1、的ICS.65.020B 43铜 仁 市 地 方 标 准DB5206DB 5206/T 100 2018代 替 DB 522200/T 115-2011铜 仁 市 牛 冷 冻 精 液人 工 授 精 技 术 操 作 规 程 Tongren City of the bovine frozen semen for artificialinsemination technology operating rules 2018-12-06 发 布 2018-12-06 实 施铜 仁 市 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB 5206/T 100 2018 I 前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.1
2、 2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的规 则 起 草 。本 标 准 代 替 DB 522200/T 115 2011 铜 仁 地 区 牛 冷 冻 精 液 人 工 授 精 技 术 操 作 规 程 。本 标 准 与 DB 522200/T 115 2011相 比 除 编 辑 性 修 改 外 主 要 差 异 如 下 ： 修 改 了 本 规 程 的 范 围 见 1； 增 加 了 一 条 规 范 性 引 用 文 件 见 2； 修 改 了 术 语 与 定 义 的 部 分 内 容 见 3.1、 3.2、 3.3、 3.4； 增 加 了 术 语 与
3、 定 义 的 一 节 内 容 ： 妊 娠 诊 断 见 3.5； 增 加 了 对 冷 冻 精 液 质 量 的 规 定 见 5.1； 增 加 了 对 冷 冻 精 液 运 输 的 规 定 见 5.3； 删 除 了 原 规 程 中 牛 的 保 定 规 定 ， 修 改 增 加 到 本 规 程 配 种 前 准 备 见 6.3.4、 2011版 7。 本 标 准 由 铜 仁 市 农 业 委 员 会 提 出 并 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 铜 仁 市 畜 牧 技 术 推 广 站 、 思 南 县 、 印 江 县 、 松 桃 县 、 石 阡 县 、 德 江 县 、江 口 县 、 碧 江 区 、 万
4、山 区 、 玉 屏 县 、 沿 河 县 畜 牧 技 术 推 广 站 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 郑 晓 刚 、 任 明 晋 、 龙 真 权 、 毛 同 辉 、 冉 隆 权 、 李 华 磊 、 樊 蓉 、 石 建华 、 黄 仁 芳 、 侯 芳 、 王 华 、 田 茂 书 、 裴 国 海 、 邓 万 红 、 张 前 卫 、 杨 昌 平 、 何 永 杰 、 王 娟 、 吴继 标 、 杨 蛟 、 张 妮 妮 。本 标 准 的 历 次 发 布 情 况 为 ： DB 522200/T 115-2011 DB 5206/T 100 2018 1 铜 仁 市 牛 冷 冻 精 液 人 工 授 精 技
5、术 操 作 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 牛 冷 冻 精 液 人 工 授 精 技 术 的 术 语 与 定 义 、 人 工 授 精 点 建 设 、 冷 冻 精 液 质 量 、贮 存 和 运 输 、 配 种 前 的 准 备 、 冷 冻 精 液 的 提 取 、 冷 冻 精 液 的 解 冻 、 精 液 品 质 检 查 、 母 牛 发 情鉴 定 、 输 精 和 妊 娠 诊 断 。本 标 准 适 用 于 铜 仁 市 辖 区 内 各 养 牛 场 （ 户 ） 母 牛 的 冷 冻 精 液 人 工 授 精 技 术 应 用 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是
