1、ICS 11.220 B 41 备案号： DB32 江苏省 地 方 标 准 DB32/T 3592-2019 兔出血症防控技术规程 Technical regulation of prevention and controlfor rabbit hemorrhagic disease 2019 - 04 - 08 发布 2019 - 04 - 30 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T 3592-2019 I 前 言 本标准按 照 GB/T 1.1-2009 给出的 规 则 编 制 。 本标准由江苏省农业科学院提出 并归口 。 本标准起草单位：江苏省农业科学院 兽医研究所 本标准 主
2、要 起草人：王芳、魏后军、范志宇、胡波、宋艳华、 陈萌萌 、薛家宾。 DB32/T 3592-2019 1 兔出 血症防控技术规程 1 范围 本标准规 定 了兔出血症 的预防 、 诊断 和 疫情 控制 等 要求 。 本标准适用于兔出血症的预防 、 实验室诊断、临床诊断、流行病学调查和兔出血症暴发后的 疫情 控 制 ，也 适用于 分离毒株的鉴定 和 对无特定病原体 (SPF)兔的监控 。 2 规范性引用文件 下列文件 对于本文件 的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅注日期 的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本 （包括 所有的修改单 ） 适用于本 文件 。 GB 16
3、548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法 NY/T 572 兔病毒性出血病血凝和血凝抑制试验方法 NY/T 3075 畜禽养殖场消毒技术 NY 5131 无公害食品 肉兔饲养兽医防疫准则 DB32/T 1458 兔出血症病毒的检测 RT-PCR方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件。 3.1 兔出血症病毒 rabbit hemorrhagic disease virus（ RHDV） 杯状病毒科（ Caliciviridae） 、 兔病毒属（ Lagovirus） 病毒 。含有一条单股正链 RNA，由 7437个核 苷酸组成，只有
4、 2个开放阅读框架 (ORF)，并由 ORF1的 3端部分序列编码 RHDV衣壳蛋白 VP60，其基因 片段长度为 1740 bp，共编码 579个氨基酸。 3.2 兔出血症 rabbit hemorrhagic disease（ RHD） 由兔出血症病毒引起的一种以急性、高度传染性、大面积死亡为特征的兔传染病。 4 预防 4.1 生物安全管理 4.1.1 养殖场条件 养殖场应 符合 NY 5131规定的条件 。 4.1.2 隔离 应对 引进家兔 进行隔离 观察 15d 30d， 经检查健康合格 后， 方可将 引 进 家兔 与本场家兔一起饲养。 4.1.3 清扫和清洗 DB32/T 3592-
5、2019 2 应对 兔舍、 车辆 等用具、 笼具等 设备 、 兔场环境等进行定期 清扫 和 清洗。 4.1.4 消毒 可参照 NY/T 3075-2017进行 。 养殖场应 建立严格的卫生（消毒）管理制度 ，并 定期对兔舍、 车辆 等用具、 笼具等 设备 、 饮水 及 兔场环境等进行定期严格消毒 ； 兔场出 、 入口处应设置消毒池，内置有效 消毒剂 ；兔舍门口应设置消毒盆、消毒垫等，并放置消毒剂 。 4.1.5 防鼠、防虫、防蝇 兔 舍内应有防 鼠、防虫、防蝇 等装置 。 4.2 免疫监测 定期 随机采集兔场 家兔 血 液 样 品 ， 制备 血清 ，用 红细胞凝集抑制试 验（ HI） 检测 血
