1、ICS 07.080 B 30/39 DB37 山东省 地方标准 DB37/T 4030 2020 苹果品种鉴定方法 微卫星方法 Molecule identification method for apple strain 2020 - 07 - 09 发布 2020 - 08 - 09 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 4030 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。 本标准起草单位：青岛海关技术中心、临沂大学、中国农业科学院果树研究所、中国科学院海洋研 究所。 本标准主要起草人：高宏伟、刘云国、陈
2、新疆、王强、王鸿霞、陈盛盛、孙雯娴、孙敏、魏晓棠。 本标准系首次发布。 DB37/T 4030 2020 1 苹果品种鉴定方法 微卫星方法 1 范围 本标准规定了苹果品种的分子 鉴定方法。 本标准适用于由苹果的种苗、砧木、枝叶、果实等组织鉴定苹果品种。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 19557.1 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南 总则 NY/T 2424 2013 植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南 苹果 3 术语和缩
3、略语 3.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 品种 cultivar 在一定的生态和经济条件下 ，经自然或人工选择形成的动、植物群体。在植物学里，品种是在植物 界的 22个分类等级之下，具有相对的遗传稳定性和生物学及经济学上的一致性，并可以用普通的繁殖方 法保持其恒久性。 3.1.2 PCR多聚酶链式反应 polymerase chain reaction 以拟扩增的 DNA分子为模板，以末端互补的寡核苷酸片段为引物（ primer），在耐热 DNA聚合酶的作 用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的 DNA分子合成。重复这一过程，即可使目的 DNA片段得以大
4、量扩增。是常规分子生物学技术之一，用于扩增特定的 DNA片 段。 3.1.3 基因座位（或位点） genetic locus 基因在染色体上占有的特定位置叫基因位点。 3.1.4 微卫星序列 microsatellite 又称为短串联重复序列 (short tandem repeats,STRs)或简单重复序列（ simple sequence repeats）， 是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由 2 6个核苷酸的串联重复片段构成，由于重复单位 DB37/T 4030 2020 2 的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。微卫星位点通常通 过 P
5、CR扩增，扩增产物通过电泳分析并根据大小分离 等位基因进行检测。 3.1.5 等位基因 allele 指位于一对同源染色体相同位置上控制同一性状不同形态的基因。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp：碱基对（ base pair） CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（ Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide） DNA：脱氧核糖核酸（ deoxyribonuleic acid） EDTA：乙二胺四乙酸（ Ethylene Dia mine Tetraacetic Acid） Tris：三羟甲基氨基甲烷（ 2-Amino-2-(hydroxymethyl)-
6、1,3-propanediol） 4 原理 不同苹果品种间 SSR基因座位的等位基因存在序列长度多态性，即苹果品种间微卫星序列（ SSR）依 苹果品种不同，等位变异的数量可能不同。针对特定 SSR两侧序列高度保守的核酸序列，设计序列特异 性引物，利用 PCR技术对重复序列进行扩增，并对 PCR扩增引物进行硝酸银染色或者荧光染料标记定量区 分片段大小（ bp），根据该等位变异的扩增片段大小鉴定苹果品种，在苹果品种鉴定的数据库中进行比 对，从而鉴定苹果品种。 5 设备和材料 5.1 设备 5.1.1 天平：感量 0.01 g。 5.1.2 均质器。 5.1.3 水浴锅 （ 0 100 ，感量 0.
