1、 ICS 65.020.01 B 64 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23 DB23/T 23382019 侧金盏花组培快繁技术规程 2019-04-03 发布 2019-05-02 实施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB23/T 23382019 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省森林工业总局提出。 本标准 起草单位 ： 黑龙江省林业科学研究、黑龙江省林业监测规划院、黑龙江茅兰沟国家级自然保 护区、黑龙江省林业科学院、黑龙江丰林国家级自然保护区管理局、哈尔滨理工大学。 本标准主要起草人 ： 李晶 、 王丹 、
2、王承义 、 王颖 、 王英 、 孙海滨 、 孙一萌 、 黄金龙 、 王晓荣 、 舒钰 、 赵学丽、崔崧、刘延滨、刘强。 DB23/T 23382019 1 侧金盏花组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了侧金盏花（ Adonis amurensis Regel et Rddde）组培快繁技术的培养基制备、外植体 选择、采集与消毒处理、培养条件、诱导分化与继代增殖、生根培养、组培苗炼苗与移栽和技术档案 。 本标准适用于侧金盏花组织培养生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（
3、包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁育苗技术规程 。 3 培养基制备 3.1 培养基 初代培养基： MS+ NAA 0.1 mg/L +IAA 0.5 mg/L+琼脂 6.0 g/L+蔗糖 20 g/L， pH值调至 5.8； 诱导分化培养基： MS+6-BA 0.8 mg/L+ NAA 0.3 mg/L+琼脂 6.0 g/L+蔗糖 20 g/L， pH值调至 5.8； 继代增殖培养基： MS+6-BA 0.8 mg/L+ NAA 0.5 mg/L+琼脂 6.0 g/L+蔗糖 20g/L， pH值调至 5.8； 生根培养基：
4、1/2 MS+IAA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L+琼脂 6.0 g/L+蔗糖 20 g/L， pH值调至 5.8。 培养基制备按 NY/T 2306进行。 3.2 培养基消毒灭菌。 瓶装培养基需在 10 h内完成灭菌 ， 采用高压蒸汽灭菌锅灭菌 ， 在压力 0.105 MPa、 温度 121 条件下 灭 20 min 25 min，锅内的灭菌物应不超过锅的容量 3/4，高压灭菌时锅内使用蒸馏水。 3.3 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下 7 d内使用， 2 4 条件下 14 d内使用。培养基应保存 于洁净环境中，应避光和防尘。 4 外植体采集及处理 4.1 采
5、集时间 DB23/T 23382019 2 应选择晴天上午采集外植体。 4.2 采集部位 五月上旬，花凋落后，选择生长健壮无病虫害的母株，剪取有芽茎段作为外植体，外植体大小 4 cm 5 cm。 4.3 外植体清洗 洗涤剂清洗表面泥土，然后用自来水冲洗 2 h 3 h。 4.4 外植体灭菌 将外植体用洗涤剂作表面清洗后 ， 流水冲洗 30 min， 放入超净台中 ,加入 75 %酒精灭菌 10 s， 无菌水 冲洗 3次 5次 ， 然后用 0.1 %升汞灭菌 8 min， 无菌水冲洗 3次 5次 ,并用无菌水浸泡 20min， 无菌滤纸吸 干水分备用。 4.5 切割 将外植体两端各剪去 2 mm
6、，应保持茎段长度 1.0 cm 2.0 cm。 5 培养条件 5.1 温度 培养室温度应控制在 25 2 。 5.2 湿度 培养室相对湿度应保持 40 50 。 5.3 光照强度 培养室光照强度控制 在 27 molm-2s-1 36 molm-2s-1。 5.4 光照时间 每天光照 12h。 6 诱导分化与继代增殖 6.1 外植体的接种 将培养瓶口在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒，将外植体放入培养瓶中，每个培养瓶放 3个外植体，接 种后盖上封口膜，并标注日期。 6.2 初代培养 将消毒好的茎段接种到初代培养基上，培养 40 d生长侧芽。 6.3 诱导分化 DB23/T 23382019 3 将侧芽
7、接种到 分化培养基中进行诱导分化 。 每个培养瓶放 3个 4个外植体 ， 培养 10 d后开始分化不 定芽， 20 d分化成丛生芽。 6.4 继代增殖培养 将芽接种到继代增殖培养基中，经过 50d可分化成丛生苗， 3周 5周继代一次。 7 生根培养 选取生长健壮且高度在 1.0 cm 2.0 cm的分化苗 ， 接种到生根培养基中进行生根培养 ， 培养 30 d诱 导生根。 8 组培苗炼苗与移栽 8.1 炼苗 8.1.1 炼苗标准 当组培幼苗基部长出 3条以上新根、根长 1.0 cm 2.0 cm即可进行炼苗。 8.1.2 炼苗方法 将组培苗转移到日光温室中 ， 自然散射光下炼苗 ， 温度控制在
8、 20 25 ， 湿度在 70 % 80 %， 揭去封口膜，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水， 3 d 后移栽。 8.2 移栽 8.2.1 基质选择 蛭石。 8.2.2 移栽方法 取出组培苗 ， 用清水洗去苗基部的培养基 ， 移栽至基质中 ， 育苗基质放入育苗容器并浇透水 ， 育苗 盘规格 35 cm50 cm10 cm， 基质厚度 5 cm 7 cm， 株行距 3 cm 3 cm， 组培苗移栽应在傍晚进行 ， 育苗 管理按 GB/T 6001进行。 8.2.3 移栽管理 50 %透光率遮光网遮光 7 d， 7 d后移除 ， 温室应保持 80 % 90 %的空气湿度 ， 温度应保持 18 25 。 9 技术档案 档案内容主要包括 ： 材料来源、外植体类型、培养基及植物生长调节剂、诱导率、污染率、增殖系 数、生根率和移栽成活率。 DB23/T 23382019 4 附录 A （规范性附录） 技术档案表 A.1 技术档案表 材料来源 外植体类型 培养基及植物生长 调节剂浓度 诱导率 % 污染率 % 增殖系数 生根率 % 移栽成活 率 %