6、清 中 RHDV抗体 ， 具体方法 可参照 NY/T 572-2016进行 。如群体血清阳性率低于 85%，应实施 疫苗 免疫 接种。 4.3 免疫 接种 4.3.1 疫苗 应使用 经兽医主管部门批准使用的 含有 兔出血症 病毒抗原的 疫苗 。 4.3.2 免疫程序 一般 情况下， 应 按疫苗的使用说明书规定的程序进行免疫 ，也可 参照 附 录 A实施。 5 诊断 5.1 诊断流程 依据兔出血症流行病学特点、临床症状、病理 学 变化 做出初步诊断 ,然后 经 病原学检验进行确诊 。 5.2 流行病学特点 兔出血症流行病学 有以下 特点 ： a) 易感动物 该病 仅感染兔 。 小于 5周龄的兔子
7、感染后不 易 死亡，无明显 临床 症状 ； 2月龄以上家 兔感染 后， 死亡率高达 70% 90%。 b) 传染源 感染 RHDV的 兔 子 是主要的传染源，包括感染病死 兔 和带毒未死的兔子。 c) 传播途径 病毒通过直接和间接途径传播 。 病死兔和带毒兔通过 其 排泄物、分泌物、血液、兔 毛等污染饮水、饲料、用具、笼具、空气 等 ， 引起 易感兔发病 和疫病流行 。 人、鼠 、 蚊 、 蝇 和 其它畜禽 等 也可 机械性 地 传播病毒。 5.3 临床症状 兔出血症有以下临床症状： a) 最急性型 常发生在 非 疫区 或流行初期 。患兔死前无 任何明显症状， 常 表现为突然 死亡， 死后 勾
8、头弓背或 “角弓反张 ”，少数兔鼻孔流出 带有 泡沫 的血液 。 b) 急性型 病程一般 12 h 48 h，患兔精神萎顿、不爱活动、食欲减退、喜饮水、呼吸迫促、体 温达 41 。临死前表现 狂躁 ，倒地后，四肢划动，抽搐或惨叫，很快死亡。少数死兔鼻孔流出少量 带 有 泡沫 的血液 。 c) 亚急性型 多发于 2 月龄以内的幼兔，兔体消瘦，被毛焦枯无光泽，病程 2 d 3d 或更长，随 后死亡。 5.4 病理 学 变化 DB32/T 3592-2019 3 最急性、急性病死兔剖检时可见全身实质器官淤血、出血 。 气管软骨环淤血，气管内 含 带有 泡沫 的 血液 ；胸腺水肿，并有大小 不等 的出
9、血点；肺 脏 出血、淤血、水肿、有大小不等的出血点；肝脏淤血、 肿大、质地变脆、色泽变淡；脾脏肿大、淤血 ， 呈黑紫色；肾脏淤血、出血；十二指肠、空肠粘膜出血。 5.5 病原学 检验 5.5.1 样本采集、保存和运输 样本 采集、保存和运输参 照 NY/T 541-2016执行，并 按照 GB 16548处理病死家兔。 5.5.2 红细胞凝集试验（ HA） 红细胞凝集试验可参照 NY/T 572-2016进行 。 5.5.3 核酸识别技术 RT-PCR 方法 核酸识别技术可参照 DB 32/T 1458-2009 进行。 5.5.4 非免疫兔接种技术 非免疫兔接种技术参见附录 B。 5.6 结
10、果判定 5.6.1 疑似兔出血症 符合 5.2和 5.3或 /和 5.4的。 5.6.2 确诊 符合 5.6.1且符合 5.5.2或者 5.5.3或者 5.5.4的。 6 疫情控制 6.1 隔离封锁 发生 兔出血症 时，应 紧急 隔离封锁发病兔场 ，严禁兔场 人员，特别是饲养及管理人员 互相串舍，同 时 严禁 家兔 相关物品流通。 6.2 消毒 应对病毒 污染和可能被污染的一切场所、用具和物品 等进行清洁 、消毒 ，并 对 养殖 场 实施 灭鼠 、 灭 蚊蝇 等 防控措施 。 6.3 病死家兔处理 按照 GB 16548处理病死家兔 。 6.4 紧急接种 当 发生兔出血症时， 应 对其他 未
