1、ICS 71.100.70 Y 42 DB37 山东省地方标准 DB37/T 30322017 化妆品中苯菌灵和多菌灵的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of benomyl and carbendazim in cosmetics by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2017-10-25发布 2017-11-25实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37/T 30322017 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由山东省质量技术监督局提出。 本标准由山东省化工标准化技术委员会归
2、口。 本标准起草单位：山东省产品质量检验研究院、山东省食品药品检验研究院。 本标准主要起草人： 薛霞、周莉莉、杨昊、卢兰香、王艳丽、刘桂亮、张艳侠。 I DB37/T 30322017 化妆品中苯菌灵和多菌灵的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中苯菌灵和多菌灵的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于膏霜类、乳液和液体化妆品中苯菌灵和多菌灵的测定。 本标准的检出限为1 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T
3、6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中加入甲醇-盐酸水溶液，恒温水浴振荡使苯菌灵完全转化为多菌灵，超声波提取，经液-液分 配除去脂溶性杂质，以阳离子交换固相萃取柱富集、净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外 标法定量。 4 试剂与材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 正己烷。 4.3 甲酸。 4.4 氨水。 4.5 盐酸。 4.6 乙腈：色谱纯。 4.7 二氯甲烷：色谱纯。 4.8 0.01 mol/L盐酸溶液：移取0.9 mL盐酸，用水稀释至1 L。 4.9 0.1 %甲酸甲醇溶液：取1 mL甲酸
4、，用甲醇稀释至1 L。 4.10 0.1 %甲酸水溶液：取1 mL甲酸，用水稀释至1 L。 4.11 初始比例流动相：量取30 mL 0.1 %甲酸甲醇溶液（4.9）和70 mL 0.1 %甲酸水溶液（4.10）混 合均匀。 4.12 提取液：甲醇和0.01 mol/L盐酸溶液（4.8）等体积混合。 4.13 0.2 %甲酸水溶液：量取2 mL甲酸，用水稀释至1 L。 4.14 5 %氨水甲醇溶液：量取5 mL氨水和95 mL甲醇，混匀，用前配制。 1 DB37/T 30322017 4.15 阳离子交换固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基 苯高聚物，60
5、 mg，3 mL，或相当者。使用前依次用5 mL甲醇、5 mL水进行活化。 4.16 标准物质：多菌灵（CAS 10605-21-7）纯度不低于99.0 %；苯菌灵（CAS 107804-35-2）纯度不 低于98.0 %。 4.17 多菌灵标准储备溶液：称取适量多菌灵标准品，用甲醇-0.1 mol/L盐酸溶液（1:9，v:v）溶解 并配制成100 g/mL的标准储备液。-18 避光保存，有效期6个月。 4.18 苯菌灵工作溶液：称取适量苯菌灵标准品，用甲醇溶解并配制成100 g/mL的溶液。再用初始比 例的流动相（4.11）逐级稀释10 g/mL和100 ng/mL的溶液。临用现配。 4.1
6、9 微孔滤膜：有机相，孔径0.22m。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-串联四级杆质谱仪：配有电喷雾离子源器。 5.2 固相萃取装置。 5.3 电子分析天平：感量分别为0.1 mg和0.01 g。 5.4 超声波清洗器。 5.5 涡旋混合器。 5.6 离心机，最高转速不低于6000 r/min。 5.7 氮气吹干仪。 5.8 恒温水浴振荡器。 6 测定步骤 6.1 试样处理 6.1.1 膏霜类化妆品提取 称取已粉碎并混匀的试样2 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞塑料离心管中，加入25 mL提取液（4.12）， 涡旋混合2 min，60 下振荡1 h，再超声波提取15 min。取出冷却
7、至室温，6000 r/min离心10 min， 准确移取15 mL上清液于50 mL离心管中，用15 mL正己烷萃取，静置分层，弃去正己烷相，用10 mL正己 烷再萃取一次，重复上述操作，甲醇-水相备用。 6.1.2 液体、乳液化妆品提取 称取已混匀的试样2 g（精确至0.01 g）于25 mL容量瓶中，用提取液（4.12）定容至刻度，摇匀， 涡旋混合2 min，全部转移至50 mL具塞塑料离心管，以下步骤同6.1.1 “60下振荡1 h，甲醇-水 相备用”。 6.1.3 净化 准确移取10 mL正己烷萃取过的甲醇-水相（6.1）转移至固相萃取柱（4.15）中，弃去流出物。依 次用5 mL 0
