1、ICS 65.040.10 B 40 曲 靖 市 地 方 标 准 DB 5303/T 6.4 2013 滇陆猪综合标准 第 4 部分：滇陆猪人工授精操作规程 2013 - 06 - 01 发布 2013 - 09 - 01 实施 曲靖市市场监督管理局 发布 DB5303/T 6.4 2013 I 前 言 DB5303/T 6 滇陆猪综合 标准 分为 5个部分： 第 1部分：滇陆猪猪场选址及建设规程； 第 2部分：滇陆猪核心群、扩繁群选育标准； 第 3部分：滇陆猪饲养管理规程； 第 4部分：滇陆猪人工授精操作规程； 第 5部分：滇陆猪兽医防治规程。 本部分为 DB5303/T 6 的第 4部分。
2、 本 部分 按照 GB/T 1.1-2000标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写规程的规定 编写 。 本 部分 由云南省畜牧兽医科学院、陆良县滇陆猪研究所提出。 本部分由曲靖市市场监督管理局归口。 本 部分 起草单位： 云南省畜牧兽医科学院、陆良县畜牧兽医局、陆良县滇陆猪研究所和陆良县种猪 试验场。 本 部分 起草人： 陈吉红、张桂生、魏斌、卢建富、孙林坤、高肖志、郭建常、孙剑敏、韩学能、韩 贵平。 DB5303/T 6.4 2013 1 滇陆猪综合标准 第 4 部分：滇陆猪人工授精操作规程 1 范围 DB5303/T 6的本部 分 规定了滇陆猪人工授精技术的实验室与采精室建设、种公猪
3、的调教与采 精、稀 释液的配制、精液的稀释、精液的品质检查、精液的保存和运输 及母猪的输精技术操作规程。 本 部分 适用于滇陆猪人工授精技术操作。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于 文件 。 2.1 滇陆猪 利用乌金猪、太湖猪两个中国优良地方猪种和长白猪、大约克两个国外著名猪种为素材杂交选育而 成的新品种，具有产仔多、肉质好、生长速度较快、母性强、耐粗抗逆、瘦肉率高等优良特性。 2.2 供精公猪 必须达到供精种公猪管理规范要求及精液质量评定标准的滇陆公猪。 2.3 原精液 具有种用价值，体型外貌和生产性能符合种用要求、三代系谱资料齐全、体质健康的滇陆种公猪采 集后未经稀释处理的精液。 2.
4、4 精子活力 在 37环境下直线前进运动精子占总精子数的百分率。 2.5 直线前进运动精子数 精液中呈直线前进运动精子的总数。 2.6 精子畸形率 DB5303/T 6.4 2013 2 畸形精子占总精子数的百分率。 3 实验室技术操作规程 3.1 保证每一瓶精液的活力不低于 0.7, 72小时之内保存活率不受影响。 3.2 实验室要求整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次 。 3.3 实验室分成干燥区和潮湿区，干燥区用于稀释液的配制和精液的检查、稀释、分装，潮湿区安放 水槽，用于清洗器械和制备双蒸水。 3.4 非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准进入实验室 。 3.5 所有仪
5、器设备使用前要仔细阅读说明书后，由专人按操作规程使用和维护保养；特别是高压蒸气 灭菌器、双蒸馏器使用时要注意人身安全 。 3.6 各种电器设备按其要求选择适应插座，除冰箱、精液保存箱、恒温培养箱等外，电器要求人走断 电，干燥箱无人时设定温度不高于 100 。 3.7 物品、器皿的清洗、消毒方法：所有器皿以洗洁精或洗衣粉清洗干净，再以蒸馏水漂洗， 60 干燥（玻璃用品干燥温度可高于 100 ）后，以锡纸包扎器皿开口，玻璃器皿 180 、 1小时进行干热 灭菌，非耐热器皿、用具以高压灭菌器 121 、 20分钟湿热灭菌 。 3.8 稀释液的配制、精液检查、稀释、分装严格按照人工授精操作规程进行。