6、 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 GB 4143 牛 冷 冻 精 液GB/T 5458 液 氮 生 物 容 器NY/T 1335 牛 人 工 授 精 技 术 规 程3 术 语 与 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 。3.1 冷 冻 精 液指 利 用 器 械 以 人 工 方 法 采 集 种 公 牛 精 液 ， 通 过 检 查 ， 用 稀 释 液
7、等 温 稀 释 、 平 衡 后 快 速 冷冻 ， 在 液 氮 中 保 存 。 冷 冻 精 液 包 括 颗 粒 冷 冻 精 液 、 安 瓿 冷 冻 精 液 和 细 管 冷 冻 精 液 ， 本 规 程 中 所 指 冷 冻 精 液 是 指 细 管 冷 冻 精 液 。3.2 冷 冻 精 液 解 冻细 管 冷 冻 精 液 直 接 置 于 38 40 水 浴 中 ， 使 冷 冻 精 子 重 新 恢 复 活 力 的 处 理 方 法 。3.3 人 工 授 精用 人 工 方 法 采 取 公 牛 精 液 ， 经 检 查 处 理 后 ， 用 器 械 输 入 发 情 母 牛 生 殖 道 内 ， 使 其 受 胎 的技
8、术 。3.4 发 情 鉴 定通 过 观 察 或 检 查 母 牛 外 部 行 为 征 兆 和 内 部 生 殖 器 官 变 化 ， 判 断 卵 巢 卵 子 发 育 和 排 出 等 活 动 情 况 以 此 确 定 母 牛 发 情 程 度 的 方 法 。 DB 5206/T 100 2018 2 3.5 妊 娠 诊 断通 过 直 肠 检 查 确 定 母 牛 是 否 妊 娠 的 技 术 。4 人 工 授 精 点 建 设4.1 人 工 授 精 点 应 建 设 在 交 通 方 便 、 能 繁 母 牛 相 对 集 中 的 村 寨 或 规 模 养 殖 场 ， 并 且 符 合 当 地良 种 牛 的 推 广 改 良
9、 规 划 的 要 求 。4.2 从 事 牛 冷 冻 精 液 人 工 输 精 操 作 人 员 必 须 身 体 健 康 ， 具 有 一 定 文 化 程 度 ， 经 县 级 以 上 畜牧 行 政 主 管 部 门 培 训 ， 持 证 上 岗 。4.3 人 工 授 精 点 设 置 冻 精 贮 存 室 ， 并 有 必 备 设 施 见 附 录 A。 应 有 配 种 记 录 、 产 犊 记 录 。 室内 清 洁 、 干 燥 ， 窗 明 台 净 。 严 禁 贮 放 农 药 、 化 肥 、 烤 烟 等 刺 激 性 物 品 ， 室 内 严 禁 吸 烟 、 饮 酒 。 室 外 安 装 有 牛 保 定 架 。5 冷 冻
10、 精 液 质 量 、 贮 存 和 运 输5.1冻 精 的 质 量5.1.1 活 力 、 密 度 、 有 效 精 子 数 、 畸 形 率 、 细 菌 数 等 质 量 符 合 NY/T 1335要 求 。5.1.2 细 管 完 整 ， 字 迹 清 楚 ， 应 有 生 产 单 位 简 称 、 品 种 、 编 号 、 生 产 日 期 。 装 细 管 冻 精 的 纱布 干 净 、 标 签 清 楚 。5.1.3 冻 精 在 输 精 前 应 进 行 质 量 检 测 。5.2冻 精 贮 存5.2.1 冷 冻 精 液 应 侵 泡 在 液 氮 生 物 容 器 中 贮 存 ， 液 氮 生 物 容 器 应 符 合 G
11、B/T 5458的 规 定 。 5.2.2 在 液 氮 罐 中 贮 存 的 冷 冻 精 液 必 须 浸 没 于 液 氮 中 ， 液 氮 在 不 足 总 容 积 三 分 之 一 时 ， 应 及时 补 充 。5.2.3 取 放 冷 冻 精 液 时 ， 提 筒 只 允 许 上 提 到 液 氮 罐 的 瓶 颈 段 以 下 ， 严 禁 提 出 罐 外 。 在 罐 内 脱离 液 氮 的 时 间 不 得 超 过 10s， 必 要 时 须 再 次 浸 没 后 再 提 取 。5.2.4 在 向 另 一 液 氮 贮 存 罐 内 转 移 冷 冻 精 液 时 ， 精 液 提 筒 脱 离 液 氮 不 得 超 过 5s。
