1、 ICS65.120 DB37 B20 备案号 山东省地方标准 DB37 /T5752005 饲料中氯羟吡啶的测定 高效液相色谱法 Determination of clopidol in Feeds High-Performance Liquid Chromatography 2005- 发布 2006-03-01 实施 山东省质量技术监督局 发布 DB37 /T5752005 II 前 言 本标准由山东省畜牧办公室、山东省畜牧业标准化技术委员会提出。 本标准负责起草单位：山东省饲料监察所。 本标准主要起草人：李俊玲、强莉、宫玲玲、刘华阳、王琳、李会荣。 DB37 /T5752005 1 饲
2、料中氯羟吡啶的测定 -高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中氯羟吡啶的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中氯羟吡啶的测定，最低定量限为10mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样中的氯羟吡啶用甲醇提取。提取液经净化，在HPLC反相
3、柱上分离，紫外检测器270nm处测定。 4 试剂和溶液 除非另有说明，本标准所用试剂为分析纯，色谱用超纯水符合GB/T6682一级水的规定。 4.1 甲醇。 4.2 甲醇：色谱纯，过 0.45m 有机系滤膜。 4.3 乙腈：色谱纯，过 0.45m 有机系滤膜。 4.4 磷酸氢二钠：优级纯。 4.5 磷酸二氢钾：优级纯。 4.6 HPLC 流动相 4.6.1 磷酸盐缓冲溶液 称取 2.09克磷酸氢二钠（4.4）和1.40克磷酸二氢钾（4.5）溶于超纯水中，调节pH=7，并定容至 500mL。过0.45m水系滤膜。 4.6.2 HPLC 流动相：磷酸盐缓冲溶液（4.6.1）乙腈（4.3）=8515
4、。混合，脱气后备用。 4.7 氯羟吡啶标准溶液 4.7.1 氯羟吡啶标准贮备液 称取氯羟吡啶纯品（含量不少于99.8%）10mg(准确至 0.1mg)，用甲醇(4.2)溶解并定容至100mL。 其浓度为100g/mL，贮存于0-8冰箱中。溶液有效期1个月。 4.7.2 氯羟吡啶标准工作液 精密量取标准贮备液(4.7.1)1.00mL，用甲醇(4.2)定容至10mL。该溶液浓度为10g/mL。现用现 配。 4.7.3 标准系列 DB37 /T5752005 2 精确吸取标准工作液(4.7.2) 1.00 mL、 5.00mL,以及标准储备液(4.7.1)1.00 mL、 2.00 mL、 5.0
5、0mL, 分别用甲醇（4.2）稀释至10mL。该标准系列中氯羟吡啶的相应浓度分别为: 1.00g/mL、5.00g/mL、 10.00g/mL、20.00g/mL、50.00g/mL。现用现配。 5 仪器设备 5.1 分析天平：感量0.1mg。 5.2 超声波清洗器。 5.3 振荡器。 5.4 高效液相色谱仪：具有C 18柱和紫外检测器。 5.5 针头过滤器：孔径为0.45m有机系滤膜。 6 试样的制备 实验室样品用四分法缩减，分取200g左右，粉碎全部过0.45mm孔径筛，充分混匀，装入磨口瓶中备 用。 7 分析步骤 7.1 提取 称取适量试样(配合饲料5g，浓缩饲料、添加剂预混合饲料1 g
6、2g)精确至0.1mg，置于100ml具塞 三角瓶中，准确加入甲醇（4.1）50mL，振摇使试料全部润湿，放在振荡器上振荡提取20min，静置数分 钟，取适量上清液，并用甲醇稀释至10 mL使获得的溶液中每毫升含氯羟吡啶1g50g，过0.45m 有机系滤膜（5.6）,滤液待测。 7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱:C 18柱 柱长250mm，内径4.6mm， 粒度5m。 柱温:室温。 流动相:磷酸盐缓冲液乙腈=8515。 流速: 1.0mL/min。 检测器: 紫外检测器。 检测波长: 270nm。 进样量: 20L。 7.2.2 定量测定 按高效液相色谱仪器说明书调整仪器
7、操作参数。向色谱柱中分别注入标准溶液（4.7.3）和试样 溶液（7.1），积分得到峰面积，用标准曲线定量。 8 结果计算 8.1 计算公式 氯羟吡啶的含量（X），以毫克每千克表示，按公式(1)计算： D m m X = 1 (1) 式中: m1试样色谱峰面积对应的氯羟吡啶的质量为微克，g ； m 试料质量为克，g； D稀释倍数。 DB37 /T5752005 3 8.2 以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。计算结果保留三位有效数字。 9 精密度 9.1 重复性 同一实验室两次独立测定结果的相对偏差不大于10%。 9.2 再现性 不同的实验室间两次独立测定结果的相对偏差不大于20%。 _
