1、ICS 65.020.30 B 42 DB4107 新乡市 地 方 标 准 DB 4107/T 433 2019 鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定 液相色谱质谱法 Determination of copidol in mussle tissue of chicken by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2019 - 10 - 12发布 2019 - 11 - 01实施 新乡市市场监督管理局 发布 DB4107/T 433 2019 I 前 言 本标准依 据 GB/T 1.1给出的编写规则 ，根据新乡市生产实际而制定。 本标准附录
2、 A为资料性附录。 本标准由新乡市 农业农村局、新乡市市场监督管理局 提出。 本标准起草单位：新乡市畜产品质量监测检验中心、 新乡市动物卫生监督所、封丘县农业农村局 。 本标准主要起草人： 关鹏、王双坡、王苗、李乐、王杰琼 。 本标准于 2019年 10月 12日 首次 发布。 DB4107/T 433 2019 1 鸡肌肉组织中氯羟吡啶残留量的测定液相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了 鸡肌肉组织中氯羟吡啶药物残留的制样 、液相色谱质谱法的测定原理、试剂和溶液、 仪器与设备、方法与步骤、仪器参数与测定、方法灵敏度和精密度 。 本标准适用于 鸡肌肉组织中氯羟吡啶药物残留量的检测 。 2 规范性
3、引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡 是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 农牧发 2003 1号 兽药残留试验技术规范（试行 ） 3 制样 3.1 样品的制备 取适量新鲜或冷冻的空白或供试样品，搅拌并使均匀。 3.2 样品的保存 -20以下冰箱中贮存备用。 4 原理 供试样品中残留的氯羟吡啶经乙腈提取后，用碱性氧化铝 柱净化分离 ，浓缩后用 甲醇溶解 。所得溶 液供液相色谱 -串联质谱法测定，外标法定量测定。 5 试剂和溶液 除非另有规定，在分析
4、中仅使用 确认为分析纯的试剂盒符合 GB/T 6682规定的一级用水。 5.1 氯羟吡啶标准品 ：含氯羟吡啶 （ C7H7Cl2NO）不得少于 99.0%。 5.2 甲醇：色谱纯。 5.3 乙腈： 色谱纯。 5.4 磷酸氢二钠：分析纯。 5.5 磷酸二氢钾：分析纯。 DB4107/T 433 2019 2 5.6 碱性氧化铝固相萃取柱 ： 规格 2 g， 12 mL。 5.7 微孔滤头 ： 孔径 0.22 m。 5.8 磷酸盐缓冲液 (pH7.0):准确称取分析纯磷酸氢二钠 2.09 g、磷酸二氢钾 1.40 g，加水溶解 并稀释 至 500 mL，调节 pH 值至 7.0。 5.9 氯羟吡啶
5、药物标准储备液 ： 精密称氯羟吡啶标准品约 10 mg，置 10 mL 容量瓶中，用 甲醇并稀释 成浓度为 1 mg/mL 的标准储备液， -20保存，有效期为一年。临 用前，准确量取适量标准储备液，用 甲醇稀释成浓度为适宜浓度的标准工作 液 。 6 仪器与设备 6.1 液相色谱串联质谱仪 ： 美国 Waters 公司 Waters Acquity UPLC-Xevo TQ-S。 6.2 天平 ： 感量 0.01 g。 6.3 分析天平 ： 感量 0.00001 g。 6.4 涡旋混合器 。 6.5 振荡器。 6.6 低温离心机。 6.7 氮吹仪。 6.8 固相萃取装置 。 6.9 组织 匀浆
6、机。 7 方法与步骤 7.1 试料的制备 试料的制备包括：取搅拌均匀后的供试样品，作为供试试料；取搅拌均匀后的空白样品， 作为空白 试料；取搅拌均匀后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。 7.2 提取 称取 （ 50.05 ） g匀质样品，置于 50 mL离心管内，加入 25 mL乙腈，涡旋混匀，中速振荡 10 min， 10000 r/min离心 5 min，转移上清液于另一 50 mL离心管内。重复提取一次，合并提取液，混匀， 10000 r/min离心 10 min，取上清液 10 mL待净化。 7.3 净化 碱性氧化铝固相萃取柱依次用甲醇 10 mL、乙腈 10 m
