1、ICS 67.040 C 53 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 27772016 大米中肟菌酯残留量的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of trifloxystrobin residue in rice by UPLC-MSMS 文稿版次选择 2016 - 12 - 30发布 2017 - 01 - 30实施 安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 27772016 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起
2、草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风 险评估实验室（合肥）、安徽省畜牧技术推广总站、池州市农产品质量安全监测中心、安徽科立特农药 环境科技评价有限公司、繁昌县植保站。 本标准起草人：段劲生、孙明娜、高同春、李瑞、王梅、董旭、肖青青、褚玥、许四五、吴爱美、 彭卫兵、朱玉杰、杨通。 DB34/T 27772016 1 大米中肟菌酯残留量的测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了大米中肟菌酯残留量的液相色谱串联质谱法。 本标准适用于大米中肟菌酯及其代谢物肟菌酸残留量的测定。 本标准的方法检出限为 0.05 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对
3、于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复性与 再现性的基本方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用水和含甲酸的乙腈混合溶液提取后，经基质固相分散萃取技术净化，用超高效液相色谱反相 分离，三重四杆质谱仪测定，外标法定量。 4 试
4、剂与材料 4.1 水为 GB/T 6682 规定的二级水 。以下凡是无特殊注明的试剂均为分析纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙腈。 4.4 乙腈：色谱纯。 4.5 甲酸。 4.6 甲酸：色谱纯。 4.7 氯化钠。 4.8 无水硫酸镁。 4.9 C18吸附剂。 4.10 无水醋酸铵：色谱纯，纯度99。 4.11 肟菌酯标准品：纯度99。 4.12 代谢物肟菌酸标准品：纯度99。 4.13 0.22m微孔过滤膜 DB34/T 27772016 2 4.14 标准溶液 肟菌酯标准储备液：准确称肟菌酯 0.0100 g，置于 10.0 mL 容量瓶中，色谱甲醇溶解并定容 至刻度，配置成浓度为 1
5、000 g/mL储备液，于 05下避光保存。 代谢物肟菌酸标准储备液：准确称肟菌酸 0.0100 g，置于 10.0 mL 容量瓶中，色谱甲醇溶解 并定容至刻度，配置成浓度为 1000 g/mL储备液，于 05下避光保存。 肟菌酯及其代谢物肟菌酸混合标准工作液：分别取1000 g/mL肟菌酯储备液和1000 g/mL 代谢物肟菌酸储备液，用色谱乙腈稀释，配成质量浓度分别为2.0 g/mL、1.0 g/mL、0.5 g/mL 、0.1 g/mL、0.05 g/mL和0.005 g/mL的标准工作溶液，待用。 标准工作液需现配现用。 5 主要仪器和设备 5.1 超高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾
6、（ESI）离子源。 5.2 汽浴恒温振荡器。 5.3 旋转蒸发仪。 5.4 涡旋装置。 5.5 离心机：水平转子，转速不低于5000 r/min。 5.6 电子天平：感量0.1 g和0.1 mg。 6 分析步骤 6.1 试样的制备与贮藏 按照 GB 5491 的规定将不少于 1000 g 大米（已脱壳）混匀，四分法取样，放入食品加工机粉碎， 过 20 目筛，制成试样，放入试样瓶中密封，做上标记，并置于 -20条件下保存，待测。 6.2 试样处理 6.2.1 提取及净化 准确称取 l0 g（精确至 0.1 g）已粉碎大米试样，放入 50 mL 离心管中，加入 10 mL 水和 30 mL 含 0
7、.01（v:v）的甲酸的乙腈溶液，气浴 252恒温振荡 30 分钟，取出向离心管中加入 5 g 氯 化钠，再次振荡 5 分钟后 5000 r/min 离心 5 分钟，取上清液 1.5 mL，放入称有 50 mg C18、150 mg 无水硫酸镁的离心管中，涡旋 2 min ，5000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22m 微孔过滤膜， 移取 600 L 于进样瓶中，加入 400 L 乙腈，混匀后待测。 6.3 测定 6.3.1 液相色谱条件 6.3.1.1 色谱柱：C18柱， 100 mm 2.0 mm（内径）或相当，粒度2.2m或相当； 6.3.1.2 柱箱温度：40； 6.