7、1 ）。 5.1.4 振荡器。 5.1.5 研钵或其他粉碎装置。 5.1.6 高速台式冷冻离心机。 5.1.7 梯度 PCR仪。 5.1.8 微量可调移液器及配套吸头（ 50 L、 100 L、 200 L）。 5.1.9 微量离心管（ 1.5 mL 和 2 mL）。 5.1.10 毛细管电泳仪或者 DNA 分析仪。 5.2 试剂 5.2.1 CTAB提取缓冲液： 55 mmol/L CTAB， 1 400 mmol/L NaCl， 20 mmol/L EDTA， 100 mmol/L Tris， 用 10 % 盐酸调 pH至 8.0， 121 ，高压灭菌 20 min，备用。 5.2.2 C
8、TAB沉淀液：称取 1.00 g CTAB， 0.50 g NaCl，用适量水溶解后，调节 pH=8.0，定容至 200 mL， 高压灭菌。 DB37/T 4030 2020 3 5.2.3 RANase RNA酶。 5.2.4 TE缓冲液（ pH 8.0）。 5.2.5 NaCl溶液， 1.2 mol/L。 5.2.6 三氯甲烷。 5.2.7 异丙醇。 5.2.8 70 %乙醇。 5.2.9 引物：根据附录 A 中表 A.1 的序列合成荧光引物，加超纯水配制成 100 pmol/L 储存液，用于 PCR检测的工作液浓度为 10 pmol/L。荧光基团可以为 FAM、 HEX中的一种。 5.2
9、.10 毛细管电泳专用分子量内标。 5.2.11 去离子甲酰胺。 5.2.12 除特别说明外，所用试剂均为分析纯。水为无离子水。 5.2.13 蛋白酶 K。 5.2.14 苯酚。 6 制样 对于种苗、枝叶、果实样品，每个样品取两个平行样，各 300 mg。对于砧木样品取韧皮部部分，每 个样品取两个平行样，各 300 mg。 7 检测方法 7.1 样品 DNA 的提取 7.1.1 称取 300 mg经的样品，液氮研磨后置于 2 mL离心管中，加入 600 L CTAB缓冲液和 40 L 蛋白酶 K，振荡混匀， 65 温浴 30 min 90 min，期间每隔 10 min 轻柔颠倒混匀。 7.1
10、.2 2 000 g离心 5 min，取上清于另一干净的 2 mL 离心管中，加入等体积的酚、三氯甲烷和异戊 醇的混合液（ 25： 24： 1），震荡混匀 。 7.1.3 12 000 g离心 10 min，取上清至干净的 2 mL离心管中，加入等体积异丙醇，颠倒混匀。 7.1.4 12 000 g离心 10 min，弃去上清液，用预热至 65 的 TE 缓冲液溶解 DNA。 7.1.5 加入 5 L RNA酶溶液， 37 30 min。 7.1.6 加入 200 L三氯甲烷：异戊醇（ 24： 1），强烈振荡。 7.1.7 12 000 g离心 10 min，取上清至干净的 2 mL离心管中，
11、加入等体积异丙醇，颠倒混匀。 7.1.8 12 000 g离心 10 min，弃去上清液，用 4 预冷的 70 %乙醇 500 L，涡旋清洗沉淀。 7.1.9 12 000 g离心 10 min，弃去上清液，倒置晾干后加 100 L TE缓冲液溶解沉淀， 20 保存 备用。也可以根据实际情况使用其他经过验证的试剂盒。 7.2 DNA 浓度与纯度测定 采用紫外分光光度计法测定 DNA浓度和纯度。紫外分光光度计检测的最佳范围是 2 pg/mL 50 pg/mL， OD值应该在 0.05 1的区间内。将 DNA液做适当的稀释，放入紫外分光光度计的龀色皿中，于 260 m处测 定其吸收峰， 1OD26
12、0 nm=50 g/mL双链 DNA或 38， g/mL单链 DNA。 PCR级 DNA溶液的 OD260 nm/OD280 nm比值为 1.7 2.0。 7.3 PCR 定性检测 DB37/T 4030 2020 4 7.3.1 PCR 反应引物序列表 针对种常见苹果品种鉴定用的 PCR扩增引物，见附录 A中表 A.1。 15对引物分别进行 PCR的扩增。 7.3.2 PCR 反应参数 PCR扩增用引物序列信息见附录 A中表 A.1。 7.3.3 PCR 反应体系 PCR反应体系见附录 A中表 A.2。 7.3.4 质控措施 检测过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。用已知品种的苹果做阳
13、性对照，用已知不含苹 果成分的模板作阴性对照，用等体积的水代替模板 DNA作空白对照。 7.4 毛细管电泳荧光检测 7.4.1 样品上机 按照毛细管电泳仪器使用要求更换缓冲液、灌胶和在 程序中输入样品信息。将 FAM荧光标记的 PCR 产物用超纯水稀释 30倍，将 HEX荧光标记的 PCR产物用超纯水稀释 15倍，将 TAMRA荧光标记的 PCR产物用超 纯水稀释 10倍，将 ROX荧光标记的 PCR产物用超纯水稀释 5倍，混合均匀。从稀释液中取 1 L上样到毛细 管电泳仪专用分析板的孔中。同时加入 0.1 L分子量内标和 8.9 L去离子甲酰胺。将样品在 PCR仪上 95 变性 5 min，
14、迅速取出置于冰上，冷却 10 min。离心把管内液体甩至管底后上毛细管电泳的仪器。 启动运行程序，毛细管电泳仪自动收集点用数据。 7.4.2 等位 数据采集 由毛细管电泳的分析软件，通过与标准分子量比对，读出每个扩增位点的样品等位基因扩增条带数 目和条带大小的数据。若采集的等位基因扩增的数据为 2个扩增条带，则该样品为二倍体苹果。若采集 的等位基因扩增的数据为 3个扩增条带，则该样品为三倍体苹果。若有 4个扩增条带，则该样品为四倍体 苹果。二倍体纯合位点的等位基因条带的大小数据记录为 X/X，杂合位点等位变异大小数据记录为 X/Y。 其中 X、 Y分别为该位点上两个不同的等位变异，小片段数据在
