检材样品提取液供仪器分析 。 7.1.1.2 固相 萃取 移取血液等液体检材样品
8、 1.0mL 2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g 于具盖离 心管中 ，加入 pH 值 6 的 磷酸缓冲液 5mL 10mL， 混匀 ，超声 15min， 8000r/min 离心 20min，取上清 GA/T 3 液 转移至 活化好 的 固相萃取柱中， 控制上清液过柱流速为 0.5mL/min， 再以 3mL 5% 甲醇 /水 (体积比 5:95) 淋洗；用 4mL 二氯甲烷洗脱，收集洗脱液置于 50浓缩仪上吹干， 残留物 用 50L 100L 无水乙醇 溶 解， 供仪器分析。 7.1.1.3 质控样品 制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替
9、代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加地芬尼多标准物质， 作为添加样品，添加样品的浓度为 1.0g/mL(g)， 与检材样品 平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 （ 气相色谱 -质谱 ） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS 柱（ 30m0.32mm0.25m）或等效色谱柱； 注： DB-5MS 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等
10、效产品。 b) 色谱柱温程： 100保持 2min，以 15/min 速率升温至 280，保持 17min； c) 进样口温度： 280； d) 传输线温度： 230； e) 离子源温度： 200； f) 载气：高纯氦气； g) 柱流量： 1mL/min 2mL/min； h) 分流比： 5:1 50:1； i) 质量扫描范围： 40amu 450amu； j) 扫描方式：全扫描（ Scan）。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白 和添加样品提取液 及 标准工作溶液，按 7.1.2.1 的 分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提 取 移取血液等液体检材样品 1.0mL
11、 5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 5.0g两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加 地芬尼多 标准物质作为添加样品（添加样品 中目标物含量应为检材样品中目标物含量的 (10050)% ），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-1 柱（ 30m0.32mm0.25m）或等效色谱柱； GA/T 4 注： DB-1 柱
12、是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 200保持 1min，以 10/min 速率升温至 280，保持 10min； c) 进样口温度： 280； d) 检测器温度： 300； e) 载气：氮气； f) 分流比： 5:1 50:1； g) 柱流量： 1.0mL/min 2.0mL/min。 7.2.2.1.2 气相色谱 -质谱 条件 按 7.1.2.1 规定的 条件分析。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液 及 标准工作溶液，按
13、7.2.2.1 的 分析条件每个样品进样分析 2 3 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算 含量 记录各样品提取液平行进样 2 3 次 的 目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中 目标物 添加量，单位为微克 （ g） ； V 样 检材 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取
14、液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品 中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差： . (2) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比 （ %）表示； X1、 X2 两 份 检材 样品平行定量测定的含量数值； 两 份 检材 样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 %100X XXRD 21 = X GA/T 5 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的
15、色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差 在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征 离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判 断检材样品中检出目标物。 表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴 性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色 谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 方法检出限参见附录 A。 8.
16、2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目 标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验 。 地芬尼多相关材料及谱图参见附录 A。 GA/T 6 附 录 A （资料性附录） 地芬尼多 相关资料及谱图 A.1 地芬尼多的相关资料 （ Diphenidol） 化学名 : 1,1-二苯基 -4-(1-哌啶基 )-1-丁醇盐酸盐 ,分子式 : C21H27NO,分子量 : 309.45，化学结构式见图 A.1。 地芬尼多 具有镇吐和抗眩晕作用，多用于治疗椎基底动脉供血不足 、 美尼尔综合症 、 颈性眩晕等， 每片
17、 25mg。该药从胃肠道吸收， 1.5-3h 可达血浆浓度高峰。 单剂顿服 100mg 后 2h 达峰浓度为 0.35g/mL；而顿服 1200mg（ 48 片） 后的峰浓度可达 3.97g/mL。 图 A.1 地芬尼多 化学结构式 A.2 地芬尼多 的相关谱图 地芬尼多的相关谱图 见 A.2 和 A.3。 图 A.2 地芬尼多的总离子流图 图 A.3 地芬尼多的质谱图 A.3 检出限 GC-MS分析 ， 血液中地芬尼多的 检出限 200ng/mL。 50 1 00 1 50 2 00 2 50 3 00 3 50 4 00 4 50 5 00 0 50 1 00 % 98 1 27777041 2 32 3 091 65 2 071 78 2 93 3 41 3 55 4 16 4 892 52 4 393 89 4 54 4 99 _ GA/T 7