6、3.9 实验室仪器设备保持清洁卫生：实验室内使用的仪器设备，如显微镜、 干燥箱、水浴锅、 17 精 液保存箱、冰箱、 37 恒温板、电子天平等，必须保持清洁卫生，显微镜镜头（目镜和物镜），每 2 周用二甲苯浸泡一次，保持清洁 。 3.10 实验室一般要求与采精室相邻，以方便操作，墙上设一高 40 cm宽 60 cm窗口与采精室相通， 窗口二侧设透明活动窗，窗内温度控制在 20 。 采精室与实验室之间的传递口的两测窗只有在传递 物品时才能按先后顺序开启使用 。 3.11 实验室地板、实验台保持干净清洁 。 3.12 下班离开实验室前必须检查电源、水龙头、门、窗是否关闭好，做到万无一失方可离开实验
7、室， 确保安全 。 3.13 防火防盗 ，注意安全。 4 采精室管理规程 4.1 采精室面积大约 10 m2 15 m2，地面要求平整、防滑、清洁。 4.2 采精室中间放采精架，采精架的后方地面放置防滑垫（或麻袋）。左右两边用直径 10 cm钢管隔 开作为安全区，钢管高 0.75 m，距墙壁 0.6 m，间隔 0.3 m。 4.3 每次采精后须清洗地面，特别清除精液胶体，采精室内安装紫外线灯，下班时开启，通宵照射消 毒。 5 疫病控制 5.1 疫病检测 定期检测猪瘟、口蹄疫、乙型脑炎、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸道综合症、细小病毒病等传染性疾病， 及时淘汰隐形带毒（菌）的种公猪。 5.2 免疫注射
8、DB5303/T 6.4 2013 3 根据当地传染病流行状况，制定相应的免疫程序，认真搞好免疫注射。 5.3 定期驱虫 每年春秋各 1次，共 2次。 6 种公猪的调教规程 6.1 后备公猪 7月龄开始调教，每天一次，每次 15 分钟 20分钟。调教成功后连续采精 2 3次，隔 天采精，以形成条件反射。 6.2 对种公猪进行调教时做到胆大心细、动作轻柔、环境安静，禁止粗暴对待种公猪，避免形成不良 的条件反射。 6.3 用发情母猪尿液，洒在台畜背部，刺激公猪性欲，促使其爬跨。 6.4 让新公猪经观察其它公猪的爬跨动作，有利于调教。 6.5 让调教公猪爬跨发情母猪，以刺激公猪的性欲，待公猪阴茎充分
9、勃起，性欲十分旺盛时 将母猪赶 走，引导公猪爬跨台畜。 6.6 经过上述方法训练调教仍不能爬跨的，则放弃对该公猪的调教。 6.7 达到调教日龄的公猪如遇长距离运输、生病则不能调教，待身体恢复后才可以调教。 7 采精的操作规程 7.1 采精员一手带双层手套，另一手持 37 保温杯 (内装 1次性食品袋 )用于收集精液。 7.2 饲养员将待采精的公猪赶至采精栏，用 0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部和包皮，再用温水（夏天用 自来水）清洗干净，避免药物残留对精子的伤害。 7.3 采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮部，刺激其爬跨假台畜。 7.4 公猪爬跨假台畜并逐步伸出阴茎，脱去外层手套，将公猪阴茎龟头
10、导入空拳。 7.5 用手（大拇指与龟头相反方向）紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头，顺其向前冲力将阴茎的 “ S” 状 弯曲拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可射精。 7.6 用四层沙布过滤收集精液于保温杯内的一次性食品袋内，最初射出的少量精液含有尿液精子很少， 可以不必接取，公猪分 2 3 个阶段射精，接取原精液须等到公猪射精完毕，历时达 5分钟 7分钟。 7.7 采精员注意安全，一旦公猪出现攻击行为，采精员立刻逃至安全角。 7.8 下班之前彻底清洗采精栏。 7.9 采精期间不准欧打公猪，防止出现性抑制。 7.10 采精频率：成年公猪每周 2次，青年公猪（ 1岁左右）每周 1次。最好固定每头公猪
