1、注 ：ICS 65.020B15 DB42湖 北 省 地 方 标 准DB42/T 675 2010茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 生 产 及 应 用技 术 规 程 Technical regulations for producing and using of Ectropis obliquanucleopolyhedrovirus 2010 -12- 20发 布 2011- 02-18实 施湖 北 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB42/T 6752010 I 目 次前 言 .I引 言 .II1 范 围 .12 规 范 性 引 用 文 件 .13 术 语 和 定 义
2、 .14 感 染 途 径 与 致 病 特 点 .24.1 感 染 途 径 .24.2 致 病 特 点 .2 5 增 殖 .25.1 增 殖 方 式 .25.2 增 殖 方 法 .26 提 纯 .27 制 剂 生 产 .27.1 浓 度 测 定 .27.2 制 剂 成 分 .37.3 生 产 工 艺 .37.4 制 剂 杀 虫 活 性 检 测 .37.5 防 治 效 果 评 价 .37.6 贮 存 要 求 .3 8 应 用 方 法 .38.1 应 用 条 件 .48.2 防 治 时 期 .48.3 应 用 剂 量 .48.4 防 治 要 求 .48.5 与 其 它 生 物 农 药 混 用 要 求
3、 .48.6 施 用 要 求 .4附 录 A（ 资 料 性 附 录 ） 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 生 产 工 艺 .5附 录 B（ 资 料 性 附 录 ） 病 毒 制 剂 防 治 茶 尺 蠖 应 用 效 果 评 价 .6附 录 C（ 资 料 性 附 录 ） 茶 尺 蠖 各 龄 幼 虫 形 态 特 征 .7 DB42/T 6752010 I 前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.1-2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 则 起 草 。请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本
4、 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任 。本 标 准 由 湖 北 省 农 业 科 学 院 提 出 并 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 湖 北 省 农 业 科 学 院 果 树 茶 叶 研 究 所 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 毛 迎 新 、 刘 明 炎 、 龚 自 明 、 谭 荣 荣 。 DB42/T 6752010 II 引 言茶 尺 蠖 是 我 省 茶 区 主 要 茶 树 害 虫 之 一 ， 严 重 影 响 茶 叶 的 产 量 。应 用 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 是 当 前 防 治 茶 尺 蠖 最 安 全 、 有 效 的
5、手 段 之 一 ， 为 了 充 分 发 挥 该 病 毒 防 治害 虫 的 作 用 ， 在 有 机 茶 、 无 公 害 茶 生 产 中 科 学 地 加 以 应 用 ， 特 制 定 本 标 准 。 DB42/T 6752010 1 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 生 产 及 应 用 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 生 产 及 应 用 技 术 规 程 的 术 语 和 定 义 、 感 染 途 径 与 致 病 特点 、 增 殖 、 提 纯 、 制 剂 生 产 以 及 应 用 方 法 要 求 。本 标 准 适 用 于 茶 尺