8、3.1.3 流动相：A-5mM醋酸铵的水溶液 +0.02甲酸（V:V），B-乙腈； 6.3.1.4 流速：0.3 mL/min； 6.3.1.5 进样体积：2 L； 6.3.1.6 流动相梯度洗脱程序见表1。 DB34/T 27772016 3 表1 梯度洗脱程序 梯度时间 /min 流动相比例 /（） 流动相 A 流动相 B 2.0 15 85 4.0 15 85 4.1 85 15 5.0 85 15 6.3.2 质谱条件 6.3.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI），450， 6.3.2.2 离子源接口电压：4.5 KV； 6.3.2.3 扫描方式：正离子模式； 6.3.2.4 检测方
9、式：多反应监测MRM； 6.3.2.5 雾化气20 L/min、干燥气3 L/min均为高纯氮，碰撞气氩气230 KPa； 6.3.2.6 脱溶剂管温度：200； 6.3.2.7 参考条件和定性离子对、定量离子对见表2。 表2 MRM检测参数 名称 ESI 模式 定量离子 m/z 定性离子 m/z 碰撞电压1 (V) CE 碰撞电压2 (V) 肟菌酯 M+H + 409.30/186.10 409.3/186.10 -12.0 -15.0 -16.0 409.3/145.15 -12.0 -50.0 -12.0 代谢物 肟菌酸 M+H + 395.25/186.15 395.25/186.15
10、 -12.0 -20.0 -16.0 395.25/145.15 -12.0 -45.0 -13.0 注： * 表示定量离子 6.3.3 测定 取肟菌酯、代谢物肟菌酸的混合标准工作溶液系列（4.13.3）及试样溶液各 2L，注入超高效液 相色谱串联质谱仪进行分析，用外标法定量。 6.4 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行测定。 6.5 空白实验 除不称取试样外，均按上述步骤测定。 7 结果计算 7.1 试样中的肟菌酯含量按公式(1)计算： DB34/T 27772016 4 mS VCS R . (1) 式中： R 样品中残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； S 样液中肟菌酯或代谢物
11、肟菌酸的峰面积； C 基质标准溶液的浓度，单位为毫克每升（mg/L)； V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； S 基质标准溶液的峰面积； m 称取的试样量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣除空白值。肟菌酯的最终残留量由肟菌酯及其代谢物肟菌酸组成，以肟菌酯计，代谢物肟菌酸的 残留量乘以质量系数 1.036 后计入。 8 方法的准确度和精密度 8.1 准确度 本方法在 0.05 mg/kg5.0 mg/kg 之间添加浓度的回收率在 80110之间。 8.2 精密度 本标准精密度数据是按照 GB/T 6379.1 和 GB/T 6379.2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值 是以 95的
12、可信度来计算，本标准方法的精密度数据参照附录A。 9 色谱参考图 见附录B。 DB34/T 27772016 5 A A 附 录 A （资料性附录） 肟菌酯、代谢物肟菌酸精密度数据表 表A.1 肟菌酯、代谢物肟菌酸精密度数据表 名称 含量 （mg/kg） 重复性限 r 再现性限 R 含量 （mg/kg） 重复性限 r 再现性限 R 肟菌酯 0.05 0.0012 0.0036 0.5 0.0202 0.0573 代谢物肟菌酸 0.05 0.0021 0.0076 0.5 0.0198 0.0266 DB34/T 27772016 6 B B 附 录 B （资料性附录） 标准溶液色谱图 图B.1 肟菌酯标准溶液色谱图（1.0 mg/L） 图B.2 代谢物肟菌酸标准溶液色谱图（1.0 mg/L） 图B.3 肟菌酯、代谢物肟菌酸混合基质标准溶液色谱图（1.0 mg/L） _
