1、ICS 65.020 B 16 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 31272018 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治 技术规程 Technical regulation for pathogen detection and disease control of Root-knot nematode disease on Trichosanthes kirilowii 文稿版次选择 2018 - 04 - 16 发布 2018 - 05 - 16 实施 安徽省质量技术监督局 发布 DB34/T 31272018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由
2、潜山县植物检疫保护站提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：潜山县植物检疫保护站、安徽农业大学植物保护学院。 本标准主要起草人：吴彩玲、吴慧平、徐劲峰、鞠玉亮、黄为民、吴彩萍、李武伦、朱松涛、吴智。 DB34/T 31272018 1 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术规程 1 范围 本标准规定了瓜蒌根结线虫病的症状识别、病原物鉴定、防治原则和防治措施等方面的内容。 本标准适用于安徽省瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（
3、包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 DB34/T 882 食用栝楼栽培技术规程 3 症状识别 3.1 在瓜蒌田间查找生长缓慢、矮化、黄化的瓜蒌植株，拔起植株观察根系，如根系上出现根结、须 根团，可初步判断为根结线虫病危害，区别于缺水缺肥症状。撕开根结处表皮，如发现针尖大小白色小 点，即为根结线虫雌虫，区别于根肿病、根癌病。 3.2 根部症状可参照附录 A 进行判断。 4 病原物鉴定 4.1 形态学鉴定 根结线虫的形态学鉴定基于二龄幼虫和雌虫的形态及其测计值，具体流
4、程如下： 用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块，25处理 24 h 孵化二龄幼虫，此外，用挑针剥离根结处雌虫。 在显微镜下观察二龄幼虫和雌虫形态， 并对其主要形态进行测计， 测计值需遵循 De Man 公式。 根结线虫二龄幼虫和雌虫的形态描述参照附录B，测计值参照附录C，根据形态及其测计值即可判断 是否为根结线虫。 4.2 分子生物学鉴定 根结线虫分子生物学鉴定基于单条二龄幼虫或雌虫，具体流程如下： 用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块，25处理 24 h 孵化二龄幼虫，或用挑针剥离根结处雌虫。 将单条二龄幼虫置于含 8 L ddH2O 和 1 L 10 Ex Taq Buffer（Mg 2+ free）的 20
5、0 L PCR 管中；液氮中处理 1 min，95处理 2 min，重复三次；向 PCR 管中加入 1 L 1 mg/mL 蛋 白酶 K，65温育 1 h 后，95处理 10 min。 所得单条线虫 DNA 用于下游的 PCR 检测试验。 DB34/T 31272018 2 以 单 条 根 结 线 虫 DNA 为 模 板 ， 用 南 方 根 结 线 虫 特 异 性 SCAR 标 记 检 测 引 物 （ Mi-F ： GTGAGGATTCAGCTCCCCAG， Mi-R： ACGAGGAACATACTTCTCCGTCC）进行 PCR 检 测。 PCR 扩增程序：94 4 min；94 30 s，
6、58 30 s；72 1 min，35 个循环；72 10 mi n。 PCR 产物经 1.5琼脂糖凝胶电泳检测， 根据 PCR 产物片段大小进行判断， 若扩增片段为 955 bp， 则为南方根结线虫。 扩增片段大小参见附录E。 5 防治原则 5.1 按照 “预防为主，综合防治 ”的方针，以农业防治和健身栽培为基础，采取农业防治、物理防治、 生物防治与化学防治相结合的防治策略。 5.2 减少化学农药使用，并按照 GB/T 8321 和 NY/T 1276 的规定执行。 6 防治措施 6.1 农业防治 6.1.1 无病种苗培育 6.1.1.1 选择不携带根结线虫的种子和块根做繁殖材料。 6.1.