12、5.2.5 取 放 冷 冻 精 液 后 ， 应 及 时 盖 上 罐 塞 ， 尽 量 减 少 开 启 容 器 盖 塞 的 次 数 和 时 间 ， 以 防 止 异物 落 入 罐 内 ， 减 少 液 氮 消 耗 。5.2.6 严 防 不 同 品 种 和 编 号 的 冷 冻 精 液 混 杂 存 放 ， 难 以 辨 识 的 应 予 以 销 毁 。5.2.7 对 长 期 贮 存 冷 冻 精 液 的 液 氮 罐 应 定 期 清 理 和 洗 刷 ， 如 发 现 液 氮 消 耗 显 著 增 加 ， 或 容 器外 挂 霜 ， 应 及 时 更 换 。5.3冻 精 运 输 运 输 冻 精 时 ， 应 使 用 专 用
13、液 氮 容 器 （ 有 保 护 外 套 ） ,添 满 液 氮 ， 固 定 容 器 盖 ， 液 氮 罐 不得 倒 放 及 碰 撞 和 强 烈 震 荡 。 远 途 运 输 冻 精 时 ， 备 足 液 氮 ， 及 时 补 加 。6 配 种 前 的 准 备 DB 5206/T 100 2018 3 6.1 技 术 员 的 准 备技 术 员 应 身 体 健 康 ， 采 精 前 剪 短 指 甲 并 抹 平 ， 用 肥 皂 洗 手 后 擦 干 ， 穿 上 洁 净 工 作 服 。6.2 消 毒 药 品 的 准 备消 毒 药 品 包 括 75%的 酒 精 、 0.9%的 生 理 盐 水 0.3 的 新 洁 尔
14、灭 、 脱 脂 药 棉 、 高 锰 酸 钾 等 ，并 加 以 标 识 。6.3 器 械 的 清 洗 与 消 毒6.3.1 器 械 的 清 洗将 输 精 所 有 器 械 用 2 3 的 碳 酸 钠 或 洗 涤 剂 清 洗 干 净 ， 再 用 清 水 冲 洗 2 3 次 。6.3.2 器 械 的 消 毒输 精 金 属 器 械 、 玻 璃 器 皿 、 细 管 剪 、 镊 子 等 蒸 煮 消 毒 15 分 钟 ， 用 前 再 用 生 理 盐 水 冲 洗数 次 ， 也 可 用 75%的 酒 精 棉 球 由 输 精 枪 顶 端 开 始 向 后 擦 拭 两 遍 ， 待 酒 精 挥 发 完 毕 后 再 用 生
15、 理 盐 水 洗 涤 三 次 放 入 盘 中 待 用 。6.3.3 输 精 器 用 后 及 时 清 洗 、 消 毒 。 每 输 配 一 头 母 牛 ， 使 用 一 支 输 精 枪 ， 塑 料 外 套 管 只 能使 用 一 次 。6.3.4牛 的 保 定采 用 站 立 保 定 ， 尾 巴 向 右 上 方 拴 系 提 起 。7 冷 冻 精 液 的 提 取冻 配 点 提 取 精 液 时 ， 应 将 所 提 取 的 品 种 、 牛 号 、 数 量 等 记 录 完 善 见 附 录 B并 核 对 无 误 后妥 善 保 存 。 提 取 精 液 应 做 到 轻 拿 轻 放 ， 严 防 碰 撞 。8 冷 冻 精
16、 液 的 解 冻 8.1 细 管 冷 冻 精 液 可 用 38 左 右 的 温 水 直 接 浸 泡 解 冻 ， 时 间 为 10s-15s。8.2 解 冻 后 精 液 温 度 不 得 超 过 外 界 环 境 温 度 ， 一 般 应 控 制 在 10 以 下 。8.3 细 管 冻 精 解 冻 后 ， 先 检 查 其 质 量 ， 有 裂 纹 、 封 口 不 严 、 空 管 等 现 象 不 能 用 。8.4 细 管 冷 冻 精 液 应 在 1h内 及 时 输 精 。8.5 解 冻 后 精 液 需 作 运 输 时 ， 应 置 于 4 -5 温 度 下 不 得 超 过 8 小 时 。9 精 液 品 质
17、检 查9.1 精 液 质 量 应 符 合 GB 4143的 要 求 。9.2 检 查 精 子 活 力 用 的 显 微 镜 载 物 台 应 保 持 35 -38 。9.3 在 显 微 镜 视 野 下 ， 呈 直 线 前 进 运 动 的 精 子 数 占 全 部 精 子 数 的 百 分 率 来 评 定 精 子 活 力 。100%的 精 子 呈 直 线 运 动 者 评 为 1.0， 90%的 精 子 呈 直 线 运 动 者 评 为 0.9， 以 此 类 推 。 9.4 冻 精 解 冻 后 精 子 活 力 应 达 0.3以 上 （ 1200万 有 效 精 子 ） 方 可 输 精 。10 母 牛 发 情
