1、 ICS 65.020.01 B 64 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23 DB23/T 23372019 白头翁组培快繁技术规程 2019-04-03 发布 2019-05-02 实施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局 发布 DB23/T 23372019 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由 黑龙江省森林工业总局提出 。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所。 本标准主要起草人：舒钰、宋国华、李晶、王丹、王福德、赵学丽、王颖、王晓荣、黄金龙。 DB23/T 23372019 1 白头翁组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了白头翁
2、 （ Pulsatilla chinensis （ Bunge） Regel） 种苗组培快繁技术的培养基制备 、 外植体选择与处理、诱导分化与增殖、生根培养、炼苗与移栽和技术档案。 本标准适用于白头翁组培快繁技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 培养基制备 3.1 培养基 不定芽诱导分化培养基： MS基本培养基 +6-BA 0.5 mg/L+GA31.5 mg/L+IBA 0.5 mg/
3、L+琼脂 6.5 g/L+蔗 糖 30 g/L， pH调至 5.8。 增殖培养基 ： MS基本培养基 +6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+琼脂 6.5 g/L+蔗糖 30 g/L， pH调至 5.8。 生根培养基： MS基本培养基 +KT 0.5 mg/L +NAA 1.5 mg/L+琼脂 6.5 g/L+蔗糖 30 g/L， pH调至 5.8。 3.2 培养基灭菌 瓶装培养基需在 10 h 内完成灭菌 ， 采用高压蒸汽灭菌锅灭菌 ， 在压力 0.105 MPa、 温度 121 条件 下灭菌 20 min 25 min。 3.3 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室 ， 常
4、温条件下保存 7d内使用 ， 2 4 条件下保存 14 d内使用 。 培养 基应保存于洁净环境中，注意避光和防尘。 4 外植体 选择与处理 4.1 外植体的选择 择生长健壮、无病虫害的植株作为采样母株，剪取幼枝茎段作为外植体，外植体大小在 2 cm 4 cm 之间。 4.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗 ， 将外植体用流水冲洗 30 min后 ， 放入消毒瓶中 。 把装有外植体的 消毒瓶用 75%的酒精棉擦拭后放入超净工作台，在超净工作台上打开装有外植体的消毒瓶，倒入 75 %酒 精并摇晃消毒瓶，浸泡消毒 30 s，倒去酒精，用无菌水冲洗外植体 3次 5次 ； 然后用 0.1 %
5、HgCl2浸泡 5 min，无菌水冲洗 4次 5次，并浸泡 30 min，再用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。 4.3 外植体切割 将表面消毒后的外植体切割 ， 两端各剪去 2mm， 保持茎段长度 1.5 cm 2.5 cm， 接种至诱导分化培养 基中。 DB23/T 23372019 2 5 诱导分化与增殖 5.1 培养条件 培养室的温度控制在 25 3 ，相对空气湿度控制在 70 % 80 %，光照强度为 27 molm-2 s-1 36 molm-2s-1，光照时间为 12 h/d。 5.2 诱导分化 先将培养瓶的封口膜轻轻取下 ， 放在一边 ， 将培养瓶口倾斜在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒
6、。 将枪式 镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将切割好的外植体放入不定芽分化诱导培养基中，每个培养瓶放 3 个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期 。 5.3 增殖培养 外植体经诱导分化培养生成愈伤组织及不定芽，将其转接至增殖培养基中，继代培养 30 d 35 d， 培养条件同 5.1。 6 生根培养 选取培养瓶中长度 1.5 cm 3.0 cm生长健壮的不定芽接种至生根培养基中 ， 培养 20 d 30 d， 培养 条件同 5.1。 7 炼苗与移栽 7.1 炼苗 7.1.1 炼苗标准 当组培苗基部长出 3条以上，长度达 1.0 cm 3.0 cm的根系，即可进行炼苗处理。 7.1.2 炼苗方法
7、 将组培苗转移到日光温室中 ， 自然散射光下炼苗 ， 温度控制在 20 25 ， 空气相对湿度在 70 % 80 %，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水。 3 d后揭去封口膜， 2 d 4 d后即可移栽。 7.2 移栽 取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，移栽至装有细沙、蛭石和珍珠岩（混合比例为 1： 1： 1） 的混合基质的育苗盘中 。 育苗盘规格为 35 cm50 cm， 育苗盘四壁高度不应低于 7 cm， 育苗基质放入育 苗容器并浇透水后，厚度不应小于 5 cm，水渗干后再覆上一层土。 温室应保持 70 % 80 %的空气湿度 ， 温度应在 18 25 ， 根据土壤湿度给予植株适度的浇水处 理，育苗管理按照 LY/T 1882进行。 8 技术档案 应建立技术档案 ， 内容主要包括 ： 材料来源 、 外植体类型 、 培养基类型 、 植物生长调节剂类型浓度 、 诱导率、污染率、增殖系数、生根率以及移栽成活率。
