1、ICS 65.020 B 30 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 28222017 植物源产品中 22 种三唑类杀菌剂残留量的 测定 液相色谱串联质谱法 Determination of 22 triazole pesticides residues in plant products LC-MS/MS method 文稿版次选择 2017 - 03 - 30 发布 2017 - 04 - 30 实施 安徽省质量技术监督局 发布 DB34/T 28222017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽
2、省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、阜阳市食品药品检验中心。 本标准主要起草人：胡艳云、周典兵、吕亚宁、伊芳、韩芳、丁磊、宋伟、盛旋、郑平。 DB34/T 28222017 1 植物源产品中 22 种三唑类杀菌剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了植物源产品中 22 种三唑类杀菌剂残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。 本标准适用于茶叶、大米、燕麦、苹果、柑橘、大白菜和胡萝卜中粉唑醇、三唑醇、腈菌唑、氟环 唑、三唑酮、戊唑醇、氟喹唑、氟硅唑、己唑醇、戊菌唑、叶菌唑、烯唑醇、苯醚甲环唑、亚胺唑、环 丙唑醇、硅氟唑、糠菌唑、四氟醚
3、唑、联苯三唑醇、腈苯唑、丙环唑、氟菌唑残留量的测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 样品中的三唑类杀菌剂残留采用丙酮-乙酸乙酯-正己烷混合溶剂提取，提取液经过 TPT 萃取小柱 净化，液相色谱-串联质谱法测定，同位素内标法定量。 4 试剂和材料 4.1 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 丙酮：色谱纯。 4.3 乙酸乙酯：色谱纯
4、。 4.4 正己烷：色谱纯。 4.5 氯化钠。 4.6 无水硫酸钠：650灼烧 4 h，冷却后储于密封容器中备用。 4.7 TPT 固相萃取柱：500 mg，3 mL 或相当者。 4.8 22 种三唑类标准物质及内标物质：纯度大于 96。 4.9 标准储备液的配制：分别准确称取适量的每种标准物质，用乙腈配制成浓度为 1000 mg/L 的标准 储备液。在 0-4冰箱中可以保存 12 个月。 4.10 同位素内标标准储备液的配制：分别准确称取 D6-戊唑醇、D5-丙环唑标准品，用乙腈配制成浓 度为 1000 mg/L 的标准储备液。在 0-4冰箱中可以保存 12 个月。 4.11 混标中间工作液
5、的配制：分别准确移取一定体积的每种标准储备液，用乙腈稀释成适当浓度的混 合标准中间工作液。在 0-4冰箱中可以保存 6 个月。 4.12 同位素内标混合中间工作液的配制：分别准确移取一定体积的同位素内标混合中间工作液，用乙 腈稀释成浓度约为 100 g/L，在 0-4冰箱中可以保存 6 个月。 DB34/T 28222017 2 4.13 混标工作液的配制： 分别准确移取一定体积的混合标准中间工作液和混合同位素内标中间标准溶 液，根据需要用乙腈稀释成适当浓度的混合标准工作液。每毫升该混合标准工作溶液中含有同位素内标 D6-戊唑醇和 D5-丙环唑各 5.0 ng。在 0-4冰箱中可以保存 3 个
6、月。 4.14 混合同位素内标工作液：准确移取一定体积的混合同位素内标中间工作液，用乙腈稀释成含 D6- 戊唑醇和 D5-丙环唑浓度为 50.0 g/L 的内标工作溶液。 4.15 0.22 m 滤膜。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪-质谱/质谱仪：三重四级杆质谱检测器，配电喷雾离子源（ESI）或相当者。 5.2 分析天平：感量 0.01 g。 5.3 粉碎机。 5.4 均质器。 5.5 离心机：转速 3000 r/min 以上。 5.6 旋转蒸发仪。 5.7 固相萃取装置，带真空泵。 5.8 氮吹仪。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 从原始样品中取出有代表性样品约 500 g，