11、的采精频率。 8 稀释液的配制和精液的稀释操作规程 8.1 稀释液的配制操作规程 8.1.1 配制稀释液的药品要求选用分析纯试剂，对含有结晶水的试剂要按摩尔浓度进行换算（如含水 葡萄糖和无水葡萄糖）； 8.1.2 按稀释液配方，用称量纸、电子天平准确称量药品； 8.1.3 按 1 000 mL、 2 000 mL剂量称量稀释粉，置于密封袋中； 8.1.4 使用前将称量好的稀释粉溶于定量的双蒸水中，用磁力搅拌器搅拌助其溶解； DB5303/T 6.4 2013 4 8.1.5 用滤纸过滤，以尽可能除去杂质； 8.1.6 用 1LN稀盐酸或 1LN氢氧化钠调整 BTS稀释液的 pH值为 7.2(6
12、.8 7.4)左右 ,渗透 压为 330 mOsm； 稀释液配好，及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、经手人等； 8.1.7 要认真检查已配制好的稀释液成品，发现问题及时纠正； 8.1.8 液态状稀释液冰箱 4 保存，不超过 24小时，超过有效贮存期的变质稀释液要废弃。 8.2 精液的稀释操作规程 8.2.1 精液采集后尽快稀释，原精液贮存不超过 30分钟。 8.2.2 稀释液与精液要求等温，两者温差不超过 1 ，以精液温度为标准来调节稀释液的温度，绝不 能反过来操作。 8.2.3 稀释时，尽量减少精液的转移，将稀释液沿杯 (瓶 )壁缓慢 加入到精液中，然后轻轻摇动或用消 毒玻璃棒搅拌，使
13、之混合均匀。如作高倍稀释时，先进行低倍稀释（ 1： 1-2），稍待片刻后再将余下的 稀释液沿壁缓慢加入，以防造成“稀释打击”。 8.2.4 稀释倍数的确定：活率 0.7的精液，按每个输精剂量含 40亿个总精子，输精量为 80 mL 90 mL 确定稀释倍数。例如：某头公猪一次采精量是 200 mL，活力为 0.8， 密度为 2亿 /毫升 ，要求每个输精 剂量是含 40 亿精子，输精量为 80 mL，则总精子数为 200mL 2亿 /mL=400亿，输精头份为 400亿 40 亿 =10份，加入稀释液的量为 10 80 mL-200 mL=600 ml； 8.2.5 稀释后要求静置片刻再作一次精
14、子活力检查，如果稀释前后活力一样，即可进行分装与保存， 如果活力下降，说明稀释液的配制或稀释操作有问题，不宜使用，并查明原因加以改进。 9 精液的品质检查操作规程 9.1 精液量 以电子天平称量精液，按每克 1毫升计，避免以量筒等转移精液盛放容器的方法而造成精液的污染。 9.2 颜色 正常的精液是乳白或浅灰白色，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色或黄色是混 有脓液或尿液，若带有淡红色或红褐色是含有血液。这样的精液舍弃不用，并会同兽医查找原因。 9.3 气味 略带腥味，如有异常气味，则废弃不用。 9.4 pH 值 用 pH试纸测定 pH值，用滴管吸取一滴精液滴在试纸上， 1分钟后与
15、标准比色版对比，确定 pH值。也 可用 pH计测量（ pH计使用见说明书）。 9.5 精子活率检查 在 37 环境温度、 400倍显微镜下对精子活率进行检查，活率是指呈直线运动的精子百分率，在显 微镜下观察精子活率，按 0.1 1.0 的十级评分法进行，鲜精活率要求不低于 0.7。 9.6 精子密度 DB5303/T 6.4 2013 5 指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要指标。要求用血细胞计数板进行计数或精液 密度仪测定。有经验的技术人员可以用目测法，但每一个月必须对精子进行一次密度测定。 9.7 精子畸形率 必须对新公猪的最初几次射精进行形态检查，以后每个月检查一次。畸形率是