15、前，大片段数据在后，无效等位变异的大 小记录为 0/0。三倍体和四倍条带大小记录方式类 推。 7.5 结果判定及表述 7.5.1 将获得样品的等位基因变异数据与附录 A.3数据库中品种比较： a) 若为二倍体，品种相似度（ S）按照下面的公式计算： . (1) 式中： S 相似度，单位为百分率（ %）； Nij 品种 i和 j之间共有的等位基因数目； Ni 品种 i中出现的等位基因数目； Nj 品种 i中出现的的等位基因数目。 b) 若为三倍体，品种相似度（ S）按照下面的公式计算： DB37/T 4030 2020 5 . (2) 式中： S 相 似度，单位为百分率（ %）； Nij 品种
16、i和 j之间共有的等位基因数目； Ni 品种 i中出现的等位基因数目； Nj 品种 i中出现的的等位基因数目。 推荐使用本标准附录 B配用的苹果品种鉴定系统软件，该软件预装了附录 A.3的标准样品数据库， 并且按照以上公示设计计算程序，输入待测样品的微卫星数据，运行程序可以直接得到品种相似度最高 的相似品种信息。该软件需要在 Java运行条件下安装使用。 7.5.2 结果判定及表述 判定方法如下： a) 品种间相似度 90 %，判定为不同品种； b) 品种间相似度 90 % S 100 %时，判定为近似品种； c) 品种间相似度 =100 %，判定为疑似品种。 对于 b）和 c）的情况，按照
17、GB/T 19557.1和 NY/T 2424 2013的规定进行田间鉴定。 DB37/T 4030 2020 6 A A 附 录 A （规范性附录） PCR 扩增用引物序列信息及参考数据库 PCR扩增用引物序列信息见表 A.1。 表 A.1 PCR 扩增用引物序列信息 序 号 名称 引物 方向 序列（ 5 -3 ） 5 端 标记 荧光 基团 扩增条件 扩增大小 bp 文献来源 1 CH01d08 F ctccgccgctataacacttc 94 2 min 30 sec； 94 30 sec， 52 30 sec， 72 30 sec， 40 cycle； 72， 10 min。 238-
18、290 1、 Gerald S. Dangl Judy Yang Deborah A. Golino Thomas Gradziel. A practical method for almond cultivar identification and parental analysis using simple sequence repeat markers Euphytica (2009) 168:41 48. 2、 L. Gianfranceschi, N. Seglias,R. archini, M. Komjanc, C. Gessler. Simple sequence repeat
19、s for the genetic analysis of apple. Theor Appl Genet (1998) 96:1069-1076. R actctggagggtatgtcaaag 2 CH01e01 F ggttggagggaccaatcatt 106-120 R cccactctctgtgccagatc 3 CH02b03b F ataaggatacaaaaaccctacacag 77-109 R gacatgtttggttgaaaacttg 4 CH02b07 F ccagacaagtcatcacaacactc 180-202 R atgtcgatgtcgctctgttg
20、 5 CH02b10 F caaggaaatcatcaaagattcaag 121-159 R Caagtggcttcggatagttg 6 CH02b12 F ggcaggctttacgattatgc 101-143 R cccactaaaagttcacaggc 7 CH02d11 F agcgtccagagcaacagc 118-148 R aacaaaagcagatccgttgc 8 CH02f06 F ccctcttcagacctgcatatg 135-158 R actgtttccaagcgatcagg 9 CH02g09 F tcagacagaagaggaactgtatttg 98
21、-138 R Caaacaaaccagtaccgcaa 10 CH02h11a F cgtggcatgcctatcatttg 104-132 R ctgtttgaaccgcttcctc 11 CH03d07 F caaatcaatgcaaaactgtca 186-226 R ggcttctggccatgatttta 12 CH04d02 F cgtacgctgcttcttttgct 118-146 R ctatccaccacccgtcaact 13 CH04d10 F gagggatctgtagctccgac 138-204 R tggtgagtatctgctcgctg 14 CH05c07
22、F tgatgcattagggcttgtactt 111-149 R gggatgcattgctaaataggat 15 CH05g03 F gctttgaatggatacaggaacc 135-192 R cctgtctcatggcattgttg DB37/T 4030 2020 7 PCR反应体系见表 A.2。 表 A.2 PCR 反应体系 试剂名称 工作液浓度 25 L 反应体系加样体积 / L dNTP 2.5 mmol/L 2 L PCR 缓冲液 10 2.5 L Taq DNA 聚合酶 5 U/L 0.3 L 上游引物 10 pmol/L 0.3 下游引物 10 pmol/L 0.
