1、ICS 65.020.30 B 41 DB37 山东省 地 方 标 准 DB37/T 3985 2020 鸡沙门氏菌的胶体金试纸条检测技术规程 Technical code of colloidal gold test strip for Avian Salmonella detection 2020 - 06 - 08 发布 2020 - 07 - 08 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3985 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位
2、：泰安市动物疫 病预防控制中心、山东农业大学。 本标准主要起草人：唐德宏、孙淑红、王方昆、唐辉、孙建华、王莉莉、鞠孜敬、张富友、伊惠、 樊丽。 DB37/T 3985 2020 II 引 言 沙门氏菌在自然界分布广泛，能侵害人和动物，是一种常见的人畜共患病原，在医学、兽医学和公 共卫生学中占有重要地位。传统沙门氏菌的检测方法耗时长，操作步骤繁琐，技术难度大，家禽养殖业 和相关检测机构难以对鸡沙门氏菌病做到准确实时监控。 本项目拟根据对国内多种血清型、多种来源沙门氏菌检测的基础上，建立本检测技术规程。本标准 将规定用两步增菌法对疑似沙门氏菌感染样品进行增菌后，再使用胶体金试纸条进行快速检测的技术
3、 （ 30 h内完成）。 本标准适用于鸡群中携带沙门氏菌的检疫、流行病学调查、也可用于规模化种禽场沙门 氏菌病的净 化。 DB37/T 3985 2020 1 鸡沙门氏菌的胶体金试纸条检测技术规程 1 范围 本标准规定了鸡沙门氏菌快速检测技术。本标准规定用两步增菌法对疑似沙门氏菌感染样品进行增 菌后，再使用胶体金试纸条进行快速检测的技术。 本标准适用于沙门氏菌的检疫、诊断、监测和流行病学调查，也可用于规模化种禽场中沙门氏菌的 净化。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改
4、单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27401 实验室质量控制规范 动物检疫 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 NY/T 541 2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 GB 4789.4 2016 食品安 全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 3 试剂或材料 3.1 除另有规定外，所用化学试剂均为分析纯。实验所用水均符 合 GB/T 6682 二级水的规定。实验中 人员配置、实验室管理、仪器设备使用、样品实验试剂和废弃物处理等均符合 GB/T 27401 的规定。 3.2 BPW 增菌液（参见附录 A.1）。
5、3.3 SC 增菌液（参见附 录 A.2）。 3.4 TTB 增菌液（参见附录 A.3）。 3.5 鸡白痢沙门氏菌（ CVCC535）和肠炎沙门氏菌（ CVCC3377）作为阳性对照。 3.6 灭菌水为阴性对照。 3.7 沙门氏菌胶体金试纸条。 3.8 营养肉汤均质袋。 4 仪器设备 4.1 冰箱（ 0 8 ）。 4.2 生化培养箱（温度范围： 5 50 ，温度均匀度： 1 ）。 4.3 二级生物安全柜。 4.4 控温摇床（温度范围： 5 50 ）。 4.5 高压灭菌锅（工作压力： 0.35 MPa，工作温度： 142 ）。 4.6 组织研磨仪（干磨、湿磨及冷冻 研磨均可）。 DB37/T 3
6、985 2020 2 4.7 电子天平（感量 0.001）。 4.8 微量移液器（量 程 50 L 200 L、 300 L 1 000 L）。 5 沙门氏菌快速检测方法 整个实验操作严格按照 GB/T 27401、 GB/T 19495.2和 GB 4789.4 2016要求执行。 5.1 样品采集、运输和储存 取约 0.5 g样品（新鲜粪便或肝脏等组织）或 500 L卵黄囊液到均质袋中，置于 2 8 保存， 迅速送实验室待检，运输或储存需低温冷藏。参见 NY/T 541 2016。 5.2 样品处理 往均质袋中加入 4.5 mL BPW增菌培养基，放入均质器中均质 2 min。整个过程无菌
7、操作。肝脏等实 质性组织样本 需经组织研磨仪处理备用。 5.3 培养过程 5.3.1 BPW 增菌培养置于 37 摇床中， 220 rpm 培养 8 h 12 h。 5.3.2 取培养后的增菌液 500 L 分别加入到 4.5 mL SC 和 TTB 增菌液中，置于 37 摇床中， 220 rpm 培养 18 h 24 h。 6 胶体金试纸条检测 将 5.3.2的培养物混合均匀，取 1 mL到离心管内，盖严盖子，置于沸水（ 100 ）中加热 10 min， 后冷却至室温，摇匀，滴加 3 4滴（约 100 L）至胶体金试纸条的样本孔，反应 5 min 15 min，判读 结果，超过 30 min
8、显色 无效。鸡白 痢沙门氏菌（ CVCC535）和肠炎沙门氏菌（ CVCC3377）作为阳性对照。 参见附录 B。 7 判断标准 7.1 试验成立标准 30 min内， C线和 T线同时显色或者只有 C线显色，则反应成立。若 C线不显色，则测试失败或检测卡 失效，为无效反应。 7.2 结果判定 阳性反应：若 C、 T线均显色，可判定待检样本为沙门氏菌阳性。 阴性反应：若 C线显色， T线不显色，可判定待检样本为沙门氏菌阴性。 DB37/T 3985 2020 3 A A 附 录 A （资料性附录） 培养基配制 A.1 BPW增菌液 A.1.1 成分 蛋白胨 10.0 g 氯化钠 5.0 g 磷
9、酸氢二钠 (含 12个结晶水 ) 9.0 g 磷酸二氢钾 1.5 g 水 1 000 mL A.1.2 制备 将各成分加热溶解于 1 000 mL水中， 121 高压灭菌 15 min备用。 A.2 SC增菌液 A.2.1 成分 蛋白胨 5.0 g 乳糖 4.0 g 亚硒酸氢钠 4.0 g 磷酸氢二钠 10.0 g L-胱氨酸 0.01 g 水 1 000 mL A.2.2 制备 将各成分加热溶解于 1 000 mL蒸馏水中，无菌操作分装于灭菌三角瓶或试管中备用。当天制备当天 使用，无需高压灭菌。 A.3 TTB增菌液 A.3.1 成分 蛋白胨 9.0 g 牛肉粉 4.5 g 氯化钠 2.7 g 碳酸钙 40.5 g 胆盐 5.0 g 硫代硫酸钠 50.0 g DB37/T 3985 2020 4 水 1 050 mL A.3.2 制备 将各成分溶解于 1 050 mL蒸馏水中，加热煮沸，临用前加入 20 %碘液 20 mL， 0.1 % 煌绿 10 mL，现 配现用，不宜久置。 DB37/T 3985 2020 5 B B 附 录 B （资料性附录） 胶体金检测结果模式图 胶体金检测结果模式图见图 B.1。 说明： 1 为沙门氏菌阴性； 2 为沙门氏菌阳性； 3 和 4为无效反应。 图 B.1 沙门氏菌胶体金检测图片 _
