1、ICS 65.120 B 46 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 16782010 饲料中三聚氰胺的快速测定 检测卡法 Rapid determination of melamine in feeds Test strip 2010 - 10 - 19 发布 2010 - 11 - 01 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/ T 16782010 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 试剂和材料 . 1 5 仪器 . 1 6 试样的制备 . 2 7 检测卡的验证 . 2 7.1 阴性样品验证 . 2 7.2 阳性样品验证
2、 . 2 7.3 检测卡的综合评价 . 2 8 分析步骤 . 2 8.1 提取 . 2 8.2 样品检测 . 2 9 结果判定 . 3 10 结果确认与表述 . 3 10.1 呈现阳性反应的样品 . 3 10.2 呈现阴性反应的样品 . 3 附录A（规范性附录） 三聚氰胺检测卡判定示意图 . 4 DB37/ T 16782010 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出。 本标准由畜牧业专业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。 本标准起草人：李会荣、宫玲玲、孟凡胜、强莉、李斌。 DB37/ T 16782010
3、1 饲料中三聚氰胺的快速测定 检测卡法 1 范围 本标准规定了用检测卡快速测定饲料中三聚氰胺的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和单一饲料。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样 GB/T 20195 试样制备 NY/T 1372 饲料中三聚氰胺的测定 3 原理 将三聚氰胺和三聚氰胺抗体分别包被在检测卡纤维素膜的不同带区；滴加在膜条一端的试液在毛
4、细 管作用下渗移，与检测卡上的三聚氰胺和三聚氰胺抗体发生竞争抑制免疫反应，胶体金显色定性。 4 试剂和材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂。 水，GB/T 6682，三级。 4.1 甲醇溶液：200mL 甲醇加入 800mL 水，混匀。 4.2 提取液：0.1moL/L 盐酸溶 液，量取盐酸 0.83mL，加水至 100mL。 4.3 氢氧化钠溶液：1moL/L，称取氢氧化钠 4.00g，加水至 100mL。 4.4 三聚氰胺标准储备液: 准确称取 50mg 三聚氰胺标准品(含量98%)，用甲醇溶液（4.1）溶解并定 容至 50mL，该溶液浓度为 1.0mg/mL。4冰箱中贮存，有效期 3 个
5、月。 4.5 三聚氰胺标准工作液: 准确移取 1.00mL 三聚氰胺标准储备液（4.4），用甲醇溶液（4.1）定容至 100mL，该溶液浓度为 10g/mL。4冰箱中贮存，有效期 1 个月。 4.6 一次性滴管。 4.7 三聚氰胺检测卡。不同品牌检测卡的组成略有差别。 4.8 三聚氰胺阴性样品：自己制备或经仪器确证的不含有三聚氰胺的样品。 5 仪器 5.1 天平：感量 0.1mg。 DB37/ T 16782010 2 5.2 离心机：转速 3 000r/min 以上。 5.3 离心管：10mL、1.5mL。 5.4 移液枪：50L、100L、1 000L。 5.5 漩涡混合器。 6 试样的制
6、备 按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，缩分至约200g，按照GB/T 20195制备样品，过0.45mm孔 径的分析筛，混匀备用。 7 检测卡的验证 7.1 阴性样品验证 每一批次按5%的比例抽取检测卡，最少抽取一个，使用阴性 样品（4.8）依检测卡说明书测定步骤 做阴性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阴性验证试 验验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。 7.2 阳性样品验证 称取阴性饲料样品（4.8）1g（精确至0.01g）于10mL离心管（5.3）中，按说明书标识的检测限（ 2.5mg/kg）,用移液枪（5.4 ）移取三聚氰胺标准
7、工作液（4.5）加入离心管内，充分混合，配制成含三 聚氰胺的样品。每一批次按10%的比例抽取检测卡，最少抽取两个，使用该样品依检测卡说明书测定步 骤做阳性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阳性验证 试验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。 7.3 检测卡的综合评价 在确认阴性验证试验和阳性验证试验同时符合时，该批次的检测卡方可使用。 8 分析步骤 8.1 提取 称取饲料试样1g（精确至0.01g）于10mL离心管（5.3）中，加提取液（4.5）5.00mL，在漩涡混合 器上混合2min或剧烈振荡5min后。过滤或离心5min。取适量滤液或上清液于1.5
8、mL离心管(5.3)中，用氢 氧化钠溶液（4.3）调pH至78后，取100L于1.5mL离心管(5.3)中，加100L蒸馏水混匀备用。 8.2 样品检测 检测卡（4.7）放置于水平台面上恢复至检测卡要求的温度后，取出检测卡进行检测。检测卡即开 即用。 用一次性滴管吸取试液（8.1），垂直滴加34滴于检测卡（4.7）样孔内。在加液过程中勿使试料 溶液溢出加样孔。加样后开始计时，在5min10min内判读结果。 注：不同品牌的检测卡其测定步骤略有差别，使用不同品牌检测卡时，试料的提取方法和测试步骤根据检测卡的说 明书进行。 DB37/ T 16782010 3 9 结果判定 9.1 检测卡无效 检
9、测卡的质控区C线未显示红色条带（见附录A中图A.1）。此情况下，应用新的检测卡重新测定。 9.2 阳性反应 检测卡的质控区C线显示一条红色条带，测试区T线未出现红色条带（见附录A中图A.2）。 9.3 阴性反应 检测卡的质控区C线出现一条红色条带,测试区T线显示一条比质控区C线深或浅的红色条带 （见附录 A中图A.3）。 10 结果确认与表述 10.1 呈现阳性反应的样品 样品中三聚氰胺的含量高于检测限。应用NY/T 1372进行确认。 10.2 呈现阴性反应的样品 样品中三聚氰胺含量低于检测限（Xmg/L）。 注：每一品牌的检测卡其检出限不同，以供应商提供的说明书明示的检出限为准。 DB37/ T 16782010 4 A A 附 录 A （规范性附录） 三聚氰胺检测卡判定示意图 A.1 无效检测卡示意图 质控区（C）未显示红色条带（见图A.1）。 C T C T 图A.1 无效检测卡示意图 A.2 阳性反应示意图 质控区（C）显示红色条带，测试区（T）未显示红色条带（见图A.2）。 图A.2 阳性反应示意图 A.3 阴性反应示意图 质控区（C）显示红色条带，测试区（T）显示深或浅的红色条带（见图A.3）。 图A.3 阴性反应示意图 _ C T C T C T