23、3 DNA 模板 10050 ng 2 超纯水 17.6 DB37/T 4030 2020 8 部分苹果品种 SSR基因型数据见表 A.3。 表 A.3 部分苹果品种 SSR 基因型数据 品种 果实或者 茎枝 SSR 位点 CH02b12 SSR 位点 CH01e01 SSR 位点 CH02b03b SSR 位点 CH02b10 SSR 位点 CH02d11 SSR 位点 CH02f06 SSR 位点 CH01d08 SSR 位点 CH02b07 SSR 位点 CH02g09 SSR 位点 CH02h11a SSR 位点 CH03d07 SSR 位点 CH04d02 SSR 位点 CH05c0
24、7 SSR 位点 CH05g03 SSR 位点 CH04d10 Akagi Fruiting 128/144 114/116 79/95 129/137 119/121 148/162 275/275 110/132 111/120 124/134 185/199 138/152 153/153 166/170 168/191 Akane Fruiting 130/130 114/122 95/95 129/141 121/133 148/162 244/297 130/132 111/138 107/124 183/203 126/152 117/153 166/174 168/209 Ak
25、ibae Fruiting 130/140 112/116 79/95 125/129 119/133 148/162 244/244 110/112 107/120 132/134 185/199 126/152 117/153 166/170 154/191 Akita Gold Fruiting 144/144 112/116 79/79 125/135 119/133 142/148 244/254 112/132 107/120 132/134 203/223 126/126 117/143 166/170 164/191 Aodai3 Rootstock 146/148 110/1
26、22 91/101 118/149 127/133 144/162 244/260 110/112 138/152 107/132 160/223 126/144 117/127 140/166 166/176 Baskatong Others 134/134 126/138 91/101 121/139 123/125 152/152 242/299 104/110 103/138 140/146 181/181 126/134 143/151 162/166 150/152 Braeburn Fruiting 144/146 112/114 99/99 123/161 123/133 15
27、4/154 258/258 110/110 111/136 132/136 203/223 126/126 129/153 166/166 164/209 Chinatsu Fruiting 130/134 114/114 95/99 127/141 133/133 144/148 254/297 110/132 111/120 124/132 203/203 126/138 117/117 140/166 166/168 Cox s Orange Pippin Fruiting 132/144 110/114 75/97 123/135 121/133 154/158 244/258 110
28、/124 97/111 107/132 215/215 126/126 129/129 168/199 154/209 Cripp s Pink Fruiting 144/146 112/116 79/97 125/129 119/149 148/148 254/258 118/124 120/120 132/132 185/223 126/126 145/153 170/174 164/191 Discovery Fruiting 130/142 114/114 95/97 133/133 121/133 148/162 244/297 118/130 107/111 128/132 183
29、/203 126/152 117/143 140/166 164/164 Fiesta Fruiting 130/132 110/114 75/95 123/129 121/133 154/162 258/275 112/124 97/111 107/132 203/215 124/126 129/145 168/189 154/166 Fuji Fruiting 144/144 112/116 79/108 135/137 133/133 142/162 244/258 112/112 107/111 132/132 223/223 124/126 117/139 140/166 164/2
30、09 G.65 Rootstock 113/142 112/148 75/91 125/149 123/149 150/154 258/258 104/112 111/138 112/124/ 132 183/223 138/138 133/153 140/176 164/164 Gala Fruiting 132/144 114/116 75/79 129/135 119/121 142/162 244/275 110/118 111/120 134/136 185/215 126/138 117/143 170/199 154/191 Geneva Fruiting 134/140 120
31、/124 95/101 133/139 121/125 150/162 242/244 108/118 101/138 107/140 181/185 126/134 143/153 140/166 150/168 DB37/T 4030 2020 9 表 A.3 部分苹果品种 SSR 基因型数据 （续） 品种 果实或者 茎枝 SSR 位点 CH02b12 SSR 位点 CH01e01 SSR 位点 CH02b03b SSR 位点 CH02b10 SSR 位点 CH02d11 SSR 位点 CH02f06 SSR 位点 CH01d08 SSR 位点 CH02b07 SSR 位点 CH02g09
