1、ICS 11.220B 41备 案 号 ： DB42湖 北 省 地 方 标 准DB42/T 794 2012禽 流 感 病 毒 免 疫 层 析 检 测 方 法 Method of the immunochromatographic assay for thedetection of avian influenza virus 2012 -01- 06发 布 2012 -03-01实 施湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB42/T 7942012 I 目 次前 言 .II引 言 .III1 范 围 .12 缩 略 词 .13 实 验 原 理 .1 4 实 验 条 件 .15 实
2、验 材 料 .16 样 品 处 理 .27 实 验 方 法 .28 结 果 判 定 .29 注 意 事 项 .3 DB42/T 7942012 II 前 言本 标 准 按 GB/T 1.1-2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 由 华 中 农 业 大 学 提 出 。本 标 准 由 湖 北 省 农 业 厅 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 华 中 农 业 大 学 动 物 医 学 院 、 武 汉 科 前 动 物 生 物 制 品 有 限 责 任 公 司 、 湖 北 省 动 物 疫病 预 防 控 制
3、中 心 。本 标 准 起 草 人 ： 金 梅 林 、 陈 焕 春 、 但 汉 并 、 郭 学 波 、 董 晓 辉 、 宋 念 华 、 张 安 定 、 周 红 波 、 孙 小 美 、李 淑 云 、 周 艳 君 、 田 峰 。 DB42/T 7942012 III 引 言禽 流 感 病 毒 （ Avian Influenza Virus, AIV） 具 有 易 变 异 的 特 点 ， 可 通 过 突 变 获 得 对 人 的 感 染 力 和 致病 能 力 ， 导 致 严 重 的 公 共 卫 生 危 害 。 为 加 强 禽 流 感 监 测 ， 制 定 了 禽 流 感 病 毒 免 疫 层 析 检 测 方
4、 法 ， 本方 法 具 有 简 便 、 快 速 的 优 点 ， 尤 其 适 合 基 层 现 场 使 用 。 DB42/T 7942012 1 禽 流 感 病 毒 免 疫 层 析 检 测 方 法1 范 围本 标 准 规 定 了 禽 流 感 病 毒 免 疫 层 析 检 测 的 方 法 的 缩 略 词 、 实 验 原 理 、 实 验 材 料 、 样 品 处 理 、 实 验 方法 、 结 果 判 定 和 注 意 事 项 等 。本 标 准 适 用 于 禽 类 咽 /鼻 拭 子 、 肛 拭 子 、 内 脏 组 织 、 鸡 胚 尿 囊 液 及 细 胞 培 养 物 中 禽 流 感 病 毒 的 检 测 。2 缩
5、 略 词下 列 缩 略 词 适 用 于 本 标 准 。T线 ： 检 测 线 C线 ： 质 控 线3 实 验 原 理本 方 法 用 抗 禽 流 感 病 毒 核 蛋 白 的 单 克 隆 抗 体 标 记 胶 体 金 颗 粒 ， 以 硝 酸 纤 维 素 （ NC） 膜 为 载 体 ， 利用 微 孔 膜 的 毛 细 管 作 用 ， 滴 加 在 膜 条 一 端 的 液 体 慢 慢 向 另 一 端 渗 透 。 在 移 动 过 程 中 免 疫 金 复 合 物 会 与NC 膜 表 面 检 测 线 、 质 控 线 处 包 被 的 抗 体 发 生 反 应 ， 并 通 过 免 疫 金 的 颜 色 显 示 出 来 。
6、样 品 中 含 有 禽 流 感病 毒 时 ， 在 检 测 线 和 质 控 线 位 置 均 出 现 红 色 的 条 带 。4 实 验 条 件4.1 实 验 室 实 验 操 作 宜 在 常 温 （ 18 25 ） 进 行 。4.2 仪 器台 式 低 温 高 速 离 心 机 、 微 量 移 液 器 、 冰 箱 、 吸 头 。4.3 人 员注 意 个 人 防 护 和 环 境 保 护 。5 实 验 材 料5.1 检 测 卡禽 流 感 病 毒 检 测 试 纸 条 装 在 塑 料 卡 中 制 成 检 测 卡 ， 铝 箔 密 封 ， 内 装 干 燥 剂 ， 室 温 或 冷 藏 保 存 。 检 测 卡 结 构
7、如 图 1 所 示 。 DB42/T 7942012 2 图 15.2 样 品 处 理 液取 24.2 g Tris Base 和 10 mL Triton-x 100， 加 注 射 用 水 至 1 L,调 pH 值 至 9.0， 过 滤 除 菌 ， 无 菌 分 装 ，1 mL/管 。6 样 品 处 理6.1 咽 /鼻 拭 子 、 肛 拭 子将 收 集 的 咽 /鼻 拭 子 、 肛 拭 子 插 入 到 含 有 处 理 液 的 样 品 管 中 ， 充 分 混 合 ， 使 其 溶 解 ， 以 12,000 r/min离 心 10 min， 取 上 清 。6.2 内 脏 组 织 称 取 组 织 块
8、0.5 g， 置 于 匀 浆 器 中 ， 加 生 理 盐 水 1 mL， 研 磨 后 取 出 组 织 浸 出 液 ， 然 后 置 2 8 ，12,000 r/min 离 心 10 min， 取 上 清 。6.3 鸡 胚 尿 囊 液鸡 胚 尿 囊 液 以 12,000 r/min 离 心 2 min， 取 上 清 。6.4 细 胞 培 养 物细 胞 培 养 物 可 直 接 用 于 检 测 或 者 冻 融 一 次 后 检 测 。7 实 验 方 法将 检 测 卡 置 于 平 整 台 面 上 ， 取 适 量 样 品 80 L 120 L（ 约 3 滴 4 滴 ） ， 缓 慢 滴 加 到 样 品 孔 中
9、 ，当 看 到 红 色 液 体 在 试 纸 条 上 移 动 时 ， 放 慢 加 样 速 度 。 整 个 加 样 过 程 在 1 min 内 完 成 。 加 样 完 成 后 5 min 30 min 内 观 察 的 结 果 有 效 。8 结 果 判 定 DB42/T 7942012 3 8.1 阳 性 结 果在 试 纸 条 上 出 现 两 条 红 色 的 条 带 （ T 线 和 C 线 ） 。8.2 阴 性 结 果在 试 纸 条 上 仅 出 现 一 条 红 色 的 条 带 （ C 线 ） 。8.3 无 效 结 果在 试 纸 条 质 控 线 （ C 线 ） 处 不 出 现 红 色 的 条 带 。9 注 意 事 项实 验 过 程 中 注 意 做 好 个 人 的 生 物 安 全 防 护 措 施 ， 废 弃 物 收 集 后 进 行 无 害 化 处 理 。 _