6、蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 的 生 产 和 田 间 应 用 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 NY/T 5018 2001 无 公 害 食 品 茶 叶 生 产 技 术 规 程3 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。3.1 多 角 体 包 涵
7、 体 polyhedral inclusion body（ 简 称 PIB）病 毒 核 衣 壳 外 面 被 蛋 白 质 晶 体 包 被 所 形 成 的 多 角 形 包 涵 体 。3.2 病 毒 活 体 增 殖 multiplication of virus in vivo 以 纯 化 的 病 毒 饲 喂 健 康 的 宿 主 幼 虫 ， 使 病 毒 粒 子 侵 入 宿 主 的 细 胞 ， 在 细 胞 中 大 量 复 制 。3.3 防 治 适 期 optimum control period使 用 病 毒 制 剂 防 治 茶 尺 蠖 ， 可 取 得 最 佳 的 防 治 效 果 ， 较 大 程 度
8、地 减 少 产 量 损 失 ， 降 低 防 治 成 本 的 时期 。3.4 挑 治 selected control在 茶 尺 蠖 初 孵 幼 虫 （ 1 2龄 ） 集 中 为 害 期 ， 对 有 害 虫 为 害 的 茶 树 喷 洒 病 毒 液 防 治 。3.5 龄 期 instar DB42/T 6752010 2 即 昆 虫 幼 虫 在 连 续 两 次 蜕 皮 之 间 所 经 历 的 时 间 ， 从 卵 孵 化 至 第 一 次 蜕 皮 为 第 一 龄 期 ， 第 一 次 蜕 皮 至第 二 次 蜕 皮 为 第 二 龄 期 ， 以 下 类 推 。4 感 染 途 径 与 致 病 特 点4.1 感
9、 染 途 径以 带 有 病 毒 的 茶 树 叶 片 添 食 茶 尺 蠖 幼 虫 ， 病 毒 包 涵 体 在 虫 体 中 肠 内 碱 性 条 件 下 释 放 出 病 毒 粒 子 ， 感染 宿 主 的 中 肠 细 胞 和 其 它 细 胞 。4.2 致 病 特 点病 毒 制 剂 专 性 感 染 茶 尺 蠖 ， 对 人 、 畜 安 全 ； 茶 尺 蠖 幼 虫 感 染 病 毒 后 6 d 20 d 陆 续 死 亡 ； 具 有 持 效特 性 ， 可 在 子 代 中 自 然 传 播 流 行 。 5 增 殖5.1 增 殖 方 式以 前 一 代 感 染 病 毒 死 亡 的 典 型 虫 尸 为 毒 种 ， 添 食
10、 茶 尺 蠖 幼 虫 增 殖 病 毒 。5.2 增 殖 方 法以 直 径 为 50 cm 的 塑 料 盆 为 养 虫 容 器 ， 以 人 工 饲 养 的 健 康 茶 尺 蠖 幼 虫 为 宿 主 。 塑 料 盆 承 装 供 虫 取 食的 新 鲜 茶 树 枝 叶 ， 塑 料 罩 罩 于 盆 上 ， 以 高 密 纱 布 覆 盖 塑 料 罩 ， 防 止 幼 虫 逃 逸 ， 每 个 养 虫 容 器 饲 养 幼 虫400 500 条 。 当 茶 尺 蠖 幼 虫 长 至 3 龄 ， 开 始 接 种 病 毒 ， 接 毒 浓 度 为 310 6 PIB/ml， 每 个 养 虫 容 器 喷 病 毒液 50 ml，
11、 喷 洒 病 毒 液 2 d 后 更 换 新 鲜 茶 树 枝 叶 ， 7 d 后 逐 日 收 集 染 毒 死 虫 。室 内 病 毒 增 殖 ， 宜 选 择 在 茶 尺 蠖 第 1 代 、 第 2 代 、 第 6 代 以 及 第 7代 发 生 期 ， 温 度 高 于 27 不 宜进 行 病 毒 的 增 殖 。6 提 纯将 感 染 病 毒 致 死 的 虫 尸 加 少 量 无 菌 水 置 组 织 匀 浆 器 皿 中 匀 浆 3 min 5 min， 取 出 按 1:8 加 无 菌 水 混匀 ， 先 在 500 r/min 条 件 下 离 心 5 min， 除 去 细 胞 组 织 碎 片 和 沉 淀