18、鉴 定 DB 5206/T 100 2018 4 10.1 发 情 鉴 定采 用 “ 一 问 二 看 三 查 ” 的 外 部 观 察 和 直 肠 触 摸 卵 泡 相 结 合 方 法 ， 以 直 肠 检 查 卵 泡 发 育 程度 为 主 要 依 据 。10.1.1 询 问 畜 主 ： 了 解 母 牛 年 龄 、 胎 次 、 食 欲 情 况 、 发 情 行 为 表 现 、 开 始 时 间 、 是 否 与 公牛 交 配 。10.1.2 观 察 母 牛 发 情 表 现 ： 一 看 阴 唇 肿 胀 程 度 ， 二 看 粘 液 色 泽 分 泌 量 、 粘 稠 情 况 ， 三 看 阴唇 粘 膜 色 泽 变
19、化 ， 以 便 确 定 输 配 时 间 。10.1.3 三 是 直 肠 检 查 方 法 ： 直 肠 触 摸 子 宫 、 卵 巢 ， 判 断 其 长 短 、 粗 细 、 质 地 。 顺 序 是 ： 手戴 乳 胶 手 套 ， 涂 以 滑 润 剂 ， 五 指 并 拢 伸 入 肛 门 ， 清 除 宿 粪 后 ， 手 掌 伸 平 ， 掌 心 向 下 ， 在 骨 盆底 的 正 中 有 一 长 而 稍 扁 的 棒 状 物 为 子 宫 颈 。 顺 着 子 宫 颈 向 前 伸 进 ， 可 摸 到 子 宫 角 间 沟 ， 沟 的两 旁 各 有 一 条 向 前 弯 曲 的 圆 筒 状 物 ， 是 左 右 子 宫 角
20、 ， 沿 着 子 宫 角 大 弯 向 下 侧 面 摸 ， 可 摸 到 扁 圆 、 柔 软 而 有 弹 性 的 卵 巢 。 用 手 指 触 摸 卵 巢 表 面 的 卵 泡 发 育 程 度 ， 以 确 定 是 否 输 精 。 最 佳 输配 时 间 是 母 牛 发 情 中 期 末 和 发 情 后 期 。10.2 发 情 初 期母 牛 鸣 叫 不 安 ， 食 欲 开 始 减 退 ， 想 爬 跨 它 牛 ， 但 拒 绝 公 牛 爬 跨 ， 外 阴 轻 微 红 肿 ， 阴 道 粘膜 充 血 ， 流 出 稀 薄 透 明 液 体 。 直 肠 检 查 子 宫 变 软 ， 卵 巢 有 一 侧 增 大 ， 在 卵
21、巢 上 有 卵 泡 ， 无 弹性 。 此 期 维 持 10h左 右 ， 不 能 输 精 。10.3 发 情 中 期母 牛 极 度 不 安 ， 食 欲 停 止 ， 性 欲 旺 盛 ， 求 配 心 切 ， 爬 跨 它 牛 ， 外 阴 部 明 显 肿 胀 ， 流 出 粘液 增 多 。 直 肠 检 查 子 宫 松 软 ， 卵 泡 体 积 增 大 ， 直 径 1.0cm-1.5cm， 突 出 于 卵 巢 表 面 ， 弹 性 强 ，有 波 动 感 。 此 期 约 维 持 8h-12h， 输 精 偏 早 。10.4 发 情 末 期 母 牛 性 欲 减 退 ， 不 再 爬 跨 它 牛 ， 由 不 安 转 为
22、安 静 ， 外 阴 部 肿 胀 减 退 ， 粘 液 变 稠 ， 呈 黄 白色 。 直 肠 检 查 子 宫 颈 变 松 软 ， 卵 泡 壁 变 薄 ， 波 动 很 明 显 ， 呈 熟 葡 萄 状 ， 有 一 触 即 破 感 觉 。 此期 约 维 持 8h-10h， 为 最 佳 输 精 时 期 。11 输 精11.1 母 牛 需 经 发 情 鉴 定 和 健 康 检 查 后 才 能 予 以 输 精 。11.2 母 牛 在 输 精 前 外 阴 部 应 先 用 清 水 清 洗 ， 然 后 用 新 洁 尔 灭 或 0.1%高 锰 酸 钾 溶 液 消 毒 ， 待干 燥 后 再 用 生 理 盐 水 擦 拭 。
23、11.3 发 情 母 牛 每 次 输 入 1支 将 解 冻 后 的 细 管 冻 精 ， 冻 精 剪 去 顶 部 封 口 （ 切 不 可 错 把 细 管 的棉 塞 端 剪 去 ） 后 插 入 输 精 枪 (将 输 精 枪 的 钢 芯 插 入 细 管 的 棉 塞 端 口 内 )， 套 上 塑 料 外 套 管 备 用 。 11.4 采 用 直 肠 把 握 子 宫 颈 深 部 输 精 法 。11.5 输 精 员 左 手 戴 长 臂 一 次 性 手 套 ， 用 水 沾 湿 ， 手 呈 锥 形 ， 手 心 向 上 伸 入 直 肠 内 掏 出 宿 粪 ，清 洗 消 毒 外 阴 部 、 擦 干 ， 然 后 再