32、 SSR 位点 CH02h11a SSR 位点 CH03d07 SSR 位点 CH04d02 SSR 位点 CH05c07 SSR 位点 CH05g03 SSR 位点 CH04d10 Golden Delicious Fruiting 144/144 112/116 79/99 125/129 119/133 148/162 254/275 110/118 120/138 132/134 185/203 126/138 143/153 140/170 191/191 Granny Smith Fruiting 144/150 114/116 81/103 125/129 133/149 150
33、/162 258/258 110/114 120/138 132/132 189/223 124/126 143/145 174/189 166/209 Gunmameiget su Fruiting 128/144 112/116 79/79 135/137 119/133 142/148 258/275 112/132 111/120 132/134 185/223 124/152 117/153 140/170 164/191 Hacnine Fruiting 144/144/ 144 112/116 79/108 129/135/ 137 133/133/ 133 142/162 24
34、4/258/ 275 112/132 107/111 126/132 185/223 124/126/ 138 117/139/ 153 140/166/ 197 164/191/ 209 Haruka Fruiting 144/144 112/116 79/99 129/135 119/133 142/148 254/258 110/112 111/120 134/136 203/203 126/138 117/143 166/170 191/209 Hatsuaki Fruiting 128/144 112/116 79/97 129/129 133/133 154/162 275/275
35、 110/112 120/136 107/134 185/199 126/126 143/153 170/197 191/209 Himekami Fruiting 130/144 112/114 79/95 135/137 121/133 162/162 244/275 112/112 107/111 107/132 203/223 124/126 139/153 166/197 164/168 Hokuto Fruiting 144/144/ 144 112/114/ 116 79/108 135/137/ 161 133/149 142/162 244/258 110/112 107/1
36、11/ 120 132/132/ 132 185/223 124/126/ 152 117/139/ 153 140/166/ 170 164/166/ 209 Honey Queen Fruiting 130/146 114/116 91/108 125/161 121/133 148/162 258/275 112/112 107/120 107/134 203/203 126/126 153/153 166/197 191/209 Idared Fruiting 130/144 114/116 95/97 129/161 121/133 154/162 275/297 112/112 1
37、11/136 107/126 199/203 124/152 145/145 166/189 166/209 Indo Fruiting 140/144 114/116 79/97 137/147 133/149 142/148 258/258 110/118 111/167 132/132 215/223 124/152 117/153 166/166 154/209 Iwakami Fruiting 128/144 114/116 97/108 129/135 121/133 142/154 244/244 112/112 107/136 107/132 203/223 124/126 1
38、17/153 140/166 164/168 JM1 Rootstock 132/146 110/118 101/106 118/149 133/143 144/154 244/250 110/110 99/152 128/132 213/223 126/144 117/127 164/166 152/166 JM2 Rootstock 144/148 110/118 91/101 118/149 127/131 144/154 250/293 110/110 136/138 128/130 160/223 126/126 131/153 140/166 152/164 JM5 Rootsto
39、ck 146/148 110/118 101/106 118/149 131/143 144/154 250/293 110/110 99/152 107/132 160/223 138/144 127/131 140/166 166/176 JM7 Rootstock 146/148 110/118 91/101 137/149 131/143 152/154 244/250 110/110 99/136 128/132 213/223 138/144 131/153 140/174 152/166 JM8 Rootstock 144/148 110/122 101/106 118/129
40、127/131 144/162 260/293 110/110 99/152 128/132 160/223 126/144 117/127 164/166 152/166 DB37/T 4030 2020 10 表 A.3 部分苹果品种 SSR 基因型数据 （续） 品种 果实或者 茎枝 SSR 位点 CH02b12 SSR 位点 CH01e01 SSR 位点 CH02b03b SSR 位点 CH02b10 SSR 位点 CH02d11 SSR 位点 CH02f06 SSR 位点 CH01d08 SSR 位点 CH02b07 SSR 位点 CH02g09 SSR 位点 CH02h11a SSR