12、， 取 上 清 液 再 经 3500 r/min 离 心 30 min，弃 去 上 清 液 ， 用 无 菌 水 悬 浮 沉 淀 ， 重 复 上 述 离 心 2 3 次 ， 得 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 的 粗 提 液 。7 制 剂 生 产 7.1 浓 度 测 定取 充 分 摇 匀 的 病 毒 粗 提 液 1 ml， 按 10 倍 梯 度 依 次 稀 释 10、 102、 103、 104倍 ， 充 分 摇 匀 ， 用 移 液 管（ 枪 ） 吸 取 配 制 好 的 悬 液 置 血 球 计 数 板 上 ， 静 止 2 min 3 min 后 ， 置 光 学 显 微 镜 下 观 察 计
13、 数 ， 分 5 点取 样 80 小 格 （ 即 5 个 中 格 ） ， 选 择 适 当 的 稀 释 浓 度 （ 以 每 个 中 格 中 多 角 体 数 目 不 超 过 40 个 为 宜 ） 计 数多 角 体 ， 每 个 血 球 计 数 板 重 复 3 次 ， 取 其 平 均 值 ， 按 公 式 （ 1） 计 算 多 角 体 含 量 。BAC 610480 .(1)式 中 ： DB42/T 6752010 3 C 多 角 体 浓 度 （ PIB/ml） ；A 80个 小 格 中 多 角 体 的 数 量 ；B 稀 释 倍 数 ；7.2 制 剂 成 分2109PIB/ml 茶 尺 蠖 核 型 多
14、角 体 病 毒 水 剂 含 甘 油 8%（ v/v） 。7.3 生 产 工 艺参 见 附 录 A7.4 制 剂 杀 虫 活 性 检 测取 210 9PIB/ml 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 水 剂 30 l， 加 水 至 20 ml， 喷 洒 茶 树 叶 片 ， 接 毒 健 康 的 3 龄茶 尺 蠖 幼 虫 50 头 ， 在 温 度 24 、 湿 度 70 %条 件 下 ， 接 毒 后 第 18 d， 虫 口 死 亡 率 不 低 于 80 %， 表 明 病毒 制 剂 的 杀 虫 活 性 达 到 合 格 标 准 ， 其 中 死 亡 率 按 公 式 （ 2） 计 算 。10050 KN
15、 .(2)式 中 ：N 死 亡 率 （ %） ；K 累 计 死 亡 虫 口 数 ；7.5 防 治 效 果 评 价施 病 毒 制 剂 前 ， 在 防 治 区 （ 处 理 区 ） 的 茶 树 蓬 面 随 机 选 取 3 点 ， 每 点 大 小 为 1 m 2， 在 防 治 区 以 外设 定 空 白 对 照 区 ， 选 取 同 样 大 小 的 3 点 ， 对 照 区 与 施 病 毒 制 剂 区 间 隔 不 少 于 10 m， 施 病 毒 制 剂 前 及 施后 第 8 d、 12 d、 16 d、 20 d（ 直 至 全 部 化 蛹 ） 分 别 计 数 各 点 上 的 茶 尺 蠖 活 虫 数 ， 将
16、相 关 数 据 填 入 附 录 B。根 据 施 病 毒 制 剂 前 、 后 虫 口 数 量 的 变 化 ， 分 别 按 公 式 （ 3） 、 （ 4） 计 算 虫 口 减 退 率 和 防 治 效 果 。100 Y ZYP .(3)式 中 ：P 虫 口 减 退 率 （ %） ；Y 防 治 前 活 虫 数 ；Z 防 治 后 活 虫 数 ； 100100 112 PPPI .(4) 式 中 ：I 防 治 效 果 （ %） ；P1 空 白 对 照 区 虫 口 减 退 率 （ %） ；P2 防 治 区 虫 口 减 退 率 （ %） ；7.6 贮 存 要 求在 常 温 、 避 光 条 件 下 贮 存 ，
17、保 质 期 18个 月 。8 应 用 方 法 DB42/T 6752010 4 8.1 应 用 条 件茶 尺 蠖 幼 虫 发 生 期 ， 日 平 均 温 度 10 27 。8.2 防 治 时 期适 用 于 茶 尺 蠖 第 1 代 、 第 2 代 、 第 6 代 以 及 第 7 代 幼 虫 发 生 期 。8.3 应 用 剂 量防 治 不 同 虫 龄 宿 主 需 要 使 用 不 同 剂 量 的 多 角 体 包 涵 体 。 1 2 龄 喷 施 3106 PIB/ml 病 毒 液 ， 3 龄 喷 施510 6 PIB/ml 病 毒 液 ， 4 龄 喷 施 1107 PIB/ml 病 毒 液 ， 用 量