7、用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁 净容器作为试样，密封，并标明标记。 6.2 试样保存 将试样置于 -18以下冷冻避光保存。 7 分析步骤 7.1 提取方法 茶叶、大米、燕麦：称取 2 g（准确至 0.01 g）试样，于 50 mL 离心管内，加入 6 mL 水，放置 1 h。 苹果、柑橘、大白菜、胡萝卜：称取 2 g（准确至 0.01 g）试样，于50 mL离心管内。 在离心管内加入 100 L 内标液 4.13，5 g 无水硫酸钠，10 mL 丙酮+乙酸乙酯+正己烷（1+2+1）， 均质提取 2 min 后，以 3000 r/min 的速度离心 5 min，将上清液转移至梨
8、形浓缩瓶中。在离心管中 再加入 10 mL 提取液，按照上述同样操作，将上清液合并于梨形浓缩瓶中，在 40水浴旋转蒸发近干。 用 2*2.5 mL 正己烷洗涤浓缩瓶 2 次，待净化。 7.2 净化方法 固相萃取（SPE）净化 使用前，用 5 mL 乙腈+甲苯（3+1）预淋洗固相萃取柱， 将 7.1 待净化液加入 TPT 固相萃取柱中， 以约 2.0 mL/min 的流速收集流出液，再用 5 mL 乙腈+甲苯（3+1）洗涤梨形浓缩瓶，过固相萃取柱。 DB34/T 28222017 3 收集全部流出液于玻璃试管内，于 40吹氮浓缩至近干，用 1.0 mL 乙腈+水（1+1）振荡溶解残渣后 过 0.
9、22 m 滤膜，滤液供液相色谱-串联质谱仪测定。 7.3 净化方法 7.3.1 液相色谱参考条件 条件如下： a) 色谱柱：C18，3.5 m，150 mm 2.1 mm 或相当者； b) 流动相：乙腈+10 mM 乙酸铵； c) 流速：200 L/min； d) 柱温：40； e) 进样量：10 L； f) 流动相梯度洗脱条件见表 1。 表1 流动相梯度洗脱条件 时间 （min） 流速 （mL/min） B (10 mM 乙酸铵) A (乙腈) 0 0.20 90 10 5.00 0.20 50 50 15.00 0.20 35 65 25.00 0.20 5 95 25.10 0.20 9
10、0 10 35.00 0.20 90 10 7.3.2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应检测（MRM）； d) 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求；（详细条件参见附录 A） e) 喷雾电压（IS）、雾化气压力（GS1）、气帘气压 力（CUR）、辅助气流速（GS2）、去簇电压 （DP）、碰撞气能量（CE）等电压值应优化至最优灵敏度，参考条件和定性离子对、定量离子 见附录 A。 7.3.3 液相色谱-串联质谱检测及确证 按照确定的液相色谱-串联质谱
11、条件测定样品和标准工作溶液，响应值均应在仪器检测的线性范围 内，以色谱峰面积按内标法定量，A 组以氘代戊唑醇 (D6 )为内标物，B 组以氘代丙环唑 D5 为内标， 如果残留量超出标准曲线范围，应进行适当稀释。在上述色谱条件下三唑类杀菌剂的参考保留时间见附 录B，标准溶液的 MRM 质谱图见附录B. 在相同实验条件下， 试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差在 2.5 之内；且在扣除背景后的试样谱图中，所选择的离子对均出现，同时三唑类定性离子的相对丰度与标准 工作溶液中定性离子的相对丰度允许偏差不超过表2 规定的范围时， 则可确定为样品中存在三唑类杀菌 剂残留。 DB34/
12、T 28222017 4 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 50 20至 50 10至 20 10 允许的相对偏差 20 25 30 50 7.3.4 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 7.3.5 结果计算 试样中三唑类杀菌剂残留量按公式(1)计算： mS VCS X 2 . (1) 式中： X 试样中三唑类杀菌剂残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)； S 样液中三唑类杀菌剂峰面积和内标物峰面积之比（或峰高）； C 标准工作溶液中三唑类的浓度，单位为微克每毫升(mL)； V 样液定容体积，单位为毫升(mL)； S 标准工作溶液中三唑类峰面积和内标物峰面积之比（或
