1、ICS 65.120 B 25 DB41 河南省 地方标准 DB41/T 1906 2019 苜蓿青贮料质量分级 2019 - 09 - 30发布 2019 - 12 - 30实施 河南省 市场 监督 管理 局 发布 DB41/T 1906 2019 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 质量 分级 . 1 5 要求 . 2 6 检验 方法 . 2 附录 A（资料性附录）比色法测定苜蓿青贮料氨态氮含量 . 4 附录 B（资料性附录）高效液相色谱法测定苜蓿青贮料有机酸含量 . 6 DB41/T 1906 2019 II 前 言 本标
2、准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由 河南省农业 农村 厅 提出 并 归口。 本标准起草单位：河南农业大学、河南省饲草饲料站。 本标准主要起草人：朱晓艳、牛岩、史莹华、郑爱荣、王成章、王彦华、张晓霞、李德锋、王红艺、王 璟、黄晓燕。 DB41/T 1906 2019 1 苜蓿青贮料质量分级 1 范 围 本标准规定了苜蓿青贮料的 术语和定义、 质量 分级、 要求 和 检验 方法。 本标准适用于以苜蓿为原料调制的青贮 饲 料。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包
3、括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定 GB/T 10468 水果和蔬菜产品 pH值的测定方法 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维（ NDF）的测定 NY/T 1459 饲料中酸性洗涤纤维的测定 NY/T 2129 饲草产品抽样技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 苜蓿 青贮料 将刈割、晾晒至含水量 60% 70%的青绿苜蓿切短后置于密封的青贮容器中，经乳酸菌厌氧发酵
4、产生 乳酸后抑制有害微生物生长，使青绿苜蓿可以长期保存的多汁饲料产品。 4 质量 分级 苜蓿青贮料 质量 分级 应符合表 1的规定。 表 1 苜蓿青贮料 质量 分级 项目 等级 一级 二级 三级 四级 pH值 4.3 4.3， 4.6 4.6， 4.8 4.8， 5.2 氨态氮 /总氮， % 10.0 10.0， 15.0 15.0， 20.0 20.0， 30.0 乳酸， % 75.0 75.0， 60.0 60.0， 50.0 50.0， 40.0 DB41/T 1906 2019 2 表 1（续） 项目 等级 一级 二级 三级 四级 乙酸， % 20.0 20.0， 30.0 30.0，
5、 40.0 40.0， 50.0 丁酸， % 0.0 2.0 2.0， 10.0 10.0 粗蛋白质， % 20.0 20.0， 18.0 18.0， 16.0 16.0， 15.0 中性洗涤纤维， % 35.0 35.0， 40.0 40.0， 44.0 44.0， 45.0 酸性洗涤纤维， % 30.0 30.0， 33.0 33.0， 36.0 36.0， 37.0 注： 粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维以占干物质的量表示；乳酸、乙酸、丁酸数值以占有机酸的总量表 示 ， 有机酸为乳酸、乙酸、丁酸、丙酸的总 和构成。 5 要求 5.1 感官 5.1.1 颜色 绿色 、 黄绿色 、 暗绿
6、色或黄褐色 ，无 褐色或黑色 。 5.1.2 气味 酸 香 味或 稍有酒精 、 醋酸味 ， 无 霉味 、 腐臭味或氨味 。 5.1.3 质地 茎叶结构清晰 或 基本保持原状 ，松散， 柔软 湿润 ， 无 茎叶模糊 、 腐烂 、 黏滑 或干硬。 5.2 干物质 苜蓿青贮原料干物质含量为 30% 40%。 5.3 粗灰分 苜蓿青贮原料粗灰分含量低于 12%。 5.4 青贮料卫生 应符合 GB 13078的规定。 6 检验 方法 6.1 感官 在自然光下视物最清楚的距离内目测苜蓿青贮料的色泽、结构；青贮料常态下，贴近鼻尖嗅闻气味 ； 用手指捻，通过触觉评价质地 。 6.2 抽 样 按 NY/T 21
7、29的规定执行。 DB41/T 1906 2019 3 6.3 试样制备 6.3.1 常规 指标 按 GB/T 20195的规定执行。 6.3.2 浸提液 取 具代表性 苜蓿青贮料 样品 20 g， 置于组织捣碎机（或家用榨汁机）中， 加入 去离子 水 180 mL，搅 拌 1 min，用 四层 纱布和滤纸过滤 ， 得到试样浸提液 。 6.4 pH 值 将制备的 试样 浸提液 ， 按 GB/T 10468的规定执行。 6.5 氨 态氮 将制备的 试样 浸提液 ， 按附录 A的规定执行 。 6.6 乳酸、 乙酸、丁 酸 将制备的 试样浸提液 ， 按附录 B的规定执行 。 6.7 粗蛋白 质 按
