1、ICS 65.020.20 B 30 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 33012018 茶鲜叶中草铵膦残留量的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of glufosinate-ammonium residues in tea fresh leaves LC-MS/MS method 文稿版次选择 2018 - 12 - 29 发布 2019 - 01 - 29 实施 安徽省市场监督管理局 发布 DB34/T 33012018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫
2、标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽国泰众信检测技术有限公司、安徽农业大 学茶与食品科技学院、上海海关动植物与食品检验检疫技术中心。 本标准主要起草人：陈洪周、吕亚宁、侯如燕、胡艳云、韩芳、宋伟、丁磊、周典兵、胡亚蓉、肖 昱、邓晓军。 DB34/T 33012018 1 茶鲜叶中草铵膦残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了茶鲜叶中草铵膦残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于茶鲜叶中草铵膦残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期
3、的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样中的草铵膦经水超声提取，基质分散固相萃取后，用 9 - 芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)溶液进 行衍生化反应。 衍生物经液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲酸：色谱纯。 4.3 无水乙酸铵。 4.4 二氯甲烷。 4.5 硼酸钠（Na 2B4O710 H 2O）。 4.6 9- -芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl， CAS：28920-43-6)：纯度不低于
4、99.0， 于 4保存。 4.7 10.0 g/L FMOC-Cl 乙腈溶液：称取 1 .00 g FMOC-Cl，用乙腈溶解并定容至 100 mL。 4.8 50 g/L 硼酸盐缓冲溶液：称取 5.00 g 硼酸钠，用水溶解并定容至 100 mL。 4.9 基质分散固相萃取剂：25 mg 石墨化炭黑（Carbon-GCB）和 50 mg 交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)。 4.10 0.05甲酸水溶液：取 0.5 mL 甲酸，用水定容至 1000 mL。 4.11 草铵膦标准物质(Glufosinate ammonium， CAS 号： 77182-82-2， 分子式： C5H15N2O4P)
5、； 纯度97.9。 4.12 草铵膦标准储备溶液（1.0 mg/mL）：精确称取 50 mg 的草铵膦标准品，用少量水溶解，并用乙 腈定容至 50 mL，于 4保存。 4.13 草铵膦基质标准工作溶液：根据需要，临用时吸取一定量的标准中间溶液（4.11），用空白基质 溶液稀释成适当浓度的基质标准工作溶液。 4.14 水相滤膜：0.22 m。 DB34/T 33012018 2 5 仪器和设备 5.1 液相色谱串联四级杆质谱仪或相当者，配电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量为 0.01 g。 5.3 旋涡混合器。 5.4 离心机。 5.5 超声波仪。 5.6 粉碎机。 6 试样制备与
6、保存 6.1 将样品放入组织捣碎机中粉碎，装袋置于冷冻状态下保存，并标明标记。 6.2 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量变化。 6.3 茶鲜叶采摘后应于 -20以下保存，并尽快进行检测。 7 测定步骤 7.1 提取 称取粉碎均匀的样品 2.5 g（精确到 0.01 g）于具塞离心管中，加入 8 mL 纯水涡旋混匀 2 min， 超声 15 min，以 8000 r/min 离心 5 min，取上清液于 10 mL 容量瓶中，加水定容至刻度。移去 6 m L 样液至试管中，加入 2 mL 二氯甲烷，涡旋 2 min ，以 8000 r/min 离心 5 min。取上清液，待净化。
7、 7.2 净化 移取上清液 2 mL 置于 5 mL 离心管中，加入制备好的分散固相萃取剂（4.9），涡旋振荡 2 min， 8000 r/min 离心 5 min。取上清液，待衍生。 7.3 衍生 取 1.0 mL 基质标准工作溶液和净化后样液，加入 1 mL 硼酸盐缓冲溶液（4.8），混匀，再加入 1 mL FMOC-Cl乙腈溶液混匀，于室温下放置 4 h。将衍生化后的溶液以 80 00 r/min 离心 5 min，取上清 液过 0.22 m 亲水性滤膜，供液相色谱串联质谱测定。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱参考条件 7.4.1.1 液相色谱柱： C18 柱，2.1 50 mm（内
8、径），1.8 m，或相当者； 7.4.1.2 流动相：参见附录 A 中表 A.1； 7.4.1.3 流速：0.3 mL/min。 7.4.1.4 柱温：30。 7.4.1.5 进样体积：10 L。 7.4.2 质谱参考条件 7.4.2.1 离子模式：电喷雾离子源（ESI）； 7.4.2.2 扫描方式：正离子扫描； DB34/T 33012018 3 7.4.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）； a) 使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求； b) 电喷雾电压、雾化气压力、离子源温度、干燥气流速、定性离子对、定量离子、碎裂电压（FP） 和碰撞气能量（CE）等参数应优化至最优灵敏度，
9、参考条件见表 A.2 和表 A.3。 7.4.3 定量测定 取空白样品按照 7.1 和 7.2 处理，配制适用浓度的基质匹配标准工作液，按浓度由低到高进样检 测，以定量子离子峰面积-浓度作图，得到基质匹配标准曲线。在上述色谱条件下，草铵膦参考保留时 间为 5.88 min。其色谱行为参见附录中图B。 待测样液中草铵膦的响应值应在标准曲线线性范围内， 超过线性范围则应稀释至相应范围内再进样 分析。 7.4.4 定性确认 在相同实验条件下， 试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的标准物质保留时间偏差在 2.5之内；在试样谱图中所选择的待测物离子对均出现，且相对丰度与标准工作溶液中定性离子的
10、 相对丰度允许偏差不超过表1 规定的范围时，则可确定为样品中存在相应的目标化合物。 表1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 50 20至50 10至20 10 允许的相对偏差 20 25 30 50 8 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 9 结果计算 测定结果按式（1）计算： mA VCA X S . (1) 式中： X 草铵膦残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A 样液中草铵膦峰面积； C 基质标准工作溶液中草铵膦的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； V 样液定容体积，单位为毫升（mL）； AS 标准工作溶液中草铵膦峰面积； m 试样的质量，单位为克（g
11、）。 注： 计算结果应扣除空白值，结果保留三位有效数字。 10 定量限限和回收率 10.1 测定低限 DB34/T 33012018 4 本标准中草铵膦测定低限为 0.040 mg/kg。 10.2 回收率 茶鲜叶中草铵膦不同添加水平的平均回收率数据参见附录C。 DB34/T 33012018 5 A A 附 录 A （资料性附录） 流动相 表A.1 液相色谱流动相梯度 时间 （min） 乙腈 0.05甲酸水 0 10 90 3.00 90 10 7.00 90 10 7.01 10 90 12.00 10 90 表A.2 质谱参考条件 电喷雾电压 4000V 雾化气电压 40 psi 离子源
12、温度 300 干燥气流速 10 L/min 表A.3 草铵膦的定量离子对、定性离子对 FP、CE 定性离子对 定量离子对 FP （V） CE （V） 404.2/208.2 404.2/136.2 404.2/208.2 96 96 16 31 DB34/T 33012018 6 B B 附 录 B （资料性附录） 色谱图 图B.1 20 g/L 草铵膦标准溶液多反应监测色谱图 DB34/T 33012018 7 C C 附 录 C （资料性附录） 回收率数据 表C.1 回收率数据 样品名称 添加浓度 （mg /kg） 回收率范围 （） 茶鲜叶 0.04 87.6102.5 0.50 89.3106.8 2.5 92.8101.0 _
