1、ICS 65.020.01 B 15 DB 23 黑龙江省 地方标准 DB 23/ T 23742019 马铃薯胞囊线虫田间调查技术规范 2019-06-05 发布 2019-07-04 实施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB23/T 23742019 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009的规则编写。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院马铃薯 研究所 。 本标准主要起草人：王文重、闵凡祥、胡林双、高云飞、杨帅、魏琪、董学志、郭梅、宿飞飞。 DB23/T 23742019 2 马铃
2、薯胞囊线虫田间调查技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯胞囊线虫田间调查的土壤取样、分离、鉴定和结果判断方法。 本标准适用于马铃薯胞囊线虫田间调查。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 马铃薯胞囊线虫 马 铃 薯 胞 囊 线 虫 （ potato cyst nematode ） 包 括 马 铃 薯 白 线 虫 （ Globodera rostochiensis）和马铃薯金线虫（ Globodera pallida） ，属于线虫门（ Nemata） 、侧尾腺 纲（ Secernentea）、垫刃目（ Tylenchida）、异皮线虫科（ Heteroderidae）胞囊线虫属
3、（ Heterodera)，是马铃薯作物上最重要的病害之一。对马铃薯根部、匍匐茎和块茎造成伤 害，症状主要表现为坏死，影响根部生长，阻碍养分吸收，降低马铃薯产量和商品性。 3 取样时间和方法 3.1 取样时间 每年在马铃薯播种前或收获后，对马铃薯田土壤进行随机取样。 3.2 调查地块 根据当地不同土壤类型选择有代表性的地块进行调查，每块面积不得小于 6670 m2。 3.3 调查方法 取样时首先填写表 1。 表 1 马铃薯胞囊线虫田间调查表 取样地点 取样时间 土壤类型 填表人 样品编号 调查面积（ m2） 前茬作物 备注 DB23/T 23742019 3 取样时先去除 3 cm5 cm的表
4、土 ， 然后利用土壤取样器采集土壤样品 。 由于马铃薯属于垄 作 ， 所以取样时取距地面 15 cm20 cm的根部土壤 。 采用对角线五点取样法 ， 每个地块可取 5个取样点 ， 每个取样点挖取根围土作为 1个小样 ， 每个小样 100 g， 然后将其混合成一个 500 g的混合样。写好标签，将样品装入取样袋中。取样时应在土壤湿润时进行，避免在土壤浸 水时取样。 4 分离和鉴定 4.1 样品分离 将取回的土壤样品平铺在干净的浅瓷盘内 ， 自然干燥 ， 去除土壤中的植物组织和粗砂等 杂质后，称取 100 g土壤样品备用。 采用胞囊漂浮器分离法，分离时先将漂浮筒注满水，将干燥后的 100 g土壤
5、样品放在上 筛中 ， 用强水流冲洗至全部土样到漂浮筒内 ， 胞囊和草屑等浮在水面并溢出 ， 经环颈水槽流 到底筛中 ， 用清水反复冲洗底筛 ， 将底筛中的漂浮物倒在铺有滤纸的漏斗中过滤 ， 胞囊留在 滤纸上 。 将晾干后的滤纸放于 解剖镜 （ 8倍 10倍 ） 下检查 ， 寻找胞囊 。 发现胞囊后用小毛刷 收集胞囊。 4.2 样品制作 将胞囊线虫的胞囊在培养皿内浸泡 24 h， 用尖头镊子将浸过的胞囊移至载玻片的水滴中 ， 在体视显微镜（ 10倍 90倍）下用解剖刀切下胞囊后部的阴门椎部分。用挑针清除阴门椎内 附着物，用刀适当整理阴门椎边缘，使其高度不超过阴门窗区域宽度的 10倍 15倍。将切
6、下 的阴门椎用 40%的 H2O2处理数分钟，阴门椎依次移至载玻片的另一侧的 70%、 95%、 100%酒精 液中脱水 。 取适量固体状的中性胶涂至凹槽的载玻片中 ， 在酒精灯上加热至胶溶化 ， 将处理 好的阴门埋于胶内 ， 注意操作时一定摆正阴门椎使其顶端向上 ， 加入刷子毛作支撑物 ， 盖上 盖玻片，贴好标签。 4.3 样品鉴定 制作胞囊线虫阴门锥玻片 。 最后生物 显微镜 （ 100倍 1000倍 ） 下观察胞囊和阴门锥形态 特征。参见附录 A，对马铃薯胞囊线虫形态进行鉴定。 5 结果判断 符合 4.3形态鉴定特征可判定是否分离到马铃薯金线虫和马铃薯白线虫，最后将结果汇 入表 2，判断
