1、ICS 67.060 B22 DB36 江西省地方标准 DB 36/ T 8822015 水稻二化螟抗药性检测技术规范-饲料混毒 法 Technological rules for monitoring insecticide resistance in striped stem borer， Chilo suppressalis Walker， using artificial diet incorporation bioassay method 2015 - 12 - 21 发布 2016 - 03 - 15 实施 江西省质量技术监督局 发布 DB36/ T 8822015 I 目 次 前
2、言 . . II 1 范围 . . 1 2 术语和定义 . . 1 3 试剂与材料 . . 1 4 主要仪器设备 . . 1 5 试验步骤 . . 1 6 数据统计与分析 . . 3 7 抗性水平评估 . . 3 8 检测报告编写 . . 4 附录 A（资料性附录） 部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线 . 5 附录 B（资料性附录） 二化螟人工饲料的组份及其配比 . 6 DB36/ T 8822015 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由江西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：江西省农业科学院植物保护研究所，江西省修水县植保植检站，江西省余江县植 保
3、植检站。 本标准主要起草人：黄水金，陈琼，秦文婧，张华满，徐样庚。 DB36/ T 8822015 1 水稻二化螟抗药性检测技术规范-饲料混毒法 1 范围 本标准规定了饲料混毒法检测二化螟（ Chilo suppressalis (Walker)）抗药性的方法。 本标准适用于杀虫剂对二化螟室内毒力测定和抗药性评估。 2 术语和定义 2.1 抗药性 Resistence 昆虫忍耐杀死正常种群大部分个体的药量的能力，并在其种群中发展起来的能力。 2.2 敏感基线 Susceptibi lity baseline 在某种农药使用之前，该种药剂对昆虫敏感品系的毒力回归方程及LD 50或LC 50。 2
4、.3 饲料混毒法Artificial diet incor poration bioassay method 昆虫幼虫接触、取食混药的人工饲料而中毒死亡的毒力测定方法。 3 试剂与材料 3.1 供试虫源 4龄初期二化螟幼虫。 3.2 试剂与药剂 试剂为分析纯，药剂为农药原药或纯品。 4 主要仪器设备 电子天平（感量0.0001g），手持搅拌机，料理机，毛笔，眼科镊，移液器，平底玻璃管（直径3cm， 高5cm），1000ml烧杯（直径13cm， 高15cm），恒温培养箱 、恒温养虫室或人工气候箱，高温高压湿热 灭菌锅，微波炉。 5 试验步骤 5.1 卵块采集、管理及混毒饲料配制 DB36/ T
5、8822015 2 5.1.1 卵块采集 卵块从水稻田直接采集，或从田间采集二化螟成虫于室内产卵。 5.1.2 卵块孵化及幼虫管理 在玻璃培养皿（直径9cm）中放入滤纸34片，并加入适量灭菌蒸馏水保湿，将卵块放入其中，保 湿培养至卵块黑头时，将黑头卵块放入装有饲料的玻璃管中，每个玻璃管中放入12个卵块，塞上棉花 塞。待幼虫从卵块中孵出并爬至饲料上后，将卵块残余部分从玻璃管中挑出来，然后将幼虫放置于温度 281，相对湿度60%70%，光照比（L：D）16：8hrs（下光照）的光照培养箱中培养至4龄初期。 5.1.3 药剂配制 用电子天平或移液器称量若干原药，加入水或有机溶剂（如丙酮、二甲基甲酰胺
6、等）溶解配制成药 剂母液，然后按所需浓度的量用移液器加入到已装有30ml含10（m/v） Triton-X 100（或吐温80）灭 菌蒸馏水的烧杯（直径13cm，高15cm）中，充分混匀后备用。 5.1.4 人工饲料配制方法 人工饲料配方进行配制（见附录B）。具体配制方法如下： a) 将各组分按配比称重，备用； b) 将新鲜的茭白切碎，加入水，放入料理机中磨碎并匀浆，匀浆后将其倒入盛有大豆粉、酵母粉、 干酪素和蔗糖的灭菌桶中，将上述 5 种组分充分搅拌均匀后，置于高压蒸汽灭菌锅中，于 125 下灭菌 30min，灭菌完毕后，取出备用； c) 琼脂中加入纯净水，用微波炉加热并煮至完全溶解后，将其
7、倒入步骤（b）中已灭菌好的饲料 中，用手持搅拌机搅拌混匀，并冷却至 60左右备用； d) 将称好的抗坏血酸钠、尼泊金酯、山梨酸、胆固醇、氯化胆碱、威氏盐、复合维生素放入烧杯 中，用少量温开水溶解，然后将其倒入步骤（c ）中的饲料中，再加入 40%的甲醛，搅拌直至 完全均匀； e) 将搅拌好的饲料倒入无菌的保鲜盒中，完全冷却凝固后存放于 4冰箱中备用。 5.1.5 混毒人工饲料的配制方法 按上述方法制备人工饲料，在加入40%的甲醛并搅拌均匀后，在预先盛有30ml药液（含10（m/v） 的Triton-X 100（或吐温80）的烧杯中快速加入270g人工饲料，并用手持搅拌机充分搅拌混匀制得混 毒饲