13、峰高）； m 试样的质量，单位为克(g)； 2 稀释因子。 注： 计算结果需将空白值扣除。 8 测定低限、回收率 8.1 测定低限 本方法茶叶中三唑类杀菌剂残留量的测定低限见附录C。 8.2 回收率 样品的添加浓度及回收率数据见附录D。 DB34/T 28222017 5 A A 附 录 A （资料性附录） 液相色谱-串联质谱仪器参数参考条件 监测离子对及电压参数： a) 电喷雾电压（IS）：5500 V； b) 雾化气压力（GS1）：60 Psi； c) 气帘气压力（CUR）：20 Psi； d) 辅助气流速（GS2）：60 Psi； e) 离子源温度（TEM）：450； f) 碰撞气（CA
14、D）：Medium； g) 定性离子对、定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）、碰撞气能量（CE）、碰 撞室出口电压（CXP）、见表 A.1。 表A.1 三唑类杀菌剂的定性离子对、定量离子对、DP、CE、EP、CXP A 组 中文名 英文名 定量离子 m/z 定性离子 m/z DP EP CE CXP 粉唑醇 flutriafol 302.3/123.0 302.3/109.0 60 10 40,40 12,12 三唑醇 triadimenol 296.2/70.1 296.2/99.2 60 10 31，24 11，8 腈菌唑 myclobutanil 289.1/70.1 2
15、89.1/125 60 10 50,40 8,8 氟环唑 epoxiconazole 330.1/121.1 330.1/141.1 60 8 32,23 12,12 三唑酮 triadimefon 294.2/197.1 294.2/225.0 60 10 23,20 12,10 戊唑醇 tebuconazole 308.2/70.1 308.2/125.2， 308.2/151.0 75 10 40,40,35 10,11,8 氟喹唑 fluquinconazole 376.3/349.0 376.3/307 80 8 27,37 12,12 氟硅唑 flusilazole 316.1/1
16、65.1 316.1/247.1 80 8 37,28 10,10 已唑醇 hexaconazole 314.1/70.1 314.1/159.2 80 10 50，45 10，10 戊菌唑 penconazole 284.3/70.0 284.3/159.0 70 10 30,37 10, 8 叶菌唑 metconazole 320.3/70.1 320.3/125.1 40 10 50,55 8,8 烯唑醇 diniconazole 326.1/70.1 326.1/158.9 80 8 45,40 10,10 苯醚甲环唑 difenoconazole 406.2/251.0 406.2/
17、337.0 87 10 35,25 10,10 亚胺唑 imibenconazole 413.2/125.0 413.2/343.8 85 10 40,25 8,8 氘代戊唑醇(D6) d-tebuconazole 314.2/72.1 314.2/125.0, 314.2/154.0 70 10 45,50,35 12,11,9 B 组 环丙唑醇 cyproconazole 292.2/70.2 292.2/125 90 10 40，45 12，12 硅氟唑 simeconazole 294.2/70.1 294.2/135.1 70 10 40,30 12,12 糠菌唑 bromucona
18、zole 378.1/159.1 378.1/173.0， 378.1/227.0 70 10 40,40,25 10,11， 12 DB34/T 28222017 6 表 A.1（续） 中文名 英文名 定量离子 m/z 定性离子 m/z DP EP CE CXP 四氟醚唑 tetraconazole 372.2/159.0 372.2/185.0, 372.2/150.0 80 10 42,34,45 10,12,14 联苯三唑醇 bitertanol 338.2/269.2 338.2/99.2 50 10 13，20 8，8 腈苯唑 Fenbuconazole 337.2/125.1 3
19、37.2/70.1 90 10 45,55 12,12 丙环唑 propiconazole 342.2/159.1 342.2/187.0, 342.2/205.1 65 10 36,36,32,26 9, 10, 12 氟菌唑 triflumizole 346.1/278.1 346.1/220.0, 346.1/248.0 50 10 16,23,25 12,14,15 氘代丙环唑 D5 d-propiconazole 347.2/159.0 347.2/187.0, 347.2/206.0 80 10 40, 32,27 10, 12,12 非商业性声明：附录A 所列参数是使用 API
