1、ICS 65.020.01 B 05 备案号： DB42 湖北省 地方标准 DB42/T 972 2014 甘薯种质资源离体保存技术规程 Technical regulations for in vitro conservation of sweetpotato germplasm （报批稿） (完成时间 ： 2013-09-28) 2014 04 28 发布 2014 07 28 实施 湖北省质量技术监督局 发布 DB42/T 9722014 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 术语与定义 . 1 2.1 甘薯种质资源 sweetpotato germplasm . 1 2.2
2、 甘薯脱毒试管苗 virus-free tube seedling . 1 2.3 离体保存 in vitro conservation . 1 3 甘薯种质资源离体保存的流程图 . 1 4 甘薯种质资源离体保存技术 . 1 4.1 外植体获取 . 1 4.2 外植体消毒 . 1 4.3 茎尖剥取 . 2 4.4 茎尖培养 . 2 4.5 病毒检测 . 2 4.6 继代培养保存 . 2 DB42/T 972 2014 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准由湖北省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位： 湖北省农
3、业科学院 粮食作物 研究所 、湖北郧府薯业有限公司 。 本标准主要起草人： 杨新笋、 王连军、 苏文瑾、雷剑 、柴沙沙、韩堂伍、焦春海、郭英 。 DB42/T 9722014 1 甘薯种质资源离体保存技术规程 1 范围 本标准规定了甘薯种质资源离体保存技术的离体 保存的流程图和离体 保存技术相关内容。 本标准适用于甘薯种质资源的离体保存。 2 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 甘薯种质资源 sweetpotato germplasm 携带不同遗传物质的甘薯品种（品系）的统称，包括地方品种、选育品种、品系和国外引进材料。 2.2 甘薯脱毒试管苗 virus-free tube s
4、eedling 应用茎尖分生组织培养技术获得，经检测确认不带甘薯褪绿矮化病毒 (Sweet potato chlorotic stunt virus， SPCSV) 和 甘薯羽状斑驳病毒 (Sweet potato feathery mottle virus， SPFMV)。 2.3 离体保存 in vitro conservation 利用组织培养技术对甘薯种质进行低温保存。 3 离体保存的流程图 外植体获取 外植体消毒 茎尖剥取 茎尖分生组织培养 继代培养保 存。 4 离体保存技术 4.1 外植体获取 选用健康薯块，定植于盆钵中，置于适宜的环境条件中生长，取 3 cm -5 cm 的薯芽为
5、外植体，保湿备 用。 4.2 外植体消毒 DB42/T 972 2014 2 去除外植体材料上肉眼可见的小叶，留下 1 cm -1.5 cm 长的茎尖，用自来水冲洗后在无菌条件下，先 用 70 的乙醇溶液浸泡 30s，再用 2% 次氯酸钠溶液浸泡 5 min -10 min，然后用无菌水漂洗 3 次，每 次 30s 以上，保湿备用。 4.3 茎尖剥取 将经过表面消毒的外植体置于倒扣的无菌培养皿上，用无菌的镊子和手术刀在双筒体式显微镜下剥离 外层幼叶，切取 0.5mm 左右的茎尖组织。 4.4 茎尖培养 将剥取的茎尖组织接种在 MS 培养基附加 2 mg/L 6- BA、 3蔗糖、 0.8%琼脂
6、粉、 pH 值 5.8，置于 28 2 、光强 1500lux 2000lux、光照时间 12h 的条件下培养，获得试管苗。 4.5 病毒检测 采用酶联免疫技术检测甘薯褪绿矮化病毒 (Sweet potato chlorotic stunt virus， SPCSV) 和 甘薯羽状斑驳 病毒 (Sweet potato feathery mottle virus， SPFMV)， 选留脱毒试管苗。 4.6 继代培养保存 采用单节段繁殖，接种在 MS 培养基附加 5g/L 甘露醇、 3 蔗糖、 0.8%琼脂粉、 pH 值 5.8，置于 18 2 、光强 1500lux 2000lux、光照时间 12h 的条件下培养保存。