8、料， 然后快速地用10ml移液器将混毒饲料分装至平底玻璃管 （直径3cm， 高5cm） 中， 饲料含量为8mL/ 管，然后塞上棉花塞，贴好标签，用橡皮筯按5管/组扎好，待其完全冷却凝固后存放于4冰箱中备用。 空白对照处理的饲料中，以不含药剂的30mL灭菌蒸馏水（含10（m/v）的 Triton-X 100（或吐温80） 代替药液，其余处理同混毒饲料。 5.2 药剂处理 将混毒饲料（或无毒饲料）挑入平底玻璃管中。然后将4龄初期幼虫挑入，虫量为10头/管，并把相 同浓度处理的玻璃管用橡皮筋扎好。将其置于温度281，相对湿度60%70%，光照比（L：D）16： 8hrs（下光照）的培养箱中。每个浓度
9、处理4次重复。 5.3 结果检查 DB36/ T 8822015 3 根据杀虫剂的作用特性分别于接虫后的48-144 hrs检查。菊酯类、有机磷类、大环内酯类药剂在药 后48 hrs检查；苯基吡唑类、酰胺类和沙蚕毒素类在药后96 hrs检查；昆虫生长调节剂类药剂在药后144 hrs检查。死亡判断标准为：以小毛笔或尖锐镊子轻触虫体，不能正常爬行者视作为死亡个体。 6 数据统计与分析 6.1 计算方法 根据调查数据，计算各处理的校正死亡率。按公式（1）和（2）计算，计算结果均保留到小数点后 两位： P1 = N K 100 .(1) 式中： P1 死亡率，单位为百分率（%）； K 表示死亡虫数，单
10、位为头； N 表示处理总虫数，单位为头。 P2 = 100 1 0 0 P PP t .(2) 式中： P2 校正死亡率，单位为百分率（%）； Pt 处理死亡率，单位为百分率（%）； P0 空白对照死亡率，单位为百分率（%）。 若对照死亡率20，试验需重做。 6.2 统计分析 采用SAS、EPA、POLO、BA、 DPS等统计分析系统软件的机率值分析法进行 统计分析，求出每个药剂 的毒力回归方程式、LC 50值及其95置信限、b值及其标准误。 7 抗性水平评估 7.1 二化螟敏感毒力基线的制定 二化螟抗性检测的敏感毒力基线见附录A。 7.2 抗性水平的分级标准 抗性水平的分级标准见表1 。 表
11、1 二化螟抗性水平的分级标准 抗性水平分级 抗性倍数 敏感 5.0 低水平抗性 5.110 DB36/ T 8822015 4 抗性水平分级 抗性倍数 中等水平抗性 10.1100 高水平抗性 100.1 7.3 抗性水平的计算与评估 根据敏感品系的LC 50值和测试种群的LC 50值，计算测试种群的抗性倍数。按下式计算，计算结果均保 留到小数点后一位： 抗性倍数=测试种群的LC 50/敏感品系的LC 50。 . (3) 按照抗性水平的分级标准，对测试种群的抗性水平作出评估。 8 检测报告编写 根据统计结果和抗性水平评估，写出正式抗性检（监）测报告，并列出原始数据。 DB36/ T 88220
12、15 5 A A 附 录 A （资料性附录） 部分杀虫剂对水稻二化螟的敏感毒力基线 部分杀虫剂对二化螟的敏感毒力基线见表A.1。 表A.1 部分杀虫剂对二化螟的敏感毒力基线 药剂 LD-P线 LC 50 (95%置信限) （mg a.i./Kg) 阿维菌素 Y=9.0687+2.4126X 0.0206(0.01690.0250) 杀虫单 Y=4.4854+2.7473X 1.54(1.321.79) 氯虫苯甲酰胺 Y=6.0179+2.8121X 0.4345(0.37460.5041) 氟虫双酰胺 Y=4.8056+1.4738X 1.355(1.0361.772) 甲氨基阿维菌素苯甲酸盐
13、 Y=12.8128+2.9423X 0.0022(0.00190.0026) 三唑磷 Y=5.303+2.9728X 0.7908(0.67640.9246) 毒死蜱 Y=5.1034+3.0929X 0.9259(0.7871.089) DB36/ T 8822015 6 B B 附 录 B （资料性附录） 二化螟人工饲料的组份及其配比 二化螟人工饲料各组份含量见表B.1，复合维生素B各组份含量见表B.2。 表B.1 二化螟人工饲料各组份含量(1000g 饲料) 饲料组份 重量（g） 饲料组份 重量（g） 大豆粉 45 抗坏血酸 4.35 酵母粉 30 胆固醇 0.30 干酪素 15 氯化胆碱 0.44 蔗糖 15 威氏盐 0.15 鲜茭白 145 复合维生素B 0.03 水 375 山梨酸 1.45 琼脂粉 16 泥泊金甲酯 1.45 水 300 40%甲醛 1.00 蒸馏水 50 表B.2 复合维生素 B 各组份含量 成份 每千克饲料含量（mg） 成份 每千克饲料含量（mg） 烟酰胺 152 叶酸 38 盐酸硫胺素 38 泛酸钙 152 核黄素 76 生物素 4 盐酸吡哆醇 38 氰钴胺素 1 _