8、GB/T 6432的规定执行。 6.8 中性洗涤纤维 按 GB/T 20806的规定执行。 6.9 酸性洗涤纤维 按 NY/T 1459的规定执行。 6.10 干物质 按 GB/T 6345的规定执行。 6.11 粗灰分 按 GB/T 6438的规定执行。 DB41/T 1906 2019 4 附 录 A （资料性附录） 比色法测定苜蓿青贮料氨态氮含量 A.1 试剂 A.1.1 苯酚 显色剂 将 0.15 g亚硝基铁氰化钠 （ Na2Fe(CN)5NO2H2O） 溶解在 1.5 L蒸馏水中，再加入 29.7 g结晶苯酚， 定容 至 3 L，于 棕色玻璃 瓶中 避光 贮存 。 A.1.2 次氯酸
9、钠试剂 将 15 g氢氧化钠（ NaOH） 溶解在 2 L蒸馏水中，再加入 113.6 g磷酸氢二钠（ Na2HPO67H2O） ，中火 加热并不断搅拌至完全溶解。冷却后加入 44.1 mL含 8.5%活性氯的次氯酸钠 （ NaClO） 溶液，混匀， 定容 至 3 L， 于 棕色玻璃瓶中 避光贮存 。 A.1.3 标准 铵储备 液 准确 称取 0.6607 g经 100 烘干 24 h的 硫酸铵 （ (NH4)2SO4） 溶于 适量 蒸馏水中， 并 定容至 100 mL， 配制成 100 mmol/L的 标准 铵 储备 液。将上述 储备 液稀释配制成 1.0 mol/L、 2.0 mol/L、
10、 3.0 mol/L、 4.0 mol/L、 5.0 mol/L五种不同浓度梯度的标准液。 A.2 仪器与设备 A.2.1 分光光度计： 630 nm， 1 cm玻璃比色皿 。 A.2.2 天平 ： 万分之一 。 A.2.3 恒温 水浴锅 。 A.2.4 移液器： 50 L。 A.2.5 移液管： 2 mL， 5 mL， 50 mL。 A.2.6 玻璃器皿：试管，所需器皿用稀盐酸浸泡，依次用自来水、蒸馏水洗净。 A.3 测定步骤 A.3.1 标准曲线建立 取不同浓度梯度的标准液各 50 L至做好标记的试管中， 空白为 50 L蒸馏水 ，依次 加入 2.5 mL苯 酚 显色剂、 2.0 mL次氯
11、酸钠试剂， 摇匀 ， 95 水浴中显色 5 min。 冷却后， 630 nm波长下比色。以吸光 度和标准液浓度为坐标轴建立标准曲线。 A.3.2 样品 测定 向每支试管中加入 50 L正文中所述制备青贮浸出液，按检测步骤测定样本液的吸光度 ，如吸光度 太高，可将样品稀释后再测定。 A.3.3 水分测定 按 GB/T 6435的规定执行。 DB41/T 1906 2019 5 A.3.4 总氮 含量测定 按 GB/T 6432的规定执行。 A.3.5 结果计算 氨态氮的含量按 公示 进行计算 ： 式中： X 氨态氮含量，单位为占总氮的质量百分比 （ %） ； 样液的浓度，单位为毫摩尔 每升 （
12、mmol/L） ； D 样液的总稀释倍数 ； M 样品的水分含量，单位为百分比 （ %） ； N 试样的总氮含量，单位为占鲜样的质量百分比 （ %） ； 以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果，保留 一 位小数。 DB41/T 1906 2019 6 附 录 B （资料性附录） 高效 液相色谱法测定 苜蓿 青贮料有机酸含量 B.1 试剂和材料 乳酸、 乙酸、丙酸、丁酸标准品，超纯水，色谱纯高氯酸。 B.2 仪器 高效液相色谱仪 、 SPD检测器 、 工作站 、 均质机 。 B.3 测定程序 B.3.1 色谱条件 Shodex Rspak KC-811色谱柱（ 8 mm300 mm，为离子交
13、换柱），流动相为 3 mol高氯酸溶液，流速 1 mL/min， SPD检测器波长 210 nm，柱温 50 ，进样量 20 L。 B.3.2 标准品分析 采用外标法，用乳酸、乙酸、丙酸、丁酸标准液制作标准工作曲线。根据试样浸提液中被测物含量 情况，选定浓度相近的标准工作曲线，对标准工作溶液与试样浸提液等体积参插进样测定，标准工作溶 液和试样浸提液乳酸、乙酸、丙酸、丁酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内。按照色谱条件分析标 准品，乳酸、乙酸、丙酸、丁酸的保留时间分别约为 8.1 min、 9.6 min、 11.2 min、 13.8 min，标准品 的液相色谱图见图 B.1。 图 B.1 乳酸、乙酸、丙酸、丁酸混合标准品的液相色谱图 注： LA为乳酸， AA为乙酸， PA为丙酸， BA为丁酸， mAU 为毫吸光度 B.3.3 空白实验 除不加试样浸提液外，按 B.3.1和 B.3.2条件和程序进行。 B.3.4 结果计算 DB41/T 1906 2019 7 用色谱工作站计算试样浸提液被测物的含量，计算中扣除空白值 ， 再通过换算浸提液制备过程中对 应的样品量，获得乳酸、乙酸、丙酸、丁酸在样品中的比例。 每样取 两个平行样测定，取平均值作为分 析结果，方法允许相对偏差 6%。 _