7、L润洗，加入 提取的上清液 10 mL过柱，弃去流 出液。用 20 mL甲醇洗脱，并收集， 55 下氮气吹干，加 1 mL甲醇复溶、 0.22 m滤膜过滤，待上机。 7.4 标准工作液的制备 DB4107/T 433 2019 3 准确吸取浓度为 100 ng/mL的氯羟吡啶标准溶液 0.1 mL，加入空白洗脱液中，同样品同步处理，即 工作液。 8 仪器参数与测定 8.1 色谱条件 8.1.1 色谱柱： Waters Acquity BEH C18 （ 2.1 mm 50 mm， 1.7 m） 8.1.2 柱温： 30 8.1.3 流动相： A：乙腈； B： 0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱（梯度
8、洗脱程序见表 1） 表 1 色谱梯度洗脱程序 时间 (min) 流速 (mL/min) A B% 曲线 类型 / 0.3 10 90 / 4 0.3 20 80 6 5 0.3 10 90 1 注： 1为即时变化， 6为线性变化 8.1.4 进样量： 2 L 8.2 质谱条件 8.2.1 离子源：电喷雾 ESI 8.2.2 扫描方式：正离子扫描 8.2.3 采集模式：多反应监测 MRM； 8.2.4 毛细管电压： 3.3kV； 8.2.5 锥孔电压： 25.00V； 8.2.6 离子源温度： 150； 8.2.7 雾化温度： 500； 8.2.8 定 性离子对（ m/z）： 192.2 174
9、.2， 192.2 101.0 。 8.2.9 定量 离子对（ m/z）： 192.2 101.0 。 8.3 测定方法 8.3.1 进样顺序 a) 试剂空白进 1 针； b) 标准工作液进 3 针 ，其 RSD 10%； DB4107/T 433 2019 4 c) 试剂空白进 1 针； d) 质控 样品各进 2 针 ； e) 样品空白进 1 针； f) 样品 1-1 进 1 针； g) 样品 1-2 进 1 针 h) 样品 4-1 进 1 针； i) 样品 4-2 进 1 针； j) 标准工作液进 2 针 8.3.2 定性需同时满足 下列条件： a) 试剂空白和样品空白不能出现与阳性添加相
10、同的离子峰； b) 所有离子色谱峰的信噪比 (S/N)都在 3:1 以上，信噪比以峰对峰 (PtP)计算； c) 试样色谱峰的相对保留时间，应与标准溶液的相对保留时间一致，容许偏差为 2.5 ； d) 检测到的离子的相对丰度与标准溶液的相对丰度一致，容许偏差符合表 2 的要求。响应弱的离 子与响 应强的离子丰度比即为相对丰度。 表 2 试样溶液中离子丰度比的允许偏差范围 相对丰度（ %） 允许偏差（ %） 50 20 20 50 25 10 20 30 10 50 8.3.3 定量方法 采用单点校准，按外标法以峰面积比计算，即得。 8.4 结果计算 按下式计算供试组织中氯羟吡啶药物的残留量 （
11、 g/kg） ： 式中： X 试料中 氯羟吡啶 的残留量 (g/kg)； A 试样溶液中 氯羟吡啶 的峰面积； As 标准工作液中 氯羟吡啶 的峰面积； Cs 标准工作液中 氯羟吡啶 的浓度 (ng/mL)； V 样品定容体积 (mL)； m 供试试料的称样量 (g)。 注： 计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留 3位有效数字。 X= ACsV1000 Asm1000 DB4107/T 433 2019 5 9 方法灵敏度和精密度 9.1 灵敏度 氯羟吡啶在鸡肌肉组织中的检测限为 5 g/kg，定量限为 10 g/kg。 9.2 准确度 本方法回收率为 60% 120%。 9.3 精密度 本方法的批内相对标准偏差 20%，批间相对标准偏差 20%。 DB4107/T 433 2019 6 A A 附 录 A （资料性附录） 氯羟吡啶标准物质质谱图 _
