1、ICS 65.020.01 B 15 DB 23 黑龙江省 地方标准 DB 23/T 24242019 马铃薯早疫病检测技术规程 2019 - 07 - 23 发布 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发 布 2019 - 08 - 22 实施 DB23/T 24242019 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院马铃薯研究所、中国农业大学植物保护学院。 本标准主要起草人 ： 胡林双、王晓丹、闵凡祥、高云飞、王文重、杨帅、魏琪、董学志、郭梅、盛
2、 万民、白艳菊。 DB23/T 24242019 1 马铃薯早疫病检测技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯早疫病田间检测和室内检测。 本标准适用于马铃薯植株和块茎早疫病检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程 GB 8855 新鲜水果和蔬菜的取样方法 GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 田间检测 3.1 抽样 抽样参照 GB 7331-2003 中 5.1.1.2 规定的方法
3、执行。 3.2 田间症状鉴别 田间病株和薯块症状，以肉眼观察为主 (参见附录 A)。 4 室内检测 4.1 取样方法 取样方法参照 GB 8855 中规定执行。 4.2 实验用水 实验用水应符合 GB 6682 的规定。 4.3 试剂 NaClO、 盐酸 、 75 % 酒精 、 无菌水 、 马铃薯葡萄糖琼脂 （ PDA培养基 ） ， 所用试剂级别均为分析纯 。 4.4 仪器和器具 培养箱、生物显微镜、无菌操作台、载玻片和盖玻片、培养皿、酒精灯、手术刀、灭菌锅等。 4.5 操作步骤 DB23/T 24242019 2 4.5.1 直接镜检 若样品发病部位已有霉层存在，可挑取其霉层直接镜检。若无霉
4、层， 则按以下步骤进行 ： 将待检叶 片用蒸馏水清洗晾干后，放入保湿器皿中，放在 25 培养箱内培养 1 d 4 d 后， 挑取霉层直接镜检 ； 将 待检块茎用自来水清洗后，用 1 % NaClO 溶液表面消毒 3 min 5 min，再用无菌水清洗 3 次，晾干，将块 茎切片或直接放入保湿器皿中，放在 25 培养箱中暗培养 3 d 5 d 。挑取霉层直接镜检。 4.5.2 分离培养后镜检 用无菌刀片切取病健交界处的叶片或块茎病组织，面积约为 5 mm5 mm 大小，放入 75 % 的酒精中进 行组织表面消毒 2 min ， 用无菌水冲洗 3 次 ， 再用无菌滤纸将叶片表面的水分吸干 ， 放入
5、无菌的 PDA 培 养基上。每个培养基上一般放置 3 4 片，在 25 下恒温培养。 3 d 4 d 后，在无菌条件下挑取病组织 周围长出的尖端菌丝 ， 移入 PDA 培养基进行纯化培养 。 在 25 光 （光照强度大于 3000 lux， 16 h） 和暗 （ 8 h）交替恒温培养 4 d 左右，挑取少量菌丝，镜检。 4.6 结果判定 将压好的玻片放在生物显微镜下观察病原菌形态特征 ， 如果镜下的分生孢子形态符合茄链格孢菌的 形态特征，则判定为马铃薯早疫病菌（参见附录 B）。 DB23/T 24242019 3 附录 A （资料性附录） 马铃薯早疫病主要典型症状 A.1 马铃薯早疫病叶片症状
6、 在植株下部叶片或老叶上产生小的 、 近圆形 、 褐色至深褐色病斑 ， 病斑可迅速扩大 ， 其上产生黑色 同心轮纹和少量黑色霉层 。 严重时 ， 整个病斑相互连接 ， 但受叶脉限制成三角形或不规则形 ， 最后穿孔 ， 叶片变黄，干枯，甚至脱落。见图 A.1 。 图 A.1 马铃薯早疫病叶片症状 A.2 马铃薯早疫病茎部症状 叶柄受害多发生于分枝处，病斑褐色，线条形，稍凹陷，扩大后呈灰褐色长椭圆形病斑，有轮纹。 见图 A.2 。 DB23/T 24242019 4 图 A.2 马铃薯早疫病茎部症状 A.3 马铃薯早疫病块茎症状 块茎被侵染后，产生暗褐色，稍凹陷，圆形或近圆形病斑，大小不等，有的病
7、斑，直径可达 2 cm 。 边缘明显 ， 皮下呈浅褐色 、 海绵状干腐 ， 深度一般不超过 6 mm ， 在老化的病斑上 ， 可以产生裂缝 。 在 贮藏期间病斑可增大，块茎皱缩。见图 A.3 。 图 A.3 马铃薯早疫病块茎症状 DB23/T 24242019 5 A A 附录 B （资料性附录） 茄链格孢菌 Alternaria solani 形态特征 B.1 马铃薯早疫病病原茄链格孢菌形态特征 马铃薯早疫病的病原为茄链格孢 Alternaria solani (E. & M.) Sorauer。茄链格孢菌属于半知菌 （ Deuteromycota） ， 丝孢纲 （ Hyphomycetes） ， 丛梗孢目 （ Moniliales） ， 暗色孢科 （ Dematiaceae） 。 分生孢子梗单生或丛生，长不超过 110 m，宽 6 m 10 m 。分生孢子单生，倒棍棒形至长椭圆形， 淡金黄褐色至榄褐色 ， 具长喙 ， 表面光滑 ， 9 11 个横隔膜 ， 0 至数个纵隔膜 ， 150 m 300 m15 m 19 m 。喙长等于或长于孢身，有时有分枝，喙宽 2.5 m 5 m 。见图 B.1 。 图 B.1 显微镜下马铃薯早疫病病原 Alternaria solani 分生孢子形态特征