8、.2 %甲酸水溶液（4.13）和5 mL甲醇淋洗，抽至近干后，用5 mL 5% 氨水甲醇溶液（4.14） 洗脱。洗脱液于40 氮气吹浓缩至近干，用1 mL初始比例的流动相（4.11）定容，涡旋混合1 min，经 微孔滤膜（4.20）过滤后，供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.2 基质空白溶液的制备 2 DB37/T 30322017 称取2 g（精确至0.01g）阴性试样，以下按6.1操作，制备基质空白溶液。 6.3 多菌灵基质标准溶液的制备 准确移取适量多菌灵标准储备液，用基质空白溶液（6.3）稀释成多菌灵浓度分别为1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、1
9、00 ng/mL的基质标准溶液。 6.4 仪器参考条件 6.4.1 液相色谱参考条件 参考条件如下： a) 色谱柱：C18柱，50 mm2.1 mm(i,d)， 1.8 m，或其他性能相当者； b) 流动相：0. 1 %甲酸甲醇溶液（A）、0.1 %甲酸水溶液（B），梯度条件：0min3min：保持 30 % A，4min：线性增至100 % A，保持至6min，6.1min：30 % A； c) 流速：0.2 mL /min； d) 柱温：25 ； e) 进样体积：10 L。 6.4.2 质谱条件参考条件 参见附录A。 6.4.3 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。应确认不含有干
10、扰被测组分的物质。 6.5 测定 将基质标准溶液和试样溶液在相同的条件下进样测定，若试样溶液和基质标准溶液质量色谱图中与 多菌灵的保留时间一致，定性定量离子信噪比均大于3，且定性离子对的相对丰度偏差符合表1的规定， 则可判定试样中检出多菌灵（或苯菌灵）。以基质标准溶液中多菌灵定量离子对的峰面积对相应的浓度 绘制标准工作曲线，外标法定量。典型质量色谱图见附录B。 表1 定性相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 % 20 %50 % 10 %20 % 10 % 允许的相对偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 6.6 结果计算 6.6.1 试样中苯菌灵和多菌灵的含量（以多菌灵计）按
11、式（1）计算： 1000 c 2 1 = Vm VV X . (1) 式中： X 试样中苯菌灵和多菌灵的含量（以多菌灵计），单位为毫克每千克（g/kg）； c 由标准曲线得到的试样溶液中多菌灵的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)； V 试样溶液最终定容的体积，单位为毫升（mL）； m 试样质量，单位为克（g）； 3 DB37/T 30322017 V1 加入提取液总体积，单位为毫升（mL）； V2 过固相萃取柱的提取液体积，单位为毫升（mL）。 6.6.2 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。 7 精密度 在重复性条件获得的两次独立测定结果的绝对差值不
12、得超过算术平均值的10 %。 4 DB37/T 30322017 A A 附 录 A （资料性附录） 质谱参考条件 质谱参考条件： a) 电离方式：电喷雾电离，正离子； b) 毛细管电压：3500 V； c) 干燥气温度：325 ； d) 鞘气温度：350 ； e) 干燥气流量：10 L/min； f) 鞘气流量：10 L/ min； g) 雾化气压力：35 psi； h) 喷嘴电压：500 V； i) 扫描方式：多反应监测（MRM）； j) 其他质谱参数见表A.1。 表A.1 苯菌灵和多菌灵的主要质谱参数 化合物 母离子（m/z） 子离子（m/z） 裂解电压/v 驻留时间/ms 碰撞电压/
13、eV 苯菌灵 292.0 192.1 a 100 80 5 160.0 100 80 25 多菌灵 192.1 160 .0a 80 80 15 132.0 80 80 35 a 定量离子。 5 DB37/T 30322017 B B 附 录 B （资料性附录） 多菌灵和苯菌灵多反应监测色谱图 图B.1 苯菌灵和多菌灵标样的多反应监测色谱图 _ 4 x10 0. 0. 0. 1 +ESI MRM Frag=100.0V CID* (192.1 - 132.0) 0419_djl-1.d 1.44 1 1 4 x10 2 4 6 +ESI MRM Frag=100.0V CID* (192.1 - 160.0) 0419_djl-1.d 1.44 1 1 4 x10 1 2 3 +ESI MRM Frag=80.0V CID* (291.0 - 160.0) 0419_bjl-2.d 5.36 1 1 4 x10 1 2 3 +ESI MRM Frag=80.0V CID* (291.0 - 192.1) 0419_bjl-2.d 5.36 1 1 Counts vs. Acquisition Time (min) 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 6
