1、 HHP ICS 13.310 A 92 中 华人民 共和国 公共安 全行业 标准 GA GA/T 法庭科学 生物检材 中西玛津 和 莠去津 检 验 气相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for simazine and atrazine in biological samples GC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术
2、委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位 ：北京市公安局法医检验鉴定中心 、公安 部 物证鉴定中心 。 本标准起草人：乔静、杨士云、杨继锋、王燕燕 、何毅、于忠山、王芳琳 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材中西玛津和莠去津检验 气相色谱 -质谱法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中 杂环 类除草剂西玛津、莠去 津的气相色谱 -质谱（ GC-MS）检验方法。 本标准适用于 法庭科学 生物检材 中杂环类除草剂西玛津、莠去津的定性定量分析。 其他 可疑 样品 中 西玛津、莠去津的定性分析和定量分析可参照使用
3、。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改 单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品 作对照，按平行操作的要求， 对生物检材进行 提取、净化及浓缩， 采 用 气相 色谱 -质谱法 定性 定量 ，以保留时间 、 质谱特征离子碎片峰 和 相对丰度 比 作为定性判断依据； 以峰面积 为依据，采用外标法进行定量分析。 5
4、 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682中规定的三级水， 分析中使用的试剂 均为分析纯， 试剂 包括： a) 无水硫酸钠； b) 三氯甲烷 ； c) 乙醚； d) 乙腈； e) 乙醇； f) 标 准溶液： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液： 根据 西玛津和莠去津 标准物质的纯度， 各称取适量， 分别 用 三 氯甲烷 配制 1.0mg/mL 西玛津标准物质溶液 ， 用 甲醇 配制 1.0mg/mL 莠去津标准物质 溶液 ， 置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。 或采用市售标准溶液 ； 2) 10.0g/mL 混合 标准 工作溶液 ：分别移取 1.0mg/mL 的 西玛
5、津 和 莠去津 标准物质溶液 各 100.0L， 用甲醇定容至 10mL， 混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 6 个月。实 验中所用其 他 浓度的混合标准工作溶液 均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。 GA/T 2 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管； b) 具塞玻璃试管。 6 仪器 和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱仪：配电子轰击源（ EI）； b) 振荡器； c) 电子天平； d) 离心机； e) 移液器； f) 浓缩器。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1
6、 液液 萃取 移取血液等液体 检材 样品 1.0mL 5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体 检材 样品 1.0g 5.0g于具盖离心 管中。 加入 三氯甲烷 /乙醚（ 体积比 4:6） 混合溶剂 8.0mL 20.0mL，振荡 5min， 4000r/min离心 10min， 分离 有机相；重复提取一次， 合并 两次提取的有机相， 用 15.0g无水硫酸钠 脱水 ，置于浓缩器上 50下 浓缩至干，残留物 用三氯甲烷 /乙腈（ 体积比 4:1）混合溶剂 200L溶解 ，供仪器分析。 7.1.1.2 质控 样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份
7、作 为空白样品，一份添加西玛津和莠去津标准物质，作为添加样品（添加样品的浓度为 0.5g/mL(g)），与 检材样品平行操作，得到空白 样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器 条件 （气相色谱 -质谱条件） 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色 谱柱： DB-5MS 毛细色谱柱 (30m0.25mm0.25m)， 或等效色谱柱； 注： DB-5MS 毛细色谱柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等
8、效产品。 b) 色谱柱温程 ： 150保持 1min，以 10/min速率升温至 200， 再以 2/min速率升温至 210， 最后 以 20/min速率升温至 280， 保持 10min； c) 进样口温度： 270； d) 传输线温度： 260； GA/T 3 e) 载气：氦气 ； f) 电子轰击能量： 70eV； g) 离子源温度： 250； h) 倍增器电压：自动调谐值； i) 扫描方式：全扫描（ SCAN） ，西玛津定量离子（ m/z， 201），莠去津定量离子（ m/z， 200） ； j) 溶剂延迟： 3min； k) 柱流量： 1.0mL/min； l) 进样方式：分流进样，
