1、ICS 11.220B 41备 案 号 ： 60763-2019 DB54西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T 01592018牛 羊 东 毕 吸 虫 毛 蚴 孵 化 诊 断 方 法 2018-07-20发 布 2018-08-19实 施西 藏 自 治 区 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB54/T 0159 2018 I 目 次前 言 .II1 范 围 .12 术 语 和 定 义 .13 牛 羊 东 毕 吸 虫 病 的 诊 断 .14 诊 断 结 果 .2附 录 A（ 规 范 性 附 录 ） 实 验 用 品 与 试 剂 .3附 录 B（ 规 范 性 附 录 ） 样 本 采 集
2、 、 保 存 、 送 检 .4 DB54/T 0159 2018 II 前 言本 标 准 按 照 GB/T1.1的 规 则 起 草 。本 标 准 由 西 藏 自 治 区 农 牧 业 标 准 化 技 术 委 员 会 提 出 并 归 口 。本 标 准 由 西 藏 自 治 区 农 牧 科 学 院 畜 牧 兽 医 研 究 所 ， 中 国 农 业 科 学 院 上 海 兽 医 研 究 所 负 责 起 草 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 刘 建 枝 、 刘 金 明 、 石 斌 、 李 浩 、 夏 晨 阳 、 陆 珂 、 唐 文 强 、 朱 传 刚 、 单 曲 拉 姆 。本 标 准 为 首 次 制 定
3、。 DB54/T 0159 2018 1 牛 羊 东 毕 吸 虫 毛 蚴 孵 化 诊 断 方 法1 范 围本 标 准 规 定 了 牛 羊 东 毕 吸 虫 病 及 其 流 行 区 的 定 义 、 临 床 诊 断 、 实 验 室 诊 断 及 结 果 判 定 等 技 术 。本 标 准 适 用 于 西 藏 自 治 区 境 内 牛 羊 东 毕 吸 虫 病 的 诊 断 、 防 治 效 果 考 核 、 检 疫 和 流 行 病 学 调 查 。2 术 语 和 定 义下 列 术 语 及 定 义 适 用 于 本 标 准 。2.1 牛 羊 东 毕 吸 虫 病由 扁 形 动 物 门 、 吸 虫 纲 、 枭 形 目 、
4、分 体 科 、 东 毕 属 的 各 种 吸 虫 寄 生 于 牛 、 羊 肠 系 膜 静 脉 和 门 静 脉 系统 所 引 起 的 疾 病 。2.2 东 毕 吸 虫 病 流 行 区存 在 东 毕 吸 虫 的 中 间 宿 主 ， 有 牛 和 羊 感 染 的 地 区 。3 牛 羊 东 毕 吸 虫 病 的 诊 断3.1 临 床 诊 断 牛 、 羊 等 家 畜 感 染 东 毕 吸 虫 后 ， 临 床 症 状 因 家 畜 品 种 及 其 年 龄 和 感 染 强 度 而 异 。 本 病 一 般 为 慢 性 经过 的 消 耗 性 疾 病 ， 个 别 情 况 下 出 现 急 性 病 例 。 急 性 病 例 主
5、要 为 幼 龄 牛 羊 或 从 外 地 新 引 进 的 牛 羊 在 突 然 感染 大 量 尾 蚴 后 发 生 。 其 症 状 为 发 热 、 食 欲 减 退 、 呼 吸 促 迫 、 下 痢 、 消 瘦 等 ， 可 造 成 大 批 死 亡 。 慢 性 病 例指 感 染 剂 量 较 低 的 吸 虫 后 无 典 型 病 症 或 症 状 较 轻 者 ， 或 急 性 病 例 耐 过 后 的 慢 性 感 染 者 。 慢 性 病 例 的 症 状为 消 瘦 、 可 视 粘 膜 苍 白 ， 略 有 黄 染 ， 被 毛 杂 乱 ， 下 颌 及 腹 部 多 有 不 同 程 度 水 肿 ， 腹 围 增 大 ， 消 化
6、 不 良 ，多 有 稀 便 或 下 痢 ； 重 度 感 染 者 食 欲 停 止 、 久 卧 不 起 、 呼 吸 缓 慢 ， 最 后 衰 竭 而 死 亡 ； 幼 畜 发 育 停 滞 ， 母 畜不 发 情 ， 不 孕 或 流 产 。来 源 于 东 毕 吸 虫 流 行 区 的 家 畜 ， 有 以 上 症 状 者 ， 列 为 疑 似 病 例 ， 但 确 诊 需 进 行 实 验 室 诊 断 。3.2 实 验 室 诊 断3.2.1 实 验 步 骤3.2.1.1 取 样 每 头 （ 只 ） 家 畜 的 粪 样 分 别 进 行 1次 独 立 的 孵 化 试 验 。 将 采 集 的 粪 样 分 成 2份 ， 每
7、 份 粪 量 为 牛 粪 50g，羊 粪 10g。 DB54/T 0159 2018 2 3.2.1.2 羊 粪 加 样取 羊 粪 10g加 入 长 颈 平 底 烧 瓶 并 编 号 ,往 长 颈 平 底 烧 瓶 内 加 入 25 水 至 瓶 口 下 4cm 5cm处 。3.2.1.3 牛 粪 加 样将 50克 牛 粪 放 入 铜 筛 中 ， 铜 筛 置 塑 料 量 筒 上 部 ， 加 水 淹 没 粪 样 ， 用 竹 筷 搅 拌 至 稀 浆 状 ， 捞 出 铜 筛 ，沥 干 后 再 次 浸 入 ， 搅 拌 ， 如 此 3次 。 再 将 塑 料 量 筒 中 的 粪 样 静 置 沉 淀 15min