20、4000 质谱仪完成的，此处所列试验用仪器型号仅是为 了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。 DB34/T 28222017 7 B B 附 录 B （资料性附录） 三唑类标准品 MRM 多反应监测色谱图 三唑类标准品 MRM 多反应监测色谱图 DB34/T 28222017 8 DB34/T 28222017 9 DB34/T 28222017 10 DB34/T 28222017 11 C C 附 录 C （资料性附录） 三唑类标准品检出限和保留时间 表C.1 三唑类标准品检出限和保留时间 序号 中文名 保留时间 定量限 （mg/kg） 线性范围 （mg/L
21、） 1 粉唑醇 13.01 0.003 0.003-0.3 2 三唑醇 15.02，15.50 0.004 0.004-0.4 3 腈菌唑 15.54 0.004 0.004-0.4 4 氟环唑 16.74 0.001 0.001-0.1 5 三唑酮 17.02 0.002 0.002-0.2 6 戊唑醇 17.29 0.003 0.003-0.3 7 氟喹唑 17.48 0.025 0.025-0.3 8 氟硅唑 17.75 0.002 0.002-0.2 9 已唑醇 18.13 0.003 0.003-0.3 10 戊菌唑 18.33 0.003 0.003-0.3 11 叶菌唑 18.5
22、2 0.003 0.003-0.3 12 烯唑醇 19.06 0.005 0.005-0.5 13 苯醚甲环唑 20.48 0.002 0.002-0.2 14 亚胺唑 23.90 0.003 0.003-0.3 15 环丙唑醇 16.62 0.002 0.002-0.2 16 硅氟唑 16.21 0.001 0.001-0.1 17 糠菌唑 16.50，17.51 0.004 0.004-0.4 18 四氟醚唑 17.25 0.002 0.002-0.2 19 联苯三唑醇 18.11，18.61 0.004 0.004-0.4 20 腈苯唑 18.09 0.004 0.004-0.4 21
23、丙环唑 19.15 0.003 0.003-0.3 22 氟菌唑 21.52 0.001 0.001-0.1 DB34/T 28222017 12 D D 附 录 D （资料性附录） 三唑类杀菌剂的添加水平及回收率数据 表D.1 三唑类杀菌剂的添加水平及回收率数据 杀菌剂 添加水平 茶叶 苹果 胡萝卜 大米 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD 粉唑醇 0.005 77.7 10.3 82.1 7.2 79.0 6.8 75.1 8.4 0.01 84.0 8.0 86.3 7.6 78.8 9.3 79.1 7.5 0.05 84.7 7.2 87.3 7.1 82
24、.8 13.7 83.8 9.6 三唑醇 0.005 78.8 5.4 84.3 10.3 95.1 13.5 78.5 7.8 0.01 86.3 8.3 88.8 9.9 93.9 8.2 77.7 7.3 0.05 87.3 11.4 92.3 6.7 91.2 5.6 81.0 9.7 腈菌唑 0.005 84.0 6.7 84.7 8.6 88.6 12.7 79.6 6.3 0.01 85.2 8.7 88.6 8.4 88.7 10.8 81.6 3.8 0.05 90.1 5.3 91.5 7.5 86.0 10.0 83.8 6.1 氟环唑 0.005 82.3 4.7 81
25、.1 8.2 81.4 13.2 78.2 8.0 0.01 85.1 4.2 84.2 7.9 87.8 11.9 80.9 5.6 0.05 90.8 3.6 84.9 9.1 92.8 9.1 84.9 5.8 三唑酮 0.005 83.1 5.1 84.5 10.2 85.8 14.5 76.2 8.5 0.01 87.0 6.4 86.5 10.8 86.6 13.3 81.3 11.6 0.05 86.1 7.1 90.6 7.5 89.0 7.5 82.9 9.3 戊唑醇 0.005 97.8 2.2 97.5 4.0 99.8 6.1 98.9 9.1 0.01 98.4 3.
