1、 ICS 65.020.01 B 64 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23 DB23/T 23562019 树莓秋福组培快繁技术规程 2019-04-03 发布 2019-05-02 实施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB23/T 23562019 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由 黑龙江省森林工业总局提出 。 本标准 起草单位 ： 黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省森林环境研究所、黑龙江省林业科学院、苇 河林业局。 本标准主要起草人 ： 李艳霞、丛喜东、田新华、闫朝福、刘洪志、韩瑞雪、王福德、刘建明、刘忠 玲、姚颖等。
2、DB23/T 23562019 1 树莓秋福组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了树莓 (Rubus idaeus L.)秋福 （ Autumn Bliss） 组培快繁技术的培养基制备 、 外植体选 择与处理、诱导分化和增殖、生根培养、炼苗移栽及技术档案。 本标准适用于树莓秋福组培快繁技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 培养基制备 3.1 培养基 不定芽分化诱导培养基： MS+6-B
3、A0.5mg/L+GA3 0.2mg/L+IBA0.1mg/L+琼脂 6.0g/L+蔗糖 20g/L， pH5.8。 增殖培养基： MS+6-BA1.0mg/L+GA3 0.5mg/L+IBA0.1 mg/L+琼脂 6.0g/L+蔗糖 20g/L， pH5.8。 生根培养基培养： 1/2MS+IBA0.5mg/L。 3.2 培养基灭菌 瓶装培养基需在 10h 内完成灭菌 ， 采用高压蒸汽灭菌锅灭菌 ， 在压力 0.105MPa、 温度 121条件下 灭菌 20min 25min。 3.3 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下 7d内使用， 2 4 条件下 14d内使用。培养基应保存
4、于 洁净环境中，注意避光和防尘。 4 外植体 选择与处理 4.1 外植体的选择 选择生长健壮的植株作为采样母株 ， 剪取母树当年幼枝茎段作为外植体 ， 外植体大小在 2cm 3cm之 间。 4.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗，再将外植体用流水冲洗 30min后，放入消毒瓶中。把装有外植体 的消毒瓶用 75%的酒精棉擦拭后放入超净工作台 ， 在超净工作台上打开装有外植体的消毒瓶 ， 倒入 75%酒 精并摇晃消毒瓶，浸泡消毒 30s，倒去酒精，用无菌水冲洗外植体 3次 5次；然后用 0.1%HgCl2浸泡 8min，无菌水冲洗 3次 5次，并浸泡 30min，再用无菌滤纸吸干外植体表
5、面的水分。 4.3 外植体切割 将表面消毒后的外植体切割，接入培养基中。茎段在接种前用手术剪刀剪去两端，切成长 1.0cm 2.0cm。 DB23/T 23562019 2 5 诱导分化和增殖 5.1 诱导分化 先将培养瓶的封口膜轻轻取下 ， 放在一边 ， 将培养瓶口倾斜在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒 。 将枪式 镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将切割好的外植体放入不定芽分化诱导培养基中，每个培养瓶放 3 个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期 。培养室的温度控制在 25 3，相对空气湿度控制在 70% 80%，光照强度为 27 molm-2s-1 36 molm-2s-1，光照时间为 12h/d
6、。培养 20d 25d。 5.2 增殖 外植体经诱导分化培养生成愈伤组织及不定芽 ， 将其转接至增殖培养基中 ， 继代培养 30d 35d， 培 养条件同 5.1。 6 生根培养 选取培养瓶中长度 1.5cm 3.0cm生长健壮的不定芽接种至生根培养基中 ， 培养 20d 30d， 培养条件 同 5.1。 7 炼苗移栽 7.1 炼苗 7.1.1 炼苗标准 当组培苗基部长出 3条以上，根长达 1.0cm 3.0cm，即可进行炼苗处理。 7.1.2 炼苗方法 将组培苗转移到日光温室中 ， 自然散射光下炼苗 ， 温度控制在 20 25， 空气相对湿度在 70% 80%， 每天中午在培养瓶周围喷洒雾水
7、。 3d后揭去封口膜， 2d 4d后即可移栽。 7.2 移栽 取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，移栽至装有腐殖土、草碳土和细河沙（混合比例为 2： 1： 1）的混合基质的育苗盘中。育苗盘规格为 35cm50cm，育苗盘四壁高度不应低于 7cm，育苗基质放 入育苗容器并浇透水后，厚度不应小于 5cm，水渗干后再覆上一层土。 温室应保持 70% 80%的空气湿度，温度应在 18 25，根据土壤湿度给予植株适度的浇水处理 ， 育苗管理按照 LY/T 1882进行。 8 技术档案 档案内容主要包括 ： 材料来源、外植体类型、培养基及植物生长调节剂、诱导率、污染率、增殖系 数、生根率和移栽成活率。