7、1.2 选择土层深厚、土质疏松、肥力充足、排灌方便，未发生过根结线虫病害的田块培育幼苗。 6.1.2 新栽田块的防治方法 6.1.2.1 选择土层深厚、土质疏松、肥力充足、排灌方便、未发生过根结线虫病害的田块进行种植。 6.1.2.2 使用无病种苗，起垄种植，垄高不低于 40 cm，垄间距离约 100 cm，排水沟深约 50 cm，栽 培措施应符合 DB34/T 882 的规定，移栽前进行土壤消毒。 6.1.3 已发病田块的控制措施 6.1.3.1 秋季深耕翻晒、夏季高温薄膜封闭，有条件田块可采用冬季灌深水 2 周以上。 6.1.3.2 增施有机肥： 每年 12 月翌年 2 月， 按每 667
8、 m 2 沟施经无害化处理后的油菜籽饼肥 1240 kg， 施肥深度大于 20 cm，田间水肥管理应符合 NY/T 496 的规定。 6.2 物理防治 播种前，用 55热水处理瓜蒌种子 3 min5 min，或 55热水浸泡块根 10 min，处理后及时摊 凉。 6.3 生物防治 6.3.1 瓜蒌移栽定植时，按每 667 m 2 穴施 100 亿活孢子/g 淡紫拟青霉颗粒剂 1 kg，定植后 60 天结合 浇水灌根每 667 m 2 补施 2 kg。 6.3.2 瓜蒌移栽定植时，按每 667 m 2 施用蜡质芽孢杆菌 1 kg，定植后 60 天结合浇水穴施或灌根每 667 m 2 补施 1 k
9、g。 6.3.3 利用茼蒿趋避根结线虫：每年 3 月4 月、7 月8 月，在瓜蒌行间按每 667 m 2 播撒茼蒿种子 1 kg，覆盖 5 cm10 cm 土层，距离瓜蒌茎基部 15 cm 以外范围均可播撒。 DB34/T 31272018 3 6.3.4 利用万寿菊矮生种趋避根结线虫： 每年 3 月4 月， 在瓜蒌行间播撒万寿菊矮生种， 覆盖 5 cm 10 cm 土层，距离瓜蒌茎基部 15 cm 以外范围均可播撒，成株可旋翻入土，做绿肥。 6.4 化学防治 6.4.1 防治适期 3 月中下旬进行化学防治，6 月上旬可适当防治一次。同种药剂防治次数不宜超过两次。 6.4.2 防治方法 6.4
10、.2.1 按每 667 m 2 拌土沟施或环施 1.0阿维菌素颗粒剂 2 kg3 kg，施药深度 15 cm 左右。 6.4.2.2 瓜蒌移栽后 7 天15 天，每株用 41.7氟吡菌酰胺悬浮剂 0.3 mL0.5 mL 灌根，或每 667 m 2 用量 30 mL50 mL，根据土壤湿润情况适当稀释，用水量不低于 2000 mL/株。 6.4.2.3 移栽前，按每 667 m 2 施 10噻唑膦 1.5 kg2.0 kg，施药深度 15 cm20 cm，施药当日定 植。 DB34/T 31272018 4 A A 附 录 A （资料性附录） 瓜蒌根结线虫病田间危害症状 瓜蒌根结线虫病田间危害
11、症状见图A.1。 图A.1 DB34/T 31272018 5 B B 附 录 B （资料性附录） 根结线虫雌虫（1）和二龄幼虫（2）形态 根结线虫雌虫（1）和二龄幼虫（2）形态见图B.1。 图B.1 DB34/T 31272018 6 C C 附 录 C （资料性附录） 南方根结线虫形态描述 二龄幼虫 ：温热杀死后体直或略弯曲，中前部宽，向两端变细。头冠明显，前端平，头区与虫体界 限不明显。口针纤细，椎体和基杆的界限不明显，口针基部球小。中食道球椭圆形，瓣门明显，排泄孔 在中食道球后方约 25 m。尾较长，透明尾末端界限不明显，透明尾有弯曲或不明显缢缩。尾尖尖圆或 钝圆。 雌虫 ：虫体呈珍珠
12、白色，梨形，颈较短，与虫体分界不明显。头冠窄，头区环纹不明显，口针椎体 尖端钝尖，向后逐渐变粗。口针基杆圆柱形，向后略加粗，口针基部球多为扁球形，纵向窄，横向宽， 基部球前缘平，与基杆界限明显。背食道腺开口距口针基部球的距离中等；中食道球近球形，瓣门明显， 亚腹食道腺开口于瓣门后方。排泄孔位置靠前，其到头端的距离接近口针长度的 2 倍，不同个体排泄 孔的位置变化较大。会阴花纹背弓高，为长方形或梯形，线纹稀疏，较粗，出现不连续的波浪。阴门与 肛门之间无线纹。 DB34/T 31272018 7 D D 附 录 D （资料性附录） 南方根结线虫形态测计值 表D.1 测量值 长度单位： m N 标
13、本 数 S t 口针 长度 DGO 背食道 腺开口 到口针 基本球 的距离 VA 阴门至 肛门的 距离 VL 阴门 宽度 L 体长 W 虫体 宽度 TL 尾长度 TTL 透明尾 长度 A 体长/最 大体宽 C 体长/ 尾长 雌 虫 1 5 2.20 （2.00 2.50） 19.8 （14.8 21.0） 21.1 （16.2 24.2） 2 龄 幼 虫 5 11.3 （10.3 11.9） 317.0 （301.0 360.0） 13.9 （12.7 15.0） 52.4 （40.0 58.0） 9.8 （5.0 12.6） 29.0 （26.7 32.1） 5.0 （4.2 6.8） 注： 表中英文字母为 De Man 公式符号。 DB34/T 31272018 8 E E 附 录 E （资料性附录） 南方根结线虫 PCR 扩增片段 南方根结线虫 PCR 扩增片段见图E.1。 图E.1 _