24、 手 心 向 上 伸 入 直 肠 后 手 心 转 下 ， 寻 找 子 宫 颈 ， 并 握 住 子 宫 颈的 外 口 端 ， 同 时 臂 肘 向 下 轻 压 ， 使 阴 门 开 裂 。 DB 5206/T 100 2018 5 11.6 右 手 将 准 备 好 的 输 精 枪 插 入 阴 道 ， 先 自 阴 门 向 前 向 上 与 水 平 线 呈 45 度 角 插 入 约5cm-10cm（ 避 开 尿 道 口 ） ， 再 改 向 前 平 插 ， 两 手 相 互 配 合 ， 使 输 精 枪 尖 端 对 准 子 宫 颈 口 ， 缓缓 导 入 子 宫 颈 部 内 ， 然 后 注 入 精 液 。11.7
25、 输 精 应 做 到 轻 入 、 慢 注 、 缓 出 、 适 深 、 适 时 。 发 情 母 牛 一 个 情 期 输 精 两 次 的 ， 其 间 隔时 间 为 8h 12h。11.8 输 精 母 牛 须 作 好 记 录 ， 各 项 记 录 真 实 准 确 见 附 录 C。11.9 输 精 后 畜 主 必 须 在 下 一 个 情 期 （ 一 般 在 输 精 后 的 18-22 天 左 右 ） 观 察 母 牛 有 无 发 情 表现 ， 若 连 续 2个 情 期 无 发 情 ， 则 基 本 可 判 断 为 受 孕 ， 否 则 ， 畜 主 应 及 时 通 知 输 配 人 员 重 新 输配 。11.10
26、 若 连 续 3个 情 期 输 配 后 未 受 孕 ， 须 考 虑 作 产 科 检 查 ， 待 疾 病 消 除 后 再 行 输 配 。 12 妊 娠 诊 断妊 娠 诊 断 操 作 主 要 采 取 直 肠 检 查 法 ： 经 配 种 后 发 情 的 母 牛 ， 进 行 直 肠 检 查 确 诊 是 否 妊 娠 。首 先 操 作 者 须 磨 光 指 甲 、 涂 上 润 滑 剂 ， 伸 入 直 肠 掏 出 宿 粪 ， 用 手 指 触 摸 子 宫 颈 ， 顺 着 子 宫 角 ，通 过 子 宫 角 的 收 缩 、 大 小 、 对 称 情 况 判 断 是 否 妊 娠 。母 牛 妊 娠 各 月 特 征 ：12
27、.1 妊 娠 2 个 月 ， 两 子 宫 角 不 对 称 ， 孕 角 较 空 ， 约 增 大 两 倍 ， 孕 角 基 部 宫 壁 软 薄 、 波 动 、无 收 缩 。12.2 妊 娠 3 个 月 ， 孕 角 大 如 婴 儿 头 ， 子 叶 如 蚕 豆 大 小 ， 子 宫 中 动 脉 有 妊 娠 搏 感 。12.3 妊 娠 4 个 月 ， 子 宫 颈 移 至 趾 骨 前 缘 ， 子 宫 垂 入 腹 腔 ， 子 宫 中 动 脉 变 直 变 粗 ， 搏 动 明 显 。12.4 随 着 妊 娠 时 间 的 增 加 ， 胎 儿 逐 步 长 大 ， 触 摸 较 容 易 。 DB 5206/T 100 20
28、18 6 附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）人 工 授 精 点 必 备 的 设 施5L液 氮 罐 (运 输 用 )、 30L液 氮 罐 （ 贮 存 用 ） 、 普 通 显 微 镜 、 输 精 枪 、 外 套 、 手 套 、 剪 刀 、镊 子 、 水 杯 、 消 毒 锅 、 水 温 计 、 搪 瓷 盘 。 DB 5206/T 100 2018 7 附 录 B（ 资 料 性 附 录 ）牛 输 配 点 提 取 冻 精 登 记 表表 B.1 牛 输 配 点 提 取 冻 精 登 记 表时间品种牛号数量（支）冻精活力 DB 5206/T 100 2018 8 附 录 C（ 资 料 性 附 录 ）记 录 和 报 表表 C.1 记 录 和 报 表畜 主 住 址品 种 牛 号 毛 色 年 龄 膘 情上 期 产 犊 日 期 胎 次 输 精 日 期发情鉴定 阴 唇 肿 胀 与 否 公 牛 品 种公 牛 号粘 液 分 泌 情 况 冻 精 剂 型精 子 活 率 阴 唇 粘 膜 颜 色 变 化 配 精 次 数输 精 员签 字妊娠检查 检 查 日 期 产犊鉴定 产 犊 日 期检 查 方 法 犊 牛 编 号检 查 结 果 犊 牛 性 别预 产 期 犊 牛 血 统检 查 人 出 生 重 （ kg） 鉴 定 人_
