1、ICS 65.020.40 B61 DB51 四川省 地 方 标 准 DB 51/T 2632 2019 贝莱斯芽孢杆菌对 核桃炭疽病防控技术规程 2019 - 12 - 17 发布 2020 四 川省市场监督管理局 发布 - 01 - 01 实施 DB51/T 26322019 I DB51/T 26322019 II 目 次 前言 . III 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 生物防控原则 . 2 5 贝莱斯芽孢杆菌液体制剂制备方法 . 3 6 贝莱斯 芽孢杆菌制剂剂型、有效含量及保存方法 . 3 7 防控技术 . 3 8 注意事项 . 3 附录 A
2、（资料性附录） 贝莱斯芽孢杆菌（ Bacillus velezensis） 对核桃炭疽病的防效 . 5 DB51/T 26322019 III 前 言 本标准按 GB/T1.1-2009标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写的规则起草。 本标准由四川省林业和草原局提出并归口。 本标准由四川省市场监督管理局批准。 本标准主要起草单位：西华师范大学 四川省林业科学研究院 四川农业大学 会理县林业和草原局 本标准主要起草人：杨莉 李丕军 朱天辉 邢文曦 李正武 DB51/T 26322019 1 贝莱斯芽孢杆菌对核桃炭疽病防控技术规程 1 范围 本标准规定了贝莱斯芽孢杆菌（ Bacillus
3、velezensis）制剂防治核桃炭疽病（ walnut anthracnose）的 一般原则和技术要求。 本标准适用于四川省核桃炭疽病的生物防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB 20287-2006 农用微生物菌剂 NY/T 1114-2006 微生物肥料实验用培养基技术条件 3 术语和定义 下列术语 和定义适用于本标准。 3.1 核桃炭疽病 walnut anthracnose 核桃最重要
4、的病害之一，主要危害核桃果实 ， 产生黑褐色 稍凹陷、圆形或不规则形病斑，严重时使 全果 腐烂 ，干缩脱落。 3.2 核桃炭疽病病菌 Colletotrichum gloeosporioides 核桃炭疽病病菌学名为 Colletotrichum gloeosporioides。隶属半知菌亚门（ Deuteromycotina），腔孢 纲（ Coelomycetes），炭疽菌属（ Colletotrichum）。该真菌分布广、寄主多，常危害植物叶、花、果、茎 及嫩枝，造成叶斑、叶枯、花腐、果腐、枝枯等症状，影响植物生长发育。该真菌感染核桃，主要引起 核桃果实发生炭疽病，使核桃果实发生腐烂，导致
5、提前落果。 3.3 DB51/T 26322019 2 贝莱斯芽孢杆菌 Bacillus velezensis 隶属厚壁菌门（ Firmicutes），芽孢杆菌纲（ Bacilli），芽孢杆菌目（ Bacillales），芽孢杆菌科（Bacillaceae ）， 芽孢杆菌属（ Bacillus）细菌。该菌株由四川省 林业科学研究院森林病虫害防治研究所分离获得。 3.4 植物病害生物防治 Biocontrol of plant diseases 指利用有益微生物和生物代谢产物对植物病害进行有效防范和治疗。 3.5 一级斜面种子 Primary bevel seed culture 处于休眠状态的
6、菌种，经过斜面活化后，成长为能够迅速生长为合格菌体的菌种。 3.6 二级液体种子 Secondary liquid seed culture 一级斜面种子接入到有培养液的三角瓶中，经培养得到大量菌体。 3.7 液体发酵 Liquid fermentation 把二级液体种子接入到有培养液的体积较大的三角瓶中进行发酵。 3.8 发病率 Incidence 发病林地、植株和器官等发病的百分率，发病率 =病株数/ 总株数 100%。 3.9 病情指数 Disease index 全面考虑发病率与严重度的 综合指标，病情指数 =100（各病级果实数 各级代表值） /(调查总果 实数 最高级代表值 )。
7、 3.10 防治效果 Control effect 防治效果 =（对照病情指数 -处理病情指数） / 对照病情指数 100%。 4 生物防控原则 DB51/T 26322019 3 应遵循“预防为主，防治结合”的原则。减少因施用化学农药而造成病原菌抗药性的增强，以及给 人们的身体健康和生态环境带来严重伤害。 5 贝莱斯芽孢杆菌液体制剂制备方法 5.1 一级斜面种子制备 按常规方法制作牛肉膏蛋 白胨斜面培养基，接种贝莱斯芽孢杆菌后培养成一级斜面种子。 5.2 二级液体种子制备 采用营养肉质培养液经高压灭菌后，按 100 mL液体盛于300 mL 三角瓶比例（通氧控 制）装瓶，在 无菌状态接种上述
8、一级斜面种子，每瓶接种 2支斜面种子培养成贝莱斯芽孢杆菌二级液体种子。 5.3 液体发酵 采用营养肉质培养液经高压灭菌后，按 200 mL液体盛于 500 mL三角瓶比例（通氧控制）装瓶， 在无菌状态接种上述二级液体种子，接种量 10% (体积比) ， 30， 180 r/min 培养成 贝莱斯芽孢杆菌液 体制剂。 6 贝莱斯芽孢杆菌制剂剂型、有效含量及保存方法 贝莱斯芽孢杆菌制剂剂型为悬浮剂；有效成份为 芽孢，含量为 1109 cfu/mL。 瓶装制剂贮存于阴凉、干燥处，室温保存半年或低温（ 4） 1 年半 不影响治疗效果。 7 防控技术 7.1 防治时间及频率 核桃炭疽病以预防为主。在桃树
9、开花后第三周开始施药，每隔 15天喷施一次，共 7次。防治效果见 附录 A。 7.2 防治方法 使用背负式电动喷雾器，确保药液均匀覆盖全株果叶，喷液量以均匀喷湿叶片正反面、核桃果实表 面、有药液下滴为度。结果资料可参考附录 A。 8 注意事项 不能与链霉素等抗生素混用。 不可与碱性的农药等物质混合使用。 使用本品时应穿戴防护服和手套，避免吸入药液。施药期间不能吃东西和饮水；施药后应及时洗手 和洗脸。 避免孕妇和哺乳期妇女接触。 DB51/T 26322019 4 禁止在河塘等水域内清洗施药用具。防止药液污染水源地。 属生物类农药，注意防晒、防霉、防腐，不得与食品和日用品一起运输和贮存。 应选择阴天或午后使用，若药后下雨应在雨停后再次喷施或涂抹，按照实际病害严重度选择浓度及 用量。 DB51/T 26322019 5 A A 附 录 A （资料性附录） 贝莱斯芽孢杆菌（ Bacillus velezensis）对核桃炭疽病的防效 制剂浓度（活体与代谢物混合剂） 发病率 % 病情指数 防治效果 % 稀释 1000倍 24 28.38 71.62 稀释 800倍 11 20.24 79.76 稀释 600倍 9 18.68 81.32 稀释 400倍 7 13.45 86.55 稀释 200倍 5 10.55 89.45 未处理 38 51.60 _
