1、ICS 71.040.40 G20 DB37 山东省 地 方 标 准 DB 37/T 3313 2018 肥料中壳聚糖含量测定 分光光度法 Determination of Chitosan in Fertilizer by Spectrophotometry 2018 - 06 - 12发布 2018 - 07 - 12实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 3313 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山东省质量技术监督局提出。 本标准由山东化工标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、济南阿波罗甲壳素肥业有
2、限公司、青岛海力源生物 科技有限公司、山东洁晶集团股份有限公司、济南高新区阿波罗甲壳素工程技术研究中心、青岛海大生 物集团有限公司。 本标准主要起草人：刘金凤、焦毅、于晓菲、齐云、王景超、刘鹏飞、赵丽芳、商姗姗、张娟、刘 有利、张守福、林成彬、王海华。 DB37/T 3313 2018 1 肥料中壳聚糖含量测定 分光光度法 1 范围 本标准规定了含壳聚糖肥料中壳聚糖含量的测定方法。 本标准适用于由虾蟹壳为原料加工处理而成的水溶性壳聚糖的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括
3、所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 HG/T 2843 化肥产品 化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液 3 方法原理 肥料中壳聚糖经水解后生成氨基葡萄糖，与乙酰丙酮和对二甲 氨 基苯甲醛生成红色化合物，在 525 nm波长处用分光光度计测定。 4 试剂或材料 本标准中所用试剂、水和溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，应符合 HG/T 2843的规定。 4.1 盐酸：分析纯 。 4.2 无醛乙醇 （或四无乙醇） ：分析纯 。 4.3 氢氧化钠：分析纯。 4.4 无水碳酸钠：分析纯。 4.5 氢氧化钠溶液： 400 g/L。称取分析
4、纯氢氧化钠 40 g，加水至 100 mL。 4.6 碳酸钠溶液： c（ 1/2Na2CO3） =1.0 mol/L。称取无水碳酸钠 2.65 g，加水至 50 mL。 4.7 乙酰丙酮溶液：取乙酸丙酮 3.5 mL，加入碳酸钠溶液 （ 4.6） 至 50 mL，置冰箱中备用，应于使用 前一日配 制。 4.8 对二甲 氨 基苯甲醛溶液：称取对二甲 氨 基苯甲醛 0.8 g，加无醛乙醇 （ 4.2） 15 mL及盐酸 （ 4.1） 15 mL，摇匀。 4.9 盐酸氨基葡萄糖 标准品： 99.9 %。 4.10 盐酸氨基葡萄糖标准 储备 溶液： （盐酸氨基葡萄糖） =1.000 mg/mL。称取
5、105 干燥至恒重 的盐酸氨基葡萄糖 0.1 g（准确至 0.0002 g），置 100 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀 。 4.11 盐酸氨基葡萄糖标准溶液： （盐酸氨基葡萄糖） =0.1000 mg/mL。 准确 移取盐酸氨基葡萄糖标 准 储备 溶液 （ 4.7） 10.00 mL，至 100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀 。 5 仪器 DB37/T 3313 2018 2 5.1 分光光度计 ，带有光程为 1 cm的吸收池，可在 525 nm处测量。 5.2 恒温水浴锅。 5.3 恒温干燥箱。 5.4 分析天平：感量 0.0001 g。 6 分析步骤 6.1 试 样 的制备
6、固体样品缩分至约 100 g，将其迅速研磨至全部通过 0.50 mm 孔径试验筛（如样品潮湿，可通过 1.00 mm 试验筛），混合均匀，置于洁净 、干燥容器中；液体样品经多次摇动后，迅速取出约 100 mL，置 于洁净、干燥容器中。 6.2 试 样 溶液的制备 称取含壳聚糖约 200 mg的试样 （固体或液体） 适量（称准至 0.0002 g），置于 50 mL 烧杯中加水溶 解，定量转移到 100 mL 容量瓶中， 加 水稀释至刻度，混匀，如有必要干过滤，弃去初滤液。准确 移 取 1.00 mL于 25 mL具 塞 刻度 试管中，加 5 mL浓盐酸溶液，摇匀， 盖上试管塞， 于 100 水
7、浴（或能达到同 等水解温度的恒温干燥箱） 水解 2 h，冷却， 用氢氧化钠溶液中和至 7（用 pH试纸检测） ， 加 水稀释至刻 度，摇 匀， 作为试样溶液 。 6.3 标准曲线的绘制 移取盐酸氨基葡萄糖标准溶液 （ 4.11） 0.00 mL、 1.00 mL、 2.00 mL、 3.00 mL、 4.00 mL、 5.00 mL 分别置于 25 mL具塞刻度试管中， 然后再分别加入 5.00 mL、 4.00 mL、 3.00 mL、 2.00 mL、 1.00 mL、 0.00 mL蒸馏水 至 5.00 mL，各加入乙酰丙酮溶液 （ 4.7） 2.00 mL，摇匀，于 100 水浴中（
8、1 min后加盖）静 置 25 min，取出，用冰水迅速冷却后，加入无醛乙醇 3.00 mL， 于 60水浴中静置 10 min后，再加入对 二甲氨基苯甲醛（ 4.8） 2.00 mL，用力振摇后，由 60水浴中静置 1 h，取出立即用冷水冷却至室 温， 加蒸馏水 定容至 25mL， 摇匀， 配成一系列含 盐酸氨基葡萄糖 分别为 0 mg、 0.1 mg、 0.2 mg、 0.3 mg、 0.4 mg、 0.5 mg的标准工作溶液。 在波长 525 nm处，用 1 cm比色皿，以试剂空白为参比液，测其吸光值 ， 拟 定标准曲线方程 。 比色过程在 30 min内完成 。 6.4 试样的测定 6
9、.4.1 准确 移取试 样 溶液 2.00 mL（约含盐酸氨基葡 萄糖 300 g）置于具塞试管中，按 6.3中 “ 用 蒸 馏 水稀释至 5.00 mL” 及其后面的步骤进行。对于颜色较深的样品，以 1 mL盐酸（ 4.1）代替 对二 甲 氨 基苯甲醛溶液 作为空白 ，其他操作同样品。 6.4.2 将测得的吸光值带入标准曲线方程，求得氨基葡萄糖的质量。 6.5 空白试验 除不加试样外，其他步骤同试样溶液。 7 分析结果的表达 DB37/T 3313 2018 3 以质量分数表示的壳聚糖（以氨基葡萄糖计）的质量分数 ： 1008309.021000 25100)(w 01 m mm .(1) 式中： m1 求得的试样盐酸氨基葡萄糖的质 量，单位 为毫克（ mg）； m0 空白 盐酸氨基葡萄糖的质量，单位 为毫克（ mg）； m 试样的质量，单位 为克（ g）； 0.8309 盐酸氨基葡萄糖 换算 为氨基葡萄糖的系数。 8 允许差 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差应符 合表 1要求。 表 1 平行测定结果和不同实验室测定结果的允许差 海藻酸含量， % 平行结果测定的绝对差值， % 不同实验室测定结果的绝对差值， % 2.0 0.2 0.4 2.0 5.0 0.5 1.0 5.0 10.0 1.0 2.0 10.0 2.0 4.0 _
