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    DB34 T 2254-2014 水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法.pdf

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    DB34 T 2254-2014 水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法.pdf

    1、ICS 67.050 B 50 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 22542014 水产品中氯霉素残留的检测胶体金免疫 层析法 Detection of chloramphenicol residue in aquatic products- Colloidal gold immunochromatographic method 文稿版次选择 2014 - 12 - 17发布 2015 - 01 - 17实施 安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 22542014 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由合肥市渔政监督管理站提出。

    2、 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会、杭州南开日新生物技术有限公 司。 本标准起草人:赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、 陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、季曙春。 DB34/T 22542014 1 水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法 1 范围 本标准规定了水产品中氯霉素(Chloramphenicol,CAP)残留的检测胶体金免疫层析法的原理、 试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判断及表述、结果确证的方法。 本标准适用于鱼、甲鱼、

    3、龟肌肉组织和虾、蟹去壳、肠腺的可食用组织中氯霉素残留的快速筛查检 测。 本方法的检出限为 0.3 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 本法为竞争抑制法,将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒,标记抗体。样品中残留的氯霉 素,经乙酸乙酯提取,正己烷净化,滴加在氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中,样品溶液以 硝酸纤维素(NC)膜为载体,利用微孔膜的毛细管作用缓慢向另一端渗移,

    4、在移动过程中,样品溶液中 的氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,从而抑制了抗体和检测线上特异性结合抗原的结合, 未被氯霉素结合的抗体与检测线上的抗原反应,并通过胶体金的颜色而显示红色条带。用胶体金读卡仪 或目测比较板/卡上控制线(C 线)和检测线(T 线)上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。 当试样中的氯霉素含量达到或超过本方法检出限时,检测线较控制线显色淡甚至无显色,判定为阳性; 反之,当试样中的氯霉素含量在本方法检出限以下或无残留时,检测线与控制线显色一致或偏深,判定 为阴性。 4 试剂和材料 4.1 特殊注明外,本法所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T 6682 规定的二级水

    5、。 4.2 乙酸乙酯(C4H8O2)。 4.3 正己烷(C6H14)。 4.4 氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板 4.4.1 氯霉素结合抗原:偶联率为110120(载体蛋白:CAP)。 4.4.2 抗氯霉素抗体:多抗或单抗。多抗效价应大于5 000(间接ELISA法),或有效抗体含量应大 于 0.05 mg/mL;特异性应大于5 000(间接抑制ELISA法)。单抗效价应大于15 000(间接ELISA法), 或有效抗体含量应大于0.5 mg/mL;特异性应大于5 000(间接抑制ELISA法)。抗体相对亲和力应大 于3.010 9 (结合率下降50时,相对应的抗体浓度的倒数)。 DB34/T

    6、22542014 2 4.4.3 样品垫:玻璃纤维或纸质薄片。 4.4.4 金释放垫:聚酯纤维片,免疫金释放时间小于 5 min,释放效率大于 80。 4.4.5 NC膜:4 cm毛细管时间 121 s149 s。 4.4.6 吸水垫:滤纸或玻璃纤维或吸水纸。 4.4.7 背衬:PVC。 4.4.8 塑料模板。 4.4.9 PBST 缓冲液。 4.4.10 储存与使用。密封包装,干燥阴凉处保存,用前恢复至室温,即开即用。 5 仪器和设备 5.1 电子天平:感量0.01 g。 5.2 均质机:转速8000 r/min。 5.3 离心机:离心力3 000 g。 5.4 氮气或空气吹干仪:加热温度

    7、60。 5.5 微量移液器:10 L100 L,100 L1 000 L。 5.6 胶体金读卡仪:测量精度 0.02 RLU( 0.4 RLU)。 6 测定步骤 6.1 试样制备 鱼去鳞、去皮,取肌肉部分;甲鱼、龟取肌肉部分;虾、蟹去壳、肠腺,取可食部分。切成 0.5 cm0.5 cm0.5 cm 的小块后混合,用均质机制成糜状。 6.2 提取 称取 2.0 g(0.1 g) 均质后的样品于 5 mL 离心管中,加入 3 mL 乙酸乙酯,剧烈振荡 3 min, 室温下,3 000 g 离心 5 min;移取 2 mL 上清液于 5 mL 离心管中,置于 60水浴或吹干仪中,用 氮气或空气吹至近

    8、干;依次加入 0.3 mL 正己烷、0.3 mL PBST 缓冲液,充分混匀;静置 2 min,下层 溶液待测。 6.3 测定 6.3.1 取出氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板,恢复至室温,置于水平台面上。吸取6.2中待测液的 下层溶液 100 L,加至氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中,在 3 min5 min 内目测或通 过胶体金读卡仪读取结果。 6.3.2 空白对照:每批样品需做一孔空白对照,以PBST 缓冲液(4.4.9)代替试样提取液,按6.3.1 进行。 6.3.3 平行测定:每个样品的平行样数量2,各自按6.2和6.3.1进行。 注:不同试剂板制造商的产品组成和操作会有细微的

    9、差别,应严格按说明书要求规范操作。 7 结果判断及表述 7.1 试剂板有效性判定 DB34/T 22542014 3 7.1.1 失效检测试剂板:空白对照控制线(C线)不出现红色条带(如图1),则检测试剂板失效,不 能进行检测。 7.1.2 有效检测试剂板:空白对照控制线(C线)和检测线(T线)均出现红色条带,而且T线比C 线颜色深或一样深(如图2),则检测试剂板有效,可进行检测。 7.2 结果及表述 7.2.1 阴性:试样检测线(T线)出现红色条带,且颜色比控制线(C线)深或一样深(如图2),结 果为阴性,氯霉素残留量 0.3 g/kg)。 7.2.2 阳性:试样检测线(T线)出现红色条带,但颜色比控制线(C线)浅或检测线(T线)未出现 红色条带(如图3),结果为阳性(氯霉素残留量0.3 g/kg)。 8 结果确证 本方法检测结果为阳性的样品,需用现行有效的 LC-MS/MS 方法或 GC-MS/MS 方法进行确证。 _


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