16、指异常精子的百分率， 要求畸形率不超过 18%，先对精液进行伊红或姬姆萨氏染色，相差显微镜下可直接观察活精子的畸形率， 畸形精子种类有：巨型精子、短小精子、双头或双尾精子，顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分 离、尾部变曲。 9.8 结果登记 对精液品质检查结果进行详细登记并形 成制度 ，见附录 B。 10 精液的常温保存和运输的操作规程 10.1 精液稀释后，检查精液活率，若无明显下降，按每头份 80 mL 100 mL分装 。 10.2 瓶上加盖密封，并在输精瓶上写清楚公猪的品种、耳号，采精日期（月、日、时） 。 10.3 置 22 25 的室温 1小时后 (或用几层毛巾包好后 )直接放
17、置 17 冰箱中 。 10.4 保存过程中要求每 12 小时将精液混匀一次 ,防止精子沉淀而引起死亡 。 10.5 每天检查精液保存箱温度并进行记录，若出现停电应全面检查贮存的精液品质 。 10.6 尽量减少保存精液保存箱关开次数 ,以免造成对精子的打击而死亡。 10.7 精液在运输过程中，要保证温度的恒定，并避免精液的震荡。 11 母猪的输精技术操作规程 11.1 母猪发情鉴定技术的操作规程 11.1.1 发情周期时间 母猪发情周期平均 21 天（ 19 23 天），大多数经产母猪一般在仔猪断奶后的一周内（ 3 7天）， 可再次发情排卵，配种受胎。 11.1.2 发情周期分类 11.1.2.
18、1 分类 母猪发情周期可分为发情前期、发情期、发情后期和间情期，母猪只有在发情才允许公猪爬跨或称 之为站立反应，此性行为表现可作为母猪适时输精的指标。 11.1.2.2 发情前期 母猪举动不安，外阴肿胀，并由淡黄色变为红色这种变化在后备母猪较为明显；阴道有粘液分泌， 其粘度渐渐增加。在此期间母猪不允许人骑在背上，平均可有 2.7天，不宜输精配种。 11.1.2.3 发情期 平均约 2.5天，特征为母猪阴部肿胀及红色开始减退，分泌物也变浓厚，粘度增加。此时母猪允许 压背而不动，压背时，母猪双耳竖起向后，后肢紧绷。 DB5303/T 6.4 2013 6 11.1.2.4 发情后期 1-2天 ,发
19、情母猪的阴部完全回复正常，不允许公猪爬跨。 11.1.2.5 间情期 13-14天 ,完全恢复正常状态。 11.2 发情鉴定 11.2.1 经产母猪 断奶后 3-5天母猪开始发情。在断奶后第三天起必须注意观察母猪的行为。每日早、晚两次对母猪 进行试情（上午 6： 30-8： 30和下午 16： 00-17： 30），试情选用善于交谈、唾液分泌旺盛、行动缓慢的 老公猪，在安静的环境下，当母猪出现站立不动并接受公猪的爬跨（静立反谢）时，即可判断母猪发情 成熟。此时即把母猪赶开，以便让公猪集中精力来检查和刺激其它母猪的发情。 11.2.2 后备母猪 初情时排卵数目少，身体其他器官和组织的发育也未完全
20、成熟 ， 故一般在第二或第三次发情时配种， 发情鉴定参考经产母猪。 11.2.3 配种适期 以如下三个标准来判断母猪的配种适期， 第一是母猪出现静立反射时间；第二是母猪阴户的颜色由 潮红逐渐变成紫红色；第三是母猪的精神状态由不安转为安静。如果在上午出现“静立反射”，则当天 下午输精一次，第二天上午再输精一次。如果在下午出现“静立反谢”，则第二天上午第一次输精，第 二天下午第二次输精，二次输精间隔时间必须在 8小时 18小时之间。对于个别发情异常的母猪根据个 体不同情况决定配种时间。 12 输精技术操作规程 12.1 输精次数 每头母猪在一个发情期内要求至少输精两次，最好三次，两次输精时间间隔
