1、ICS 65.020.20 B 61 DB63 青海省地方标准 DB 63/T 17032018 枸杞组织培养育苗技术规程 2018 - 09 - 25 发布 2018 - 12 - 01 实施 青海省质量技术监督局 发布 DB63/T 17032018 I 前 言 本规程按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本规程由青海省农林科学院提出。 本规程由青海省林业标准化技术委员会归口。 本规程起草单位：青海省农林科学院。 本规程主要起草人：王占林、樊光辉、张得芳、徐生旺、陈进福、张文莲、时保国、李延德、尚安 邦、马梦茹、李晨、虞杭、童翠芸、刘晓雯、崔英、张晓程、晁元珍。 DB63/T 1
2、7032018 1 枸杞组织培养育苗技术规程 1 范围 本规程规定了枸杞（Lycium barba rum L.）组织培养育苗过程中的培养条件、外植体处理、愈伤组 织诱导、愈伤组织分化、不定芽诱导、生根培养以及组培苗移植技术。 本规程适用于枸杞组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB63/T 236 主要造林树种苗木质量分级 DB63/T 1448 枸杞扦插育苗技术规程 3 组织培养条件
3、组培室建设、组培流程、管理按照 LY/T 1882执行。 培养温度 24 28 ，空气湿度 50%80%，光照强度 1000 lx 1600 lx，光照时间 16 h/d。 4 外植体材料 选择树势强健、无病虫害的枸杞植株幼嫩叶片或茎尖为组织培养外植体材料。 5 基本培养基的配制 5.1 药品母液的配制 5.1.1 制备细胞分裂素(6-BA，KT) 母液 配制细胞分裂素6-BA或KT 1g/L浓度母液。准确称取 6-BA或KT药粉100 mg，加少量蒸馏水，逐渐而 缓慢滴入0.1 mol/L HCl溶液的同时，反复摇晃 ，直至药物全部溶解，最后加蒸馏水定容至l00 ml，盖 塞后摇匀。 5.1
4、.2 制备生长素类(IBA，NAA) 母液 配制生长素类IBA或NAA 1g/L浓度母液。准确称取IBA或NAA药粉100 mg，加1.0 ml 蒸馏水，然后逐 渐滴入0.1 mol/L NaOH溶液的同时，反复摇晃，直至药物全部溶解，最后加蒸馏水定容至l00 ml，盖塞 后摇匀。 5.2 基本培养基 DB63/T 17032018 2 5.2.1 基本培养基为 MS 培养基，培养基成分含量见附录 A。 5.2.2 外植体处理、 愈伤组织诱导和愈伤组织分化采用 1/2MS 培养基， 添加蔗糖 30 g/L、 琼脂 6.0 g/L， 调节 pH 为 5.8。 5.2.3 不定芽诱导和生根培养采用
5、 1/2MS 培养基（大量元素和 Ca2+含量减半，其他元素含量不变）， 添加蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0 g/L，调节 pH 为 6.1。 5.2.4 将培养基溶液在培养瓶中进行分装，培养液在组培瓶中的高度控制在 1.0cm1.2cm，在高压灭 菌锅（121）灭菌 25 min。 6 外植体处理 采集长势良好、 半木质化枸杞枝条上叶片， 用毛刷蘸洗衣粉溶液轻轻的刷洗后， 浸泡25 min30 min， 再用流水冲洗2h。在超净工作台上用75%酒精消毒30 s，无菌水冲洗2遍，再用0.1mg/LHgCl 2消毒10 min， 最后用无菌水冲洗5次以上，即可以进行接种工作。 7 叶片愈伤组织
6、诱导 7.1 愈伤组织诱导培养基采用 MS 培养基，激素配比为 NAA0.7 mg /L+6-BA0.7 mg/L。 7.2 外植体处理的枸杞叶片接入愈伤组织诱导培养基中，在无菌培养室内进行愈伤组织诱导。 7.3 愈伤组织诱导培养时间为 25d30d。 8 愈伤组织增殖 8.1 愈伤组织增殖培养基采用 MS 培养基，激素配比为 6-BA1.0 mg/L+IBA 0.8 mg/L +NAA 0.2 mg/L。 8.2 选择呈现黄绿色、软硬适中的松散愈伤组织，剪切成直径 0.2 cm 3 0.4 cm 3 小块，接入配制好的培 养基，在无菌培养室内进行愈伤组织增殖培养。 8.3 愈伤组织增殖培养时
7、间为 25 d35 d。 9 愈伤组织分化 9.1 愈伤组织增殖分化培养基采用 MS 培养基，激素配比 KT1.3 mg /L+NAA0.02 mg/L。 9.2 将大量繁殖的愈伤组织切成体积为 0.4 cm 3 0.6cm 3 的小块，接入愈伤组织分化培养基，在无菌培 养室内进行愈伤组织分化培养。 9.3 愈伤组织分化培养时间为 20 d30 d。 10 茎段不定芽诱导 10.1 不定芽诱导培养基采用 1/2MS 培养基，激素配比 6-BA0.8 mg/L+NAA0.05 mg/L。 10.2 对愈伤组织分化形成的枸杞丛生芽进行分切，将带少量愈伤组织的丛生芽接入不定芽诱导培养 基，于无菌培养
8、室内进行不定芽诱导。 10.3 不定芽诱导培养时间为 20 d30 d。 11 茎段生根培养 DB63/T 17032018 3 11.1 生根培养基采用 1/2MS 培养基，激素配比 IBA0.3 m g/L+NAA0.3 mg/L。 11.2 将生长健壮的丛生芽幼茎剪成 1cm2cm 左右长度，转接入生根培养基，在培养室进行生根培养， 生根培养时间为 15d20d。 11.3 经过生根培养生长，正常生根并且长势良好的组培苗可以进行移栽。部分组培苗通过循环进行茎 段生根培养扩大生产。 12 移植 12.1 基质 选用蛭石、珍珠岩和泥炭配比为 5:3:2 的混合基质，在高压灭菌锅（ 121）灭
9、菌 25 min，装入育 苗容器。移植前基质必须充分浸水。 12.2 移栽 选择粗壮、均一、长势好、无变异的组培苗，在培养瓶内倒入适量清水，摇动，使培养基与幼苗分 离，用镊子或小钩取出幼苗，用水冲洗干净粘附在根部的培养基，泥浆蘸根后植入育苗容器。 12.3 炼苗 组培苗移栽后，每天洒水 1 次 2 次，保持湿度 70% 90%；覆盖遮阳网，避免阳光直射，前 10 d 光强控制在 1000 lx 1600 lx，以后逐渐提高到自然光强；温度保持在 15 25 ；每 5 d 7 d 喷 1 次杀菌剂。经过 20 d 30 d 的过渡期后，进入常规管理。 13 苗期管理 苗期管理参照 DB63/T
10、1448 执行。 14 苗木质量 苗木质量标准按照DB63/T 236执行。 DB63/T 17032018 4 A A 附 录 A （资料性附录） MS 培养基成分 表A.1给出了枸杞组织培养MS培养基的成分 表A.1 MS 培养及成分 单位：mg/L 成分 含量 成分 含量 成分 含量 NH4NO3 1650 H3BO4 6.2 肌醇 100 KNO3 1900 MnSO44H 2O 22.3 烟酸 0.5 CaCl22H 2O 440 CoCl26H 2O 0.025 盐酸吡哆醇 0.5 MgSO47H 2O 370 FeSO47H 2O 27.8 盐酸硫胺素 0.1 KH2PO4 170 Na2EDTA2H 2O 37.3 甘氨酸 2 KI 0.83 CuSO45H 2O 0.025 _