7、该地区是否存在马铃薯胞囊线虫。 表 2 马铃薯胞囊线虫田间调查情况及结果表 结果 样品编号 取样时间 马铃薯金线虫 马铃薯白线虫 备注 +：表示有； 表示没有 A DB23/T 23742019 4 附录 A （资料性附录） 马铃薯胞囊线虫形态特征 A.1 马铃薯白线虫 学名： Globodera rostochiensis 异 名 ： Heterodera schachtii rostochiensis ； H. schachtii solani ； H. rostochiensis 英文名： Potato cyst nematode； White potato cyst nematode
8、分类 ： 线虫动物门 （ Nematoda） ， 侧尾腺口纲 （ Secernentea） ， 垫刃目 （ Tylenchida） ， 异皮线虫科（ Heteroderidae），球胞囊属（ Globoder）。 形态学特征 ： 成熟雌虫呈白色，死后变为褐色、有光泽，有些种群在变成褐色之前要经 过 34周的米黄色阶段。虫体近球形，有一个突出的颈和头部；末端钝圆、无阴门锥，角质 层有网状花纹；头架骨化弱，口针强壮，针锥部长占口针长的 1/2，基部球向后倾斜，口腔 内衬形成一个口针导管从头架延伸到约口针长的 75%处。中食道球发达，中食道球瓣大、呈 新月形；食道腺叶宽，位置不定，有 3个核。排泄孔
9、大，位于颈基部。双生殖腺，阴门横裂、 位于略凹陷的阴门盆内 ， 阴门两边为小瘤状突起形成的新月形区 ， 肛门和阴门盆之间角质层 上约有 12条隆起的脊，其中有些交接成网状。胞囊：褐色，有光泽，近球形，有突出的颈； 角质层花纹比雌虫更清晰，角质层下无亚结晶层；阴门区有 1个环形膜孔，无阴门桥、阴门 下桥及其他内生殖器残留物，无泡囊，但有类似泡囊状物存在。 该线虫属于检疫性害虫。 雌虫（ n=25）：口针长 =26.0 m 1.6 m ；背食道腺开口距口针基部 =6.0 m 1.1 m ； 唇区至排泄孔 =143.9 m 21.9 m ； 阴门裂长 =11.1 m 1.6 m ； 肛门 至阴门盆距
10、 离 =43.2 m 8.8 m ；肛阴间轴线上的角质层脊数 =812条。 胞囊 （ n=25） ： 长 （不包括颈 ） =510 m 69 m ； 宽 =451 m 76 m ； 颈长 =111 m 26 m 。 雄虫（ n=25） ： L=1197m100 m ； 口针长 =25.8 m 0.9 m ； 背食道腺开口至 口针基部距离 =5.3 m 0.9 m ；交合刺长 =35.5 m 2.8 m ；引带长 =10.3 m 1.5 m 。 二龄幼虫（ n=25）： L（除颈长） =4821.8 m ；体宽 =23.40.6 m ；尾透明部长 =26.63.4 m ；口针基部球到背食道腺口
11、=2.90.9 m ；尾长 =52.64.1 m 。 A.2 马铃薯金线虫 学名： Globodera pallida 异名： Heterodera pallida 英文名： potato cyst nematode； potato golden nematode 分类 ： 线虫动物门 （ Nematoda） ， 侧尾腺口纲 （ Secernentea） ， 垫刃目 （ Tylenchida） ， 异皮线虫科（ Heteroderidae），球胞囊属（ Globoder）。 形态学特征 ： 虫体亚球形，颈突出（包括食道和食道腺的一部分 ） ； 头小，上有 1或 2条 明显的环纹 ， 与颈上深陷
12、且不规则的环交融在一起 。 球形身体的大部分被角质覆盖且表面具 有网状脊的纹饰，无侧线，六角放射状的头轻度骨化。口针前部约为口针长的 50%，且有时 轻度弯曲 。 在固定的标本中 ， 口针前部常与口针后部相脱离 。 口针基球圆形 ， 后部明显下斜 。 DB23/T 23742019 5 口道从头架的基部盘向后延伸，到口针长度的 75%处形成一个管状的口针腔。中食道球大， 具发达的新月形的瓣门。食道腺位于一大的裂片上，常被已发育好的成对的块状卵巢覆盖。 排泄孔明显 ， 位于颈基部附近 。 颈区无色的体表分泌物常使内部器官看不清 。 阴门区和尾区 不缢缩，位于阴门盆的一个近圆形的轻度凹陷的区域。
