1、ICS 67.120.20 B45 DB37 山东省地方标准 DB 37/T 31182018 禽蛋中氯霉素类药物残留量的测定 液相色谱法 Determination of multi-residues of chloramphenicols in eggs -Liquid chromatographic method 2018 - 02 - 02发布 2018 - 03 - 02实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 31182018 前 言 本标准遵照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要
2、起草单位：济南市畜产品质量安全监测中心。 本标准主要起草人：莫贞峰、时冉冉、姜波、周萌、田硕、王娟、高丛春、祁佳、 张灵君、朱剑英、 刘海江、吕盛凯。 I DB37/T 31182018 禽蛋中氯霉素类药物残留量的测定液相色谱法 1 范围 本标准规定了禽蛋 中 氯霉素类药物残留量检测的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考药物残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析
3、实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中的氯霉素类药物残留用乙酸乙酯提取，浓缩后用乙腈复溶，正己烷去脂，高效液相色谱 -紫 外法测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 水，GB/T 6682 ，一级。 4.2 乙酸乙酯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 正己烷。 4.5 流动相：乙腈溶液，乙腈（4.3 ）+水（ 4.1）= 20+80。 4.6 0.2 mol/L（pH=10.6 ）碳酸钠- 碳酸氢钠缓冲溶液：称取 9.32 g 无水碳酸钠和 1.01 g 碳酸氢钠， 加水(4.1) 溶解，转移至 500 mL 容量瓶中，定容混匀。 4.7 氯霉素、甲砜
4、霉素、氟苯尼考对照品：含量 99.0 。 4.8 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准贮备液：精密称取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考对照品 10 mg， 于 10 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 1 mg/mL 的标准贮备液。 -18 保存，有 效期为 3 个月。 4.9 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准中间溶液：精密量取 1 mg/mL 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标 准贮备液 1.0 mL，于 100 mL 容量瓶中，用流动相稀释，配制成浓度为 10 g/mL 的氯霉素、甲砜霉素、 氟苯尼考标准中间溶液。 2 8 保存，有效期为 1 个月。 4.10 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考混合
5、标准工作液：分别准确移取 10 g/mL 氯霉素、 甲砜霉素、氟 苯尼考标准贮备液适量，用流动相（ 4.5）稀释，配制成浓度为 20.0 g/L 、50.0 g/L 、100 g/L、 200 g/L 、 500 g/L 的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考混合标准工作液。现用现配。 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 1 DB37/T 31182018 5.2 分析天平： 质量 0.00001 g。 5.3 天平： 质量 0.01 g。 5.4 均质器。 5.5 涡旋震荡混合器。 5.6 离心机：5000 r/min 以上。 5.7 旋转蒸发仪。 5.8 氮气吹干
6、仪。 5.9 有机微孔滤膜： 0.45 m。 6 样品 6.1 样品的制备 a) 取均质后的供试样品，作为供试试料。 b) 取均质后的空白样品，作为空白试料。 c) 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。 6.2 试料的保存 -18 以下保存。 7 试验步骤 7.1 提取 平行做两份试验，称取（ 2.000.05） g禽蛋均质液，放于50 mL具塞离心管中。准确加入 20 mL 乙酸乙酯（4.2 ）， 1.00 mL 碳酸钠 -碳酸氢钠缓冲溶液（4.6 ），涡旋 5 min 充分混匀， 5000 r/min以 上离心 5 min。准确移取 10 mL上清液至鸡心瓶中，用
7、旋转蒸发仪 50 蒸发至干。残渣用 1 mL乙腈（ 4.3） 复溶，同时加入5 mL 正己烷（4.4 ）去脂，涡旋混匀。分取乙腈层，正己烷层复加入1 ml 乙腈萃取，分 取乙腈层，合并两次乙腈层于同一离心管中，于 50 氮吹至干。用 1.00 mL流动相（4.5 ）复溶残渣， 过 0.45 m 有机微孔滤膜，上机测定。 7.2 高效液相色谱测定 7.2.1 色谱条件 a) 色谱柱：C 18（250 mm4.6 mm，粒径 5 m），或相当者。 b) 检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器 。 c) 流动相：乙腈+ 水=20+80 。 d) 流速： 1.0 mL/min 。 e) 检测波长：氯霉素
8、 270 nm，甲砜霉素、氟苯尼考 225 nm 。 f) 柱温： 25 。 g) 进样量：50 L 。 7.2.2 定量测定 取试样溶液和相应的混合标准工作液分别上机测定，以标准工作液作多点校准进行定量，以峰面积 为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。标准溶液及试样溶液中氯霉素、甲砜霉素和 氟苯尼考响应值应在仪器检测的线性范围之内，超出线性范围的则用流动相（4.5）溶液适当稀释后再 进样分析。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考标准溶液色谱图参见附录 A。 7.2.3 空白试验 2 DB37/T 31182018 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 试验数据处理 试样中
9、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考的含量X i，以质量分数表示，单位 为微克每千克( g/kg)， 按 式(1) 计算 ： 1000 1000VVC 2i = m V X 1 i . (1) 式中： Xi -试样中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考含量， g/kg； Ci -试样中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考峰面积对应的浓度，单位为微克每升（ g/L）； V -加入提取溶液的体积，单位为毫升（ mL）； V1-移取上清液的体积，单位为毫升（mL）； V2-上机前加入复溶溶液 的体积，单位为毫升（mL ）； m-试料的质量，单位为克（g）。 测定结 果用 平行 测定 的算 术平均 值表 示， 保留 三位 有效数
10、字。 9 检测方法的灵敏度、准确度、重复性 9.1 灵敏度 本标准氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考残留检出限为 10 g/kg ，氯霉素、甲砜霉素的定量限为20 g/kg ，氟苯尼考的定量限为30 g/kg 。 9.2 准确度 本方法氯霉素、甲砜霉素在 （20 500 ） g/kg 添加浓度的回收率为 80 %120 %， 氟苯尼考在 （3 0 500） g/kg添加浓度的回收率为80 % 120 %。 9.3 重复性 在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对标准偏差不大于10 %。 3 DB37/T 31182018 A A 附 录 A （资料性附录） 氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考液
11、相色谱图 -0.002 0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014 0 1. 1 5 2 .3 3. 4 5 4 .6 5. 7 5 6 .9 8. 0 5 9 .2 10 . 35 11 . 5 12 . 65 13 . 8 14 . 95 16 . 1 17 . 25 18 . 4 19 . 55 20 . 7 21 . 85 23 24 . 15 图A.1 氯霉素标准溶液色谱图（ 500 g/L ） -0.005 0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035 0.04 0.045 0.05 0 1. 1 5 2 .3 3. 4 5 4 .6 5. 7 5 6 .9 8. 0 5 9 .2 10 . 35 11 . 5 12 . 65 13 . 8 14 . 95 16 . 1 17 . 25 18 . 4 19 . 55 20 . 7 21 . 85 23 24 . 15 图A.2 甲砜霉素、氟苯尼考标准溶液色谱图（500 g/L） _ 氯霉素 甲砜霉素 氟苯尼考 4
