1、ICS 13.080 B10 DB37 山东省地方标 准 DB 37/T 34742018 土壤中 12 种有机磷农药及代谢物残留量的 测定液相色谱-质谱/质谱法 Determination of 12 organophosphorous pesticides and metabolites residues in soil Liquid chromatography - mass spectrometry 2018-12-29发布 2019-01-29实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3474 2018 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由
2、山东省农业农村厅提出并监督实施。 本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东省农药检定所。 本标准主要起草人：周力、韩帅兵、张耀中、李向阳、姜士聚、吴亚玉、迟归兵、鞠易明、杨扬、 林得平、于淼。 DB37/T 3474 2018 1 土壤中 12 种有机磷农药及代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质 谱法 1范围 本标准规定了土壤中12种有机磷农药及代谢物残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于土壤中甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧乐果、噻唑磷、甲拌磷、甲拌磷砜、甲拌磷亚砜、三 唑磷、二嗪磷、辛硫磷、丙溴磷、毒死蜱残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用
3、是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3原理 土壤样品中残留的有机磷农药及代谢物经乙腈提取，盐析离心，分散固相萃取净化，用液相色谱- 质谱/质谱仪检测，外标法定量。 4 试剂与材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 甲醇（CH 3 OH，65-56-1）：色谱纯。 4.1.2 乙腈（CH 3 CN，75-05-8）：色谱纯。 4.1.3 甲酸（HCOOH，64-18-6）：色谱
4、纯。 4.1.4 乙酸铵（CH 3 COONH 4 ，631-61-8）：色谱纯。 4.1.5 氯化钠（NaCl，7647-14-5）。 4.2 溶液配制 0.02 %甲酸水溶液（含5 mmol/L乙酸铵）：准确移取0.2 mL甲酸和称取0.385 g乙酸铵于1000 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，现配现用。 4.3 标准品 12种有机磷农药及代谢物标准物质，纯度95 %。 4.4 标准溶液配制 DB37/T 3474 2018 2 4.4.1 标准储备溶液 分别准确称取适量（精确至0.1 mg）12种有机磷农药及代谢物标准品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶 解并定容至刻度，配制成浓度约为10
5、0 mg/L的标准储备溶液，04 保存，保存期为6个月。 4.4.2 中间标准溶液 准确吸取适量标准储备溶液（4.4.1），用甲醇稀释配制成10 mg/L的中间标准溶液，04 保存， 保存期为1个月。 4.4.3 混合标准工作溶液 准确吸取适量中间标准溶液（4.4.2），用甲醇稀释配制成所需浓度的混合标准工作溶液，现配现 用。 4.5 材料 4.5.1 有机滤膜：0.22 m。 4.5.2 分散固相萃取净化管（Dispersive SPE 15 mL，Rruits and Veg，EN 1) )。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：
6、精度 0.01 g 和 0.0001 g。 5.3 回旋式振荡器。 5.4 离心机：最大转速为 6000 r/min。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 旋涡混合器。 5.7 真空泵。 5.8 具塞离心管：100 mL。 5.9 量筒：50 mL。 5.10 鸡心瓶：25 mL。 5.11 刻度离心管：10 mL。 6 试样制备 取土壤样品约500 g，除去土壤中的碎石、杂草和植物根茎等杂物后，过1 mm试验筛，均分成三份 作为试样，分装至洁净的容器内，密封并做好标识，于-18 以下冷冻保存。在试样制备过程中，应防 止样品污染或发生残留物含量的变化。 7 分析步骤 7.1 提取 1) Disper
7、sive SPE 15 mL，Fruits and Veg，EN 净化管为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是 为了方 便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 DB37/T 3474 2018 3 称取10 g试样（精确至0.01 g），置于100 mL离心管中，加入5 mL水，再准确加入20.0 mL乙腈， 在回旋式振荡器上震摇30 min。加入3 g5 g NaCl，再剧烈震荡30 s，在离心机中以4500 r/min离心5 min，待净化。 7.2 净化 移取约7 mL上层提取液至分散固相萃取净化管（4.5.2）
8、中，在旋涡混合器上涡旋1 min，在离心机 中以4500 r/min离心3 min。准确移取4.00 mL上层清液至鸡心瓶中，于40 水浴减压浓缩至干，用甲 醇定容到1.0 mL，经0.22 m滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱-质谱/质谱参考条件 7.3.1.1 色谱柱：Shim-pack XR-ODS 2.0 mm（i.d）75 mm，1.6 m，或相当者。 7.3.1.2 流动相及梯度洗脱条件见表 1。 表 1 流动相及梯度洗脱条件 时间/min 流速/（mL/min） 流动相 A（甲醇）/% 流动相 B（0.02 %甲酸+5 mmol/L 乙酸
9、铵水溶液）/% 0.00 0.35 10 90 0.50 0.35 10 90 2.00 0.35 60 40 5.00 0.35 60 40 9.00 0.35 95 5 11.50 0.35 95 5 12.00 0.35 10 90 7.3.1.3 柱温：40 。 7.3.1.4 进样量：0.5 L。 7.3.1.5 质谱仪参数：参见附录 A。 7.3.1.6 监测离子对、碰撞电压：参见附录 B。 7.3.2 定性测定 在相同实验条件下，试样中被测物的色谱峰保留时间与标准工作液相同，并且在扣除背景后的试样 谱图中，所选择的离子对均出现，各定性离子的相对丰度与标准品离子的相对丰度相比，偏差