13、阴门盆外是肛门 ； 在阴门和肛门间的 表皮形成了约 20条平行的脊，这些脊略有一些交叉。在阴门 肛门区外这些脊变成网状的 纹饰 ； 这些纹饰覆盖了除颈以外体表的其他部分，在身体的大部分均可见到不规则的精细的 亚表皮刻点 。 胞囊线虫从根部的皮层突出时呈现白色 ， 然后由于色素积累 ， 经过 4 6周金黄 色阶段后，雌虫死亡，角质随即变成深棕色，因此，此线虫俗名称作 “金线虫 ”。 胞囊：亚球形，上有突出的颈，没有突出的阴门锥。双半膜孔。新胞囊上阴门区完整， 但在老标本中 ， 阴门盆的全部或部分丢失 ， 只形成单一圆形的膜孔 。 无阴门桥 、 下桥 、 无泡 状突 ； 但在一些胞囊的阴门区可能存
14、在小块不规则的黑色素沉积区及局部加厚。胞囊上的纹 饰与雌虫上的相像，但比雌虫更明显，无亚晶层。 雄虫：蠕虫形，温和热杀死时虫体强烈弯曲；体后部纵向扭曲 90 180，呈现 “C” 形或 “S”形。尾短且末端钝圆。角质层表面有规则的环，尾末端侧区有 4条侧线 ； 环纹穿过 外侧侧线，但不穿过内侧侧线。头圆，缢缩，有 6 7条环纹；口盘大，有 6片小唇瓣环绕。 唇瓣侧面有侧器孔 。 头呈六角放射状 ， 深度骨化 。 口针发达 ， 口针基球向后倾斜 ， 前部分占 整个口针长度的 45%。中食道球椭圆形，上有一明显的新月形瓣门。中食道球与肠中间有一 宽大的神经环环绕食道 ； 无明显的食道 肠间瓣膜。食
15、道腺位于腹面排泄孔附近一窄的裂片 上。排泄孔位于头端大约 15%体长处。背腺核明显；亚腹腺核位于食道腺体后部，不明显； 半月体 2个体环长，位于排泄孔前；半月小体 1个体环长，在排泄孔后 9 12体环处。单精巢 自身体中部开始，中间为具腔和腺壁的输精管，后部圆锥形。 泄殖腔孔小 ； 交合刺粗大，弓 形，远末端有一尖的顶部；交合刺背面存在小的无纹饰的引带；引带约为 2 m 厚。 二龄幼虫 ： 蠕虫形，尾圆锥形，逐渐变细，末端细圆。尾后部 1/2至 2/3处为透明区。角 质环纹明显 ； 侧区有 4条侧线，从 3条侧线开始，偶尔以网状结束。头部轻度缢缩，圆形，有 4 6条环纹 ； 头架深度骨化，六角
16、放射状。口针发达，口针基球圆，略微向后倾斜。排泄孔 大约在头后 20%的体长处；半月体 2个体环宽，位于排泄孔前 1个体环处。半月小体宽度至少 是一个体环，在排泄孔前 5 6个体环处。在体长的约 60%处有 4个细胞的生殖腺原基。 该线虫属于检疫性害虫。 雌虫（ n=25）：口针长度 =22.91.2 m ，口针基部到背食道腺开口的距离 =5.70.9 m ， 头基部宽 =5.20.7 m ， 头顶到中食道球瓣门的距离 =73.214.6 m ， 中食道球瓣门 到排泄孔的距离 =65.220.2 m ， 头顶到排泄孔的距离 =145.317.4 m ； 中食道球平均直 径 =30.02.8 m
17、 ； 阴门区平均直径 =22.42.8 m ，阴门裂长度 =9.71.9 m ，肛门到阴 门区的距离 =60.040.1 m ，肛门 阴门的轴线上角质脊的数量 =21.63.5。 胞囊（ n=25）：长度（不包括颈） =44550 m ，宽度 =38261 m ，颈长 =10419 m ，膜孔平均直径 =18.82.2 m ，肛门到膜孔的距离 =66.510.3 m ， Graneks比率 =3.60.8 m 。 雄虫（ n=50）： L=4497100 m ，排泄孔处体宽 =28.14.7m ，头基部宽度 =44.80.6 m ， 头长度 =680.3m ， 口针长度 =25.80.9 m
18、， 口针基部到背食道腺开口 的距离 =5.30.9 m ， 头顶至中食道球瓣门的距离 =98.57.4 m ， 中食道球瓣门到排泄孔 的距离 =73.89.0 m ，头顶至排泄孔的距离 =172.312 m ，尾长 =5.44.1 m ； 肛门处 体宽 =13.50.4 m ，沿轴线的交合刺长度 =35.52.8 m ，引带长度 =10.31.5 m 。 二龄幼虫（ n=50）： L=46820 m ，排泄孔处体宽 =18.30.5 m ，头基部宽 =9.90.4 m ， 头长 =4.60.6 m ， 口针长度 =21.80.7 m ， 口针基部到背食道腺导管 的距离 =2.60.06 m ， 头顶到中食道球瓣门的距离 =69.21.9 m ， 中食道球瓣门到排泄 DB23/T 23742019 6 孔的距离 =31.32.3m ，头顶到排泄孔的距离 =100.52.4 m ； 尾长 =43.911.6 m ； 肛 门处体宽 =11.40.6 m ，尾部透明区长度 =26.51.8 m 。