41、 位点 CH03d07 SSR 位点 CH04d02 SSR 位点 CH05c07 SSR 位点 CH05g03 SSR 位点 CH04d10 Jonagold Fruiting 128/144 112/114/ 116 79/95/99 125/129/ 137 119/133 148/154/ 162 244/254/ 275 110/112/ 118 111/120/ 138 124/132/ 134 185/199/ 203 126/138 143/145/ 153 140/170/ 197 191/209 Jonathan Fruiting 128/130 112/114 95/97
42、 129/137 121/133 154/162 244/275 112/132 111/136 107/124 199/203 126/152 145/153 166/197 168/209 Kanki Fruiting 140/144 112/116 79/79 125/129 133/133 142/162 244/244 110/112 107/120 134/134 185/223 152/152 117/153 166/170 164/168 Kinsei Fruiting 144/146 114/116 79/108 125/135 119/133 148/154 254/258
43、 110/112 111/120 132/134 185/203 126/138 153/153 166/170 191/209 Kiou Fruiting 144/144 116/116 79/97 125/129 133/149 148/162 244/254 110/112 120/120 132/132 185/223 138/152 153/153 140/166 154/154 Kitakami Fruiting 144/144 112/116 93/108 129/149 133/133 150/154 275/297 112/114 107/120 107/136 185/22
44、3 126/138 143/153 170/174 168/191 Kitaro Fruiting 144/144 112/116 79/79 129/135 133/133 142/162 244/275 112/112 107/120 107/132 185/223 126/126 117/143 140/170 191/209 Kizashi Fruiting 132/132 114/116 75/79 127/135 119/133 142/154 244/244 110/118 120/120 132/134 203/215 124/138 117/131 140/199 166/1
45、91 Kotaro Fruiting 144/144 112/116 97/108 129/137 133/133 154/162 244/275 112/112 111/120 132/134 199/223 124/126 139/153 166/170 164/191 M.26 Rootstock 130/144 110/114 99/101 129/149 133/149 150/154 244/258 110/132 136/152 107/132 189/223 126/138 127/143 164/174 164/168 M.27 Rootstock 113/146 112/1
46、16 91/97 135/149 133/149 154/154 258/293 112/124 111/136 128/132 213/223 126/138 143/153 140/140 164/166 M.9 Rootstock 144/146 110/116 91/101 129/149 131/133 154/162 244/293 110/112 136/152 107/128 223/223 126/138 127/153 140/164 164/166 Malus niedzwetzky ana Others 134/134 120/126 101/101 139/139 1
47、23/125 152/162 242/299 110/118 134/138 132/140 181/203 126/134 143/151 160/166 150/152 McIntosh Fruiting 144/146 112/114 93/99 133/149 121/133 150/162 258/275 114/132 107/138 126/132 187/223 126/126 143/145 164/166 154/164 Megumi Fruiting 130/144 114/114 91/97 129/161 121/121 154/162 275/275 112/112
48、 107/111 107/126 203/223 126/126 145/153 166/197 166/209 Miki-life Fruiting 130/144 112/116 79/95 125/129 119/133 148/154 244/244 110/112 111/120 132/134 185/185 152/152 117/153 140/170 164/168 MM.106 Rootstock 132/144 112/116 97/97 123/137 123/133 150/162 277/293 110/110 136/138 132/132 203/223 124/126 117/145 140/189 154/225 Mo84a Rootstock 132/148 118/122 91/106 118/137 127/143 144/152 250/260 110/110 99/140 130/132 160/211 126/144 117/131 166/172 152/180 DB37/T 4030 2020 11 表 A.3 部分苹果品种 SSR 基因型数据 （续） 品种 果实或者 茎枝 SSR 位点 CH02b12 SSR 位点 CH01e01 SSR 位