9、分流比： 10:1； m) 质量范围： 40amu 450amu。 7.1.2.2 进样 分别吸取各检材 、空白 和添加样品提取液、 标准工作溶液，按 7.1.2.1分析条 件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 5.0g两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加西玛津和莠去津标准物质作为添加样品（添 加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的 (10050)% ），另一份作为空白样品，与检材样品 平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器
10、 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 同 7.1.2.1。 7.2.2.2 进样 分别吸取各检材样品、 空白样品和添加样品提取液、 标准工作溶液，按 7.1.2.1的 分析条件每个样品 进样分析 2 3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应 不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算 含量 记录各样品 提取液 平行进样 2 3 次 的 目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材 样品中目标物的含量 ，单位为微克每克 （ g/g） 或 微克每毫升 （ g/mL） ； A 样 检材
11、样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中标准物质添加量 ，单位为微克 （ g） ； V 样 检材 样品的定容体积 ，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品的取样量 ， 单位为克 （ g） 或 毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积 ，单位为毫升 （ mL） 。 GA/T 4 7.2.3.2 计算 相对相差 记录 两 份平行操作的 检材样品中目标物的 含量， 按公式 (2)计算相对相差： %1 0 021 = X XXRD . (2) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两个 检材
12、样品平行定量测定的含量数值； X 两个 检材 样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳 性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与 标准溶液中目标物 一致（相 对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与 标准溶液中目标物 一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准 物质 相比，相对偏差不超过表 1 规定的范 围， 空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 相关 谱 图参见附录 A，方法 回收率 及检出限数据参 见 附录 B。 表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范
13、围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴 性结果评价 阴性结果评价：检材样品未 出现与 标准溶液 中目标物一致的色谱峰，且添加样品中出现与 标准溶液 中目标物 一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验 。 西玛津、莠去津的理化性质 及毒性 参 见附录 C。 GA/T 5 附 录 A （资料性附录） 莠去津和西玛津
14、 的相关图谱 A.1 莠去津和西玛津 的 总离子流色谱图 血液中提取莠去津（ tR=6.93min）和西玛津（ tR=6.86min）总离子流色谱图见图 A.1。 R T : 5 . 8 1 - 7 . 9 6 6 . 0 6 . 2 6 . 4 6 . 6 6 . 8 7 . 0 7 . 2 7 . 4 7 . 6 7 . 8 T i m e ( m i n ) 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 R e la ti ve A b u n d a n ce 0 20 40 60 80 100 6 . 3 4 7 . 3 5 6 . 7 66 . 3 7 6
15、 . 2 85 . 9 7 6 . 9 3 7 . 0 5 7 . 4 05 . 8 4 6 . 1 5 7 . 9 36 . 7 3 6 . 5 16 . 0 5 7 . 7 47 . 2 87 . 2 0 7 . 6 97 . 5 1 6 . 9 3 6 . 8 6 6 . 9 9 7 . 0 6 7 . 7 46 . 6 6 7 . 8 57 . 2 85 . 9 2 7 . 5 2 7 . 6 15 . 9 9 6 . 3 96 . 0 9 6 . 2 8 7 . 4 56 . 6 0 6 . 8 6 6 . 9 2 7 . 0 05 . 8 6 6 . 3 5 7 . 8 36 .
16、2 8 7 . 0 9 7 . 2 76 . 1 3 6 . 5 56 . 4 7 7 . 4 5 7 . 5 96 . 0 2 7 . 7 26 . 6 0 6 . 7 2 N L : 1 . 9 7 E 7 T I C F : M S 20111209- 1a N L : 4 . 7 1 E 5 m / z = 1 9 9 . 5 0 - 2 0 0 . 5 0 F : M S 20111209- 1a N L : 2 . 6 0 E 5 m / z = 2 0 0 . 5 0 - 2 0 1 . 5 0 F : M S 20111209- 1a 图 A.1 血液中提取莠去津（ tR=6.