18、 均 为 450 L/hm2。8.4 防 治 要 求严 格 控 制 第 1 代 ， 减 轻 对 春 茶 的 危 害 。 越 冬 前 （ 第 6 代 或 第 7 代 ） 防 治 ， 降 低 翌 年 的 虫 口 数 。 对 发生 较 轻 、 危 害 中 心 明 显 的 茶 园 ， 采 取 挑 治 ； 在 虫 口 密 度 较 高 时 （ 虫 口 密 度 达 到 每 平 方 米 10 头 ） ， 防 治 时宿 主 龄 期 宜 小 不 宜 大 。 以 降 低 宿 主 当 代 种 群 数 量 为 目 标 ， 应 选 择 在 1 2 龄 幼 虫 期 防 治 ， 防 治 指 标 按 照NY/T 5018 20
19、01 执 行 ； 以 逐 代 传 播 感 染 、 形 成 病 毒 流 行 链 为 目 标 ， 宜 在 3 4 龄 进 行 防 治 （ 茶 尺 蠖 幼虫 龄 期 划 分 参 见 附 录 C） 。8.5 与 其 它 生 物 农 药 混 用 要 求茶 尺 蠖 在 感 染 病 毒 后 2 d 5 d 出 现 行 动 迟 缓 、 食 欲 减 退 、 体 色 变 暗 等 症 状 ， 10 d 18 d 达 到 死 亡 高峰 ， 宜 与 苏 云 金 杆 菌 （ Bacillus thuringiensis） 、 苦 参 碱 （ Matrine） 、 鱼 藤 酮 （ Rotenone） 等 生 物 农 药 混
20、 合 使 用 ， 加 速 害 虫 死 亡8.6 施 用 要 求喷 施 病 毒 制 剂 ， 宜 采 用 蓬 面 扫 喷 方 式 ， 低 容 量 喷 雾 。 在 发 生 较 轻 、 发 虫 中 心 明 显 的 茶 园 挑 治 ， 即 对发 虫 中 心 及 邻 近 1 m 以 内 的 嫩 叶 层 喷 施 病 毒 制 剂 ， 阴 天 可 全 天 施 用 ， 晴 天 宜 在 下 午 17 时 以 后 喷 施 。 DB42/T 6752010 5 AA附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 生 产 工 艺图 A.1 给 出 了 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病
21、 毒 制 剂 生 产 工 艺 。采 集 健 康 茶 尺 蠖 蛹 饲 毒 感 染收 集 染 毒 的 典 型 虫 尸室 内 饲 养组 织 匀 浆过 滤 差 速 离 心 2 次多 角 体 粗 制 品多 角 体 计 数摇 匀 辅 助 剂 定 量 分 装制 剂杀 虫 活 性 检 测 大 田 防 效 评 价图 A.1 茶 尺 蠖 核 型 多 角 体 病 毒 制 剂 生 产 工 艺 DB42/T 6752010 6 BB附 录 B（ 资 料 性 附 录 ）病 毒 制 剂 防 治 茶 尺 蠖 应 用 效 果 评 价表 B.1给 出 了 病 毒 制 剂 防 治 茶 尺 蠖 应 用 效 果 评 价 。表 B.1
22、病 毒 制 剂 防 治 茶 尺 蠖 应 用 效 果 评 价防 治日 期 龄 期 用 药 前虫 口 数(头 ) 处 理浓 度 喷 药方 式 感 染 病 毒 死 亡 情 况 （ 头 ） 虫 口 减退 率 （ %） 防 治 效 果（ %） 备 注8d 12d 16d 20d DB42/T 6752010 7 CC附 录 C（ 资 料 性 附 录 ）茶 尺 蠖 各 龄 幼 虫 形 态 特 征表 C.1给 出 了 茶 尺 蠖 各 龄 幼 虫 形 态 特 征 。表 C.1 茶 尺 蠖 各 龄 幼 虫 形 态 特 征龄 期 体 长 (mm) 体 色 特 征1 1.8 4.0 黑 各 节 环 列 小 白 点 ， 纵 列 成 白 线 ， 后 期 转 褐 色 ， 白 色 点 渐 消 失2 4.0 7.0 黑 褐 第 1 2 腹 节 背 面 渐 显 2 个 深 褐 色 斑 点 3 7.0 12.0 灰 褐 第 2 腹 节 背 现 “ 八 ” 字 黑 纹 ， 第 8 腹 节 显 现 黑 色 倒 “ 八 ” 字 纹4 12.0 16.0 灰 褐 第 2 4 腹 节 显 现 1 2 个 灰 黑 色 菱 形 纹 ， 第 8 腹 节 黑 色 倒 “ 八 ” 字 纹明 显5 18.0 30.0 灰 褐 菱 形 纹 、 “ 八 ” 字 纹 及 倒 “ 八 ” 字 纹 黑 而 甚 明 显DDEEFF_