10、不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 % 20 %至50 % 10 %至20 % 10 % 允许的相对偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 7.3.3 定量测定 本标准中液相色谱-质谱/质谱采用外标法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，本方法采用空 白样品溶液配制基质混合标准工作溶液， 并且应保证所测样品中农药及代谢物的响应值均在仪器的线性 范围以内。对混合基质标准溶液和样液等体积参插进样测定。12 种有机磷农药及代谢物多反应监测 DB37/T 3474 2018 4 （MRM）色谱图参见附录 C
11、。 7.4 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。 7.5 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 液相色谱-质谱/质谱测定结果可由计算机按外标法自动计算，也可按式(1)计算： 135 24 X S S VAVV VAVm . (1) 式中： 试样中每种被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； S 标准溶液质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V 1 提取溶液总体积，单位为毫升（mL）； V 2 净化后吸取出用于浓缩的提取溶液体积，单位为毫升（mL）； V 3 样品定容体积，单位为毫升（mL）； V 4 待测液进样体积，单位为微升（L）； V 5 标准溶液进
12、样体积，单位为微升（L）； A S 标准溶液的峰面积； A X 待测液的峰面积； m试样质量，单位为克（g）； 注： 计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。 9 精密度 9.1 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r），重复性限（r）的数据按照 附录 D。 9.2 在再现性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R），再现性限（R）的数据按照 附录 E。 10 定量限和回收率 10.1 定量限 本方法中12种有机磷农药及代谢物在土壤中定量限均为0.001 mg/kg。 10.2 回收率 本方法的添加水平和回收率范围见附录F。 D
13、B37/T 3474 2018 5 AA 附录A （资料性附录） 质谱仪参数 2) 液相色谱-质谱/质谱仪的质谱仪参数： a) 扫描方式：正离子扫描； b) 检测方式：多反应监测； c) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； d) 电离电压：4.0 kV； e) 加热块温度：400 ； f) DL 管温度：250 ； g) 检测器电压：1.74 kV； h) 碰撞气：氩气； i) 碰撞气压力：0.23 Mpa； j) 雾化气流速：3.0 L/min； k) 干燥气流速：10.0 L/min； l) 加热气流速：10.0 L/min。 2) 非商业性声明：所列参数是在岛津 LCMS-8050 液相色
14、谱串联质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为 了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。 DB37/T 3474 2018 6 BB 附录B （资料性附录） 12 种有机磷农药及其代谢物中英文名称、监测离子对、碰撞电压和保留时间 序号 中文名 英文名 保留时间 /min 定量离子对 碰撞电压 /V 定性离子对 碰撞电压 /V 1 甲胺磷 Methamidophos 1.19 142.1094.00 -14 142.10125.10 -18 2 乙酰甲胺磷 Acephate 1.73 184.00143.00 -10 184.00125.00 -17 3 氧
15、乐果 Omethoate 1.96 214.10155.00 -15 214.10183.00 -11 4 噻唑磷 Fosthiazate 3.99 283.80104.00 -23 283.80227.95 -11 5 甲拌磷亚砜 Phorat-sulfoxide 4.07 277.0096.90 -31 277.00198.90 -10 6 甲拌磷砜 Phorat-sulfone 4.21 293.00171.05 -9 293.00115.00 -24 7 三唑磷 Triazophos 6.91 314.05162.15 -19 314.05119.15 -35 8 二嗪磷 Diazin
16、on 8.05 305.00169.10 -19 305.00153.10 -20 9 辛硫磷 Phoxim 8.19 299.1077.10 -52 299.10129.10 -11 10 甲拌磷 Phorate 8.25 261.0075.00 -11 261.00143.00 -17 11 丙溴磷 Profenofos 8.87 372.90302.80 -19 372.90345.00 -12 12 毒死蜱 Chlorpyrifos 9.28 351.90199.90 -18 351.9096.95 -33 DB37/T 3474 2018 7 CC 附录C （资料性附录） 12 种有
17、机磷农药及代谢物多反应监测（MRM）色谱图及质谱图 90 100 110 120 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 94.00 125.10 图 C.1 甲胺磷 120 130 140 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 143.00 125.00 图 C.2 乙酰甲胺磷 150 160 170 180 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 183.00 155.00 图 C.3 氧乐果 DB37/T 3474 2018 8 100.0 1