17、93min）和西玛津（ tR=6.86min）总离子流色谱图 A.2 西玛津质谱图 西玛津质 谱图见图 A.2。 GA/T 6 20111209- 1a # 576 R T : 6 . 8 4 AV: 1 SB: 12 6 . 7 6 - 6 . 8 2 , 6 . 8 7 - 6 . 9 0 N L : 1 . 2 9 E 5 T: + c F u l l m s 4 0 . 0 0 - 4 5 0 . 0 0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 m / z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 R e la ti ve A b
18、u n d a n ce 201 44 186 173 203 68 96 158 109 138 14512393 62 91 207 80 22145 236 265 449277 331 429294 339 405374 图 A.2 西玛津质谱图 A.3 莠去津质谱图 莠去津质谱图见图 A.3。 20111209- 1a # 587 R T : 6 . 9 3 AV: 1 SB: 19 6 . 7 5 - 6 . 8 9 , 7 . 0 0 N L : 4 . 6 0 E 5 T: + c F u l l m s 4 0 . 0 0 - 4 5 0 . 0 0 50 100 150 2
19、00 250 300 350 400 450 m / z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 R e la ti ve A b u n d a n ce 200 58 215 68 92 173 172 217 122 13269 104 44 158 175 91 187 218 53 232 281261 394343 435329296 372 406 443 图 A.3 莠去津质谱图 GA/T 7 附 录 B （资料性附录） 西玛津、莠去津的 相关实验数据 B.1 西玛津、莠去津在血液中的回收率 及检出限 西玛津、莠去津在血液中的回收率见表 B.1。 本方
20、法血液中西玛津、莠去津的检出限分别为 0.15g/mL（ S/N=10）、 0.10g/mL（ S/N=15）；定 量限为 0.25g/mL（西玛津 S/N=17、莠去津 S/N=38）。 表 B.1 2mL血液添加 两 种除草剂的提取回收率和相 对标准偏差 添加量 g/mL 西玛津 莠去津 回收率 RSD 回收率 RSD 0.25 75.8% 5.35% 72.9% 4.22% 1.0 86.2% 2.95% 82.1% 4.47% 2.0 89.9% 2.81% 88.1% 3.13% B.2 西玛津、莠去津在尿液中的回收率 西玛津、莠去津在尿液中的回收率 见表 B.2。 表 B.2 2m
21、L尿液添加 两 种除草剂 1.0g的提取回收率和相对标准偏差 化合物名称 回收率 RSD 西玛津 82.0% 2.05% 莠去津 79.4% 3.22% B.3 西玛津、莠去津在肝脏中的回收率 西玛津、莠去津在肝脏中的回收率见表 B.3。 表 B.3 2g肝脏添加 两 种除草剂 1.0g的提取回收率和相对标准偏差 化合物名称 回收率 RSD 西玛津 67.9% 5.26% 莠去津 - - 注： 在本实验的仪器条件下，莠去津与肝脏中的杂质不能分开，因此不能计算出回收率。 GA/T 8 附 录 C （资料性附录） 西玛津、莠去津的 中毒 诊断 参考 资料 C.1 西玛津、莠去津 的 理化性质 莠去
22、津（ Atrazine）和西玛津（ Simazine）为杂环类（三氮苯类）除草剂。莠去 津化学式为 C8H14ClN5， 分子量 215，易溶于 三氯甲烷 、甲醇和乙醚中；西玛津化学式为 C7H12ClN5，分子量 201，易溶于 三氯 甲烷 、乙酸乙酯、乙醚和甲醇中。二者在酸性、碱性介质中都易分解。 注： 配制 0.5mg/mL 标准物质溶 液时，只有 三氯甲烷 才能溶解西玛津。 C.2 西玛津、莠去津 的 毒性 西玛津和莠去津是选择性内吸传导型苗前、苗后除草剂，主要以植物根部吸收并传导到分生组织和 叶面，干扰光合作用使杂草致死。它防除一年生禾本科杂草和阔叶杂草，对多年生杂草也有一定的抑制 作用。 此两种除草剂对人畜低毒，使用广泛 ，常用于破坏农田、果树等投毒案件，也有由于意外事故、自 杀等原因引起人、畜中毒的。 _