21、8小时左右； 12.2 输精时间 12.2.1 断奶后 3 6天发情的经产母猪，发情出现站立反应后 6小时 12小时进行第 1次输精配种； 12.2.2 后备母猪和断奶后 7天以上发情的经产母猪，发情出现站立反应，就进行配种（输精）； 12.3 精液检查 及输精 从 17保存箱取出的精液 ,轻轻摇匀 ,用已灭菌的滴管取 1滴涂于预热的载玻片 ,置于 37 的恒温板 上片刻 ,用显微镜检查活力，精液活力 0.7，才可进行输精 ，步骤如下： a) 将试情公猪赶至待配母猪栏之前，使母猪在输精时与公猪口鼻部接触； b) 输精人员消毒清洁双手； c) 用 0.1高锰酸钾水溶液清洁母猪外阴、尾根及臀部周围
22、 ,再用温水浸湿毛巾，擦干外阴部； d) 从密封袋中取出没受任何污染的一次性输精管（手不应接触输精管前 2/3部分），在其前端涂 上精液作为润滑液； DB5303/T 6.4 2013 7 e) 将输精管 45 度角向上插入母猪生殖道内，输精管进入 3 cm 4 cm之后，顺时针旋转，当感觉 有阻力时，继续缓慢旋转同时前后移动，直到感觉输精管前端被锁定（轻轻回拉不动），并且 确认真正被子宫颈锁定； f) 从精液贮存箱取出品质合格的精液，确认公猪品种、耳号； g) 缓慢颠倒摇均精液，用剪刀剪去瓶嘴，接到输精管上，开始进行输精； h) 用针头在输精瓶底部扎一个小孔，抚摸母猪的乳房或外阴、 压背刺激
23、母猪，使其子宫收缩产生 负压，将精液吸纳；输精时勿将精液挤入母猪生殖道内，防止精液倒流； i) 控制输精瓶的高低来调节输精时间，输精时间要求 3 5 分钟，输完一头母猪后，在防止空气 进入母猪生殖道的情况下，把输精管后端一小段折起，放在输精瓶中，使其滞留在生殖道内 3 5分钟，让输精管慢慢滑落； j) 从 17 精液保存箱中取出的精液，无需升温至 37 ,摇匀后可直接输精 ,但检查精液活力需 将玻片预热至 37 ； k) 经产母猪用一次性海绵头输精管，输精前检查海绵头是否松动；后备母猪用一次性螺旋头输精 管。为防止子宫炎发生，每头母猪每次输精都使用一条新的输精管； l) 输精后母猪的管理 ；
24、m) 输精后的母猪饲养在安静的环境中，并且一月内不要轻易驱赶母猪，适当减少饲喂量，夏季要 防暑降温，冬季要保温 ； n) 登记母猪生产卡、配种记录 ，相关指标计算见附录 B。 DB5303/T 6.4 2013 8 附 录 A （资料性附录） 种公猪采精记录 A.1 导言 本附录推荐了采精记录，在使用中可根据实际需要增加内容。 A.2 种公猪采精记录 种公猪采精记录参见表 B.1。 表 B.1 种公猪采精记录 品种： 耳号： 出生日期： 来源： 采精 原精液 稀释 采 精 员 备注 年 月 日 时 数量（ ml） 活力 密度 （亿/ml） 畸形率（ %） PH 值 稀释液名 称 稀释比 例 活
25、力 DB5303/T 6.4 2013 9 附 录 B （规范性附录） 猪人工授精指标计算方法 B.1 情期受胎率 指一年内 (或配种期内 )，输精母猪情期总数中，实际受胎母猪数所占的百分率。即： 总胎母猪数 情期受胎率 = 100% 输精母猪总情期数 B.2 情期无返情率 指母猪输精后超过 30 天以上，不再发情的母猪所占的百分率。即： 输精后 30天以上不再发情母猪头数 情期无返情率 100% 输精母猪数 B.3 总受胎率 指一年内（或配种期内）输精母猪总头数中，受胎母猪所占的百分率。 即： 受胎母猪总头数 总受胎率 100% 输精母猪总头数 B.4 每窝平均产仔数 总产仔头数 平均窝产仔数 100% 产仔总窝数 B.5 人工授精普及率 人工授精母猪数 人工授精普及率 100% 可繁殖母猪数 DB5303/T 6.4 2013 10 _