8、20min（ 室 温 超 过 20 时 静置 时 间 不 超 过 10min） ， 弃 上 层 清 液 ， 将 沉 淀 物 倒 入 长 颈 平 底 烧 瓶 ， 加 水 至 瓶 口 下 4cm 5cm。3.2.1.4 毛 蚴 孵 化用 玻 璃 棒 将 折 叠 好 的 1cm 1.5cm厚 的 松 软 脱 脂 棉 推 入 长 颈 平 底 烧 瓶 ,使 脱 脂 棉 刚 好 浸 入 液 面 ,补 加水 至 液 面 高 出 脱 脂 棉 2cm 3cm。 往 长 颈 平 底 烧 瓶 颈 部 加 脱 脂 棉 时 不 能 有 气 泡 ， 产 生 气 泡 时 ， 用 挑 虫 针 轻轻 地 挑 动 脱 脂 棉 使
9、 气 泡 溢 出 。 将 装 好 粪 样 的 长 颈 平 底 烧 瓶 放 置 于 20 30 环 境 中 ， 在 光 照 （ 日 光 或 灯 光 ） 条 件 下 进 行 孵 育 ， 避免 阳 光 直 射 。 如 室 温 低 于 20 ， 可 将 长 颈 平 底 烧 瓶 放 入 25 温 箱 （ 内 加 入 日 光 灯 ） 或 水 浴 锅 中 进 行 孵 化 。3.2.2 毛 蚴 观 察孵 化 3h， 将 长 颈 平 底 烧 瓶 向 着 光 源 （ 或 在 光 线 充 足 的 地 方 ） ， 并 以 黑 色 遮 光 板 为 背 景 ， 肉 眼 或 用 放大 镜 观 察 瓶 颈 部 脱 脂 棉 以
10、 上 清 水 部 位 。 每 个 样 品 每 次 观 察 应 在 2min以 上 ， 孵 化 后 5小 时 再 观 察 一 次 。3.3 结 果 判 定3.3.1 东 毕 吸 虫 毛 蚴 形 态 及 运 动 特 征毛 蚴 眼 观 为 针 尖 大 小 、 灰 白 色 、 梭 形 ， 折 光 性 强 ， 在 脱 脂 棉 上 层 清 液 中 作 水 平 或 斜 向 直 线 运 动 。3.3.2 阴 性 、 阳 性 判 定 发 现 毛 蚴 ， 则 判 定 为 阳 性 ； 阴 性 样 本 复 查 1次 ， 如 未 发 现 毛 蚴 ， 则 判 定 为 阴 性 。4 诊 断 结 果4.1 疑 似有 流 行
11、病 学 接 触 史 的 动 物 ， 出 现 本 病 临 床 症 状 。4.2 确 诊粪 便 孵 化 发 现 毛 蚴 。 DB54/T 0159 2018 3 AA附 录 A（ 规 范 性 附 录 ）实 验 用 品 与 试 剂A.1 实 验 用 品A.1.1 孵 育 室 （ 箱 ）室 温 低 于 20 时 ， 采 用 温 箱 或 在 房 间 内 开 启 取 暖 设 备 ， 以 维 持 20 25 的 环 境 条 件 ， 也 可 以 用 水浴 锅 维 持 孵 化 温 度 为 25 。 孵 育 室 （ 箱 ） 需 满 足 日 光 或 灯 光 的 光 照 条 件 。 500mL烧 杯 或 塑 料 量
12、杯 、 长 颈 平 底 球 瓶 (500ml)、 40目 80目 的 铜 筛 滤 杯 、 温 度 计 、 水 浴 锅 、 玻 璃 棒 、挑 虫 针 、 洗 瓶 、 棉 花 、 镊 子 、 遮 光 板 (黑 色 )、 记 号 笔 、 竹 筷 、 粪 桶 、 放 大 镜 、 显 微 镜 、 吸 管 、 载 玻 片 、盖 玻 片 、 取 暖 炉 、 盆 、 水 缸 、 水 桶 、 闹 钟 。A.2 试 剂A.2.1 水蒸 馏 水 或 桶 （ 瓶 ） 装 饮 用 水 ， 也 可 用 自 来 水 、 河 水 、 池 水 、 井 水 等 。 处 理 方 法 如 下 ： 自 来 水 ， 在 容器 中 存 放
13、 12h以 上 或 阳 光 下 暴 晒 8小 时 以 上 ； 河 水 、 池 水 、 井 水 等 ， 加 温 至 60 ， 冷 却 ； 混 浊 的 水 ， 每 50L水 加 明 矾 3g 5g， 充 分 搅 拌 ， 澄 清 。 用 NaOH或 HCL调 节 pH值 至 6.8 7.2。自 来 水 在 盛 器 中 存 放 去 氯 过 程 中 需 敞 口 ， 不 能 盖 盖 子 。 DB54/T 0159 2018 4 BB附 录 B（ 规 范 性 附 录 ）样 本 采 集 、 保 存 、 送 检B.1 样 本 采 集直 肠 采 集 新 鲜 粪 样 ， 采 粪 量 ： 牛 100g， 羊 20g 25g。 每 采 集 一 头 （ 只 ） 家 畜 更 换 手 套 一 次 ， 粪 样 采集 时 间 为 每 年 的 9月 底 12月 初 。B.2 样 本 保 存 采 集 的 粪 样 保 存 于 无 毒 、 无 污 染 的 自 封 袋 内 ， 标 记 采 集 地 点 、 畜 种 、 性 别 、 年 龄 、 采 粪 日 期 ， 4保 存 。B.3 样 本 送 检4 条 件 下 保 存 送 检 ， 7天 内 完 成 检 查 。_