11、死亡家兔 进行 紧急预防 接种。 用 经兽医主管部门批准使用的 含有 兔 出血症 病毒抗原的 疫苗 ， 2 4 倍剂量 /只 ，颈部皮下 注射或用 兔出血症病毒 高免血清 ， 4 毫升 6 毫升 / 只 ，颈部 皮下注射， 7 天 10 天后 ， 再注射 一次 。 DB32/T 3592-2019 4 附录 A （规范性附录） 免疫程序 A.1 繁殖种兔群 A.1.1 繁殖母兔 应每年 2 次定期免疫 接种。 a) 用 符合规定 的疫苗， 2 倍剂量 /只，颈部皮下注 射 ； b) 6 个月后 ， 用 符合规定 的疫苗， 2 倍剂量 /只，颈部皮下注射。 A.1.2 种公兔 应每年 2 次定期
12、免疫 接种 。 a) 用 符合规定 的疫苗， 1 个剂量 /只，颈部皮下注射 ； b) 6 个月后 ， 用 符合规定 的疫苗， 1 个剂量 /只，颈部皮下注射。 A.2 非繁殖青年、成年兔群 应每年 2 次定期免疫 接种 。 a) 用 符合规定 的疫苗， 1 个剂量 /只，颈部皮下注射 ； b) 6 个月后 ， 用 符合规定 的疫苗， 1 个剂量 /只，颈部皮下注射。 A.3 肉兔 A.3.1 70 日龄出栏的肉兔 在家兔 35 日 40 日龄时，用 符合规定 的疫苗 ， 2 倍剂量 /只 ， 颈部皮 下注射。 A.3.2 70 日龄以上出栏的肉兔 a) 在家兔 35 日 40 日龄时，用 符
13、合规定 的疫苗， 2 倍剂量 /只，颈部皮下注射 ； b) 在家兔 60 日 65 日龄时，用 符合规定 的疫苗， 1 个剂量 /只，颈部皮下注射。 A.4 仔、幼兔 a) 35 日 40 日龄 用 符合规定 的疫苗， 2 倍剂量 /只，颈部皮下注射； b) 60 日 65 日龄 用 符合规定 的疫苗 ， 1 个剂量 /只，颈部皮下注射 。 DB32/T 3592-2019 5 附录 B （规范性附录） 非免疫兔接种技术 B.1 材料 B.1.1 实 验动物 2 月龄以上未免疫兔出血症疫苗的临床健康家兔，兔出血症病毒抗体 HI 效价 1:2。 B.1.2 兔出血症病死兔肝脏悬液 取 肝 脏组织
14、 ，剪碎，按 1:10加入 PBS， 匀浆 ，反复冻融 3次，于 -20保存备用 。 B.1.3 疑似 兔出血症病死兔肝脏悬液 处理方法同 B.1.2。 B.2 接种 方法 用 兔出血症病死兔肝脏悬液颈部皮下注射 实验动物 5只 ， 1mL/只，作为 阳性对照组； 用疑似兔出血 症病死兔肝脏 悬液颈部皮下注射 实验动物 5只 ， 1mL/只， 作为 疑似样品 组 ， 同时 设立不接种肝脏组织 的 实验动物 5只 ，作为 阴性对照组 ， 分别于 隔离器中饲养，观察 7日，记录试验兔临床症状 、 死亡情况 和 病 理学变化，并采集病死兔肝脏 样品做红细胞凝集（ HA）试验， 具体方法 参照 NY/T 572-2016进行 。 B.3 结果判定 在观察期内， 阳性对照组 至少死亡 4只 ， 死亡兔有兔出血症典型的临床症状 和 病理学变化 ， 肝脏 样 品 HA检验为阳性 ； 阴性对照组全部 健康 存活 ， 证明实验动物的可靠性； 疑似样品 组 ，在观察期内，至 少死亡 4只，死亡兔有兔出血症典型的临床症状 和 病理学变化，肝脏 样品 HA检验为阳性者，则疑似样品 来自兔出血症死亡兔 。 _