26、5 99.5 3.6 97.2 3.9 97.7 3.4 0.05 100.0 3.7 99.1 4.6 97.4 2.4 98.1 3.5 氟喹唑 0.025 83.0 11.4 80.6 10.0 91.8 10.6 80.5 10.9 0.05 85.7 8.3 85.8 8.5 101.0 6.3 77.7 7.5 0.25 87.0 5.4 85.6 8.2 94.6 5.9 83.4 5.0 氟硅唑 0.005 84.7 5.4 85.4 10.2 83.9 12.3 77.5 7.7 0.01 86.1 7.0 86.4 5.0 87.4 14.7 82.8 6.5 0.05 8
27、5.8 7.7 88.2 10.0 90.9 15.0 85.9 6.6 已唑醇 0.005 93.5 6.1 91.1 8.0 93.9 10.0 89.0 11.9 0.01 94.8 6.4 96.2 7.2 96.0 9.9 90.3 10.0 0.05 96.6 5.4 96.7 5.2 87.0 7.1 91.7 12.0 戊菌唑 0.005 88.6 7.9 84.8 8.8 97.2 10.0 87.8 14.3 0.01 91.4 7.1 91.2 6.6 93.3 8.3 85.4 14.1 0.05 92.5 5.4 90.9 8.4 94.0 6.4 92.9 10.2
28、 DB34/T 28222017 13 叶菌唑 0.005 77.4 7.3 89.9 6.8 81.7 9.3 86.1 13.0 0.01 81.6 7.2 91.7 7.7 81.2 7.0 89.7 14.3 0.05 84.1 8.1 85.4 8.2 85.4 12.2 92.0 4.0 烯唑醇 0.005 82.7 4.9 79.0 12.5 81.2 10.5 79.5 8.9 0.01 83.7 8.3 82.6 6.6 82.4 10.2 80.1 6.3 0.05 88.7 3.7 84.6 11.2 81.4 11.7 82.9 9.1 苯醚甲环唑 0.005 92.1
29、 12.1 88.7 10.3 89.4 11.4 87.4 11.6 0.01 92.8 8.6 91.1 8.0 96.2 7.6 95.1 8.5 0.05 98.0 6.0 102.0 3.4 96.0 6.1 93.7 6.9 亚胺唑 0.005 95.8 9.9 89.6 9.0 90.6 5.1 93.1 12.5 0.01 93.2 8.6 90.7 8.0 93.1 8.0 87.9 10.7 0.05 98.6 3.4 92.9 7.7 94.3 7.8 95.0 7.2 环丙唑醇 0.005 75.3 7.7 74.2 7.1 79.9 10.9 78.8 6.6 0.0
30、1 76.9 8.0 77.1 6.3 81.6 8.3 81.6 11.4 0.05 80.8 7.9 78.9 6.4 83.2 8.8 82.3 7.0 糠菌唑 0.005 76.0 7.5 80.7 4.9 87.4 14.8 80.7 4.5 0.01 77.7 10.3 83.9 10.5 87.4 5.1 81.8 7.9 0.05 82.1 4.9 85.4 10.2 98.3 8.2 80.4 10.8 四氟醚唑 0.005 79.0 5.7 82.6 9.8 93.7 10.7 95.5 7.6 0.01 87.4 4.9 85.8 8.6 93.4 9.2 92.3 8.
31、6 0.05 87.3 6.5 87.3 6.1 105.4 3.0 87.2 4.6 联苯三唑醇 0.005 87.4 10.5 88.4 9.3 91.0 10.4 89.5 7.6 0.01 86.5 9.9 92.2 10.2 97.1 7.6 89.0 8.5 0.05 92.9 10.2 94.8 7.0 96.1 4.8 93.1 10.2 腈苯唑 0.005 84.9 13.1 90.0 8.2 87.8 13.4 84.0 12.6 0.01 91.6 10.0 89.6 8.7 84.1 12.5 95.1 9.9 0.05 93.4 9.0 91.6 8.4 92.3 12.2 93.4 13.9 丙环唑 0.005 99.0 3.0 96.6 5.0 96.4 3.4 97.7 4.0 0.01 98.0 3.6 97.2 3.3 98.9 3.9 98.5 3.0 0.05 96.1 3.2 98.6 2.3 97.6 4.3 98.1 3.9 氟菌唑 0.005 91.6 9.3 85.5 9.7 83.5 9.9 79.7 11.7 0.01 92.5 6.8 91.4 12.6 86.3 9.7 83.7 9.2 0.05 94.1 5.9 91.5 13.0 93.9 6.1 75.1 8.4 _