18、25.0 150.0 175.0 200.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 227.95 104.00 图 C.4 噻唑膦 100.0 125.0 150.0 175.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 198.9096.90 图 C.5 甲拌磷亚砜 100.0 125.0 150.0 175.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 171.05 115.00 图 C.6 甲拌磷砜 DB37/T 3474 2018 9 100.0
19、 125.0 150.0 175.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 162.15 119.15 图 C.7 三唑磷 150 160 170 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 169.10 153.10 图 C.8 二嗪磷 75.0 100.0 125.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 77.10 129.10 图 C.9 辛硫磷 DB37/T 3474 2018 10 75.0 100.0 125.0 m/z 0 10 20
20、30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 75.00 143.00 图 C.10 甲拌磷 300.0 325.0 350.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 302.80 345.00 图C.11 丙溴磷 100.0 125.0 150.0 175.0 m/z 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Inten. 199.9096.95 图 C.12 毒死蜱 DB37/T 3474 2018 11 DD 附录D （规范性附录） 实验室重复性限（r）数据表 序号 农药名称 含量 mg/kg 重
21、复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 1 甲胺磷 0.001 5.3910 -5 0.01 5.7410 -4 0.1 8.7010 -3 2 乙酰甲胺磷 0.001 8.3310 -5 0.01 6.5610 -4 0.1 7.6410 -3 3 氧乐果 0.001 8.0110 -5 0.01 5.3310 -4 0.1 1.0610 -2 4 噻唑磷 0.001 9.4010 -5 0.01 1.4310 -3 0.1 1.5010 -2 5 甲拌磷亚砜 0.001 1.4410 -4 0.01 1.1710 -3 0.1 1.4710 -2 6 甲
22、拌磷砜 0.001 1.9010 -4 0.01 9.1610 -4 0.1 1.4710 -2 7 三唑磷 0.001 1.6110 -4 0.01 1.0710 -3 0.1 1.6910 -2 8 二嗪磷 0.001 1.3910 -4 0.01 1.1910 -3 0.1 1.4910 -2 9 辛硫磷 0.001 1.6910 -4 0.01 9.7410 -4 0.1 1.4010 -2 10 甲拌磷 0.001 1.6910 -4 0.01 1.2410 -3 0.1 1.5110 -2 11 丙溴磷 0.001 1.2210 -4 0.01 1.1210 -3 0.1 1.30
23、10 -2 12 毒死蜱 0.001 2.6410 -4 0.01 1.1210 -3 0.1 1.5510 -2 DB37/T 3474 2018 12 EE 附录E （规范性附录） 实验室再现性限（R）数据表 序号 农药名称 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 1 甲胺磷 0.001 1.1710 -4 0.01 1.0210 -3 0.1 3.7910 -2 2 乙酰甲胺磷 0.001 1.2310 -4 0.01 7.4510 -4 0.1 2.0810 -2 3 氧乐果 0.001 1.3610 -4 0.01 8.2610
24、 -4 0.1 1.0110 -2 4 噻唑磷 0.001 1.6710 -4 0.01 1.9710 -3 0.1 2.0210 -2 5 甲拌磷亚砜 0.001 2.0710 -4 0.01 3.1410 -3 0.1 2.2310 -2 6 甲拌磷砜 0.001 2.9510 -4 0.01 1.3310 -3 0.1 1.9110 -2 7 三唑磷 0.001 1.6910 -4 0.01 1.9210 -3 0.1 2.0310 -2 8 二嗪磷 0.001 1.8310 -4 0.01 1.5710 -3 0.1 1.8010 -2 9 辛硫磷 0.001 1.6710 -4 0.
25、01 1.9810 -3 0.1 1.5310 -2 10 甲拌磷 0.001 3.5210 -4 0.01 1.7010 -3 0.1 1.9010 -2 11 丙溴磷 0.001 2.9510 -4 0.01 1.2810 -3 0.1 1.3410 -2 12 毒死蜱 0.001 2.5310 -4 0.01 1.3810 -3 0.1 1.4710 -2 DB37/T 3474 2018 13 FF 附录F （资料性附录） 12 种有机磷农药及代谢物加标回收率情况 添加水平 （mg/kg） 甲胺磷回收率 （%） 乙酰甲胺磷回 收率（%） 氧乐果回收率 （%） 噻唑磷回收率 （%） 甲拌
26、磷亚砜回 收率（%） 甲拌磷砜回收 率（%） 0.001 75.480.0 72.980.2 80.787.9 93.8100.5 96.0103.6 107.4125.4 0.01 72.675.2 70.573.4 77.082.4 90.797.6 88.798.4 91.299.8 0.1 72.978.5 71.977.6 77.985.2 90.798.7 91.4101.9 93.0100.0 添加水平 （mg/kg） 三唑磷回收率 （%） 二嗪磷回收率 （%） 辛硫磷回收率 （%） 甲拌磷回收率 （%） 丙溴磷回收率 （%） 毒死蜱回收率 （%） 0.001 93.9103.3 89.998.8 98.2106.8 86.395.2 91.8103.5 91.1102.4 0.01 87.995.3 87.694.7 87.594.1 79.588.6 86.695.4 87.295.1 0.1 83.499.0 88.2106.7 91.199.8 84.889.9 89.995.9 87.794.7 _
