1、 ICS 67.050 X 04 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 29082018 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法 Determination of changbai mountain ranae oviductus HPLC method 2018 - 11 - 12 发布 2018 - 12 - 30 实施 吉林省市场监督管理厅 发布 DB22/T 2908 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB /T 20001.4-2015 给出的规则起草。 本标准由吉林省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林大学。 本标准起草人:王永生、徐阳、王诗涵、
2、鲍慧玮、赵中原、崔庆艳、肖瑶、刘敏、王艳伟、房永清、 王道君、王仁祥、伊常青。 DB22/T 2908 2018 1 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法对长白山林蛙油（Chang bai mountain Ranae Oviductus）进行定 性测定。 本标准适用于长白山林蛙油的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 19507 地理标志产品 吉林长白山中国林蛙油 3 术语和定义 下列术语和定义
3、适用于本文件。 3.1 长白山林蛙油 changbai mo untain ranae oviductus 长白山林蛙油是主产于长白山的林蛙油，即中华人民共和国药典2015版一部收载的哈蟆油，为 蛙科动物中国林蛙 Rana temporaria chensinensis David雌蛙的输卵管，经采制干燥而得。 4 原理 通过长白山林蛙油高效液相色谱中的特征峰鉴别长白山林蛙油。 5 试剂或材料 除特别说明外，所有试剂均为分析纯。 5.1 无水乙醇（C 2H5OH）。 5.2 二氯甲烷（CH 2Cl2）。 5.3 甲醇（CH 3OH）。 5.4 胆固醇对照品（供鉴别用）（C 27H46O)。 5
4、.5 色谱乙腈（C 2H3N）。 6 仪器设备 6.1 天平（感量 0.00001 g）。 6.2 粉碎机（50 HZ60 HZ）。 DB22/T 2908 2018 2 6.3 40 目筛。 6.4 圆底烧瓶（100 mL）。 6.5 量筒（50 mL）。 6.6 水浴锅。 6.7 普通漏斗（100 mL）。 6.8 滤纸。 6.9 圆底烧瓶（250 mL）。 6.10 旋转蒸发仪。 6.11 循环水式真空泵。 6.12 容量瓶（2 mL）。 6.13 微孔滤膜（0.45 m）。 6.14 容量瓶（100 mL）。 6.15 高效液相色谱仪。 6.16 十八烷基键合硅胶色谱柱（4.6 mm2
5、50 mm，5 m）。 7 样品 符合GB/T 19507要求的长白山林蛙油。 8 试验步骤 8.1 试样制备 取干燥长白山林蛙油适量（6.1），粉碎（6.2），过40目筛（6.3），置于室温下保存备用。 8.2 供试品溶液制备 8.2.1 精密称定上述粉末约 3 g（6.1），置于 100 mL 圆底烧瓶（6.4）中，加入无水乙醇（5.1）40 mL （6.5），80 水浴回流提取 15 min（6.6），放冷，过滤（6.7，6.8），滤渣再同法提取 2 次，合并 滤液（6.9），减压回收乙醇（6.10，6.11），得提取物。 8.2.2 取上述提取物（8.2.1），加入适量二氯甲烷（5.2
6、）溶解，并转移至 2 mL 的容量瓶（6.12）中， 挥干，加甲醇（5.3）定容至刻度，摇匀。用 0.45 m 微孔滤膜（6.13）滤过，取续滤液，即得供试品 溶液。 8.3 对照品溶液制备 精密称取胆固醇对照品（5.4）约10 mg（6.1），置于10 mL容量瓶中（6.14），加甲醇溶解并定容 至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液。 8.4 试验条件 高效液相色谱仪（6.15），十八烷基键合硅胶色谱柱（6.1 6）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯度 洗脱（5.5，5.6），洗脱条件见表1；检测波长：215 nm；柱温：30 ；进样量：5 L。 表1 流动相洗脱条件 DB22/T
7、2908 2018 3 时间 min 流动相 A % 流动相 B % 流速 mL/min 020 0 100 1 2027 012 10088 2 2729 76 24 2 2940 76 24 0.5 4055 7685 2415 1 5563 85100 150 2 6380 100 0 2 8.5 试样测定 分别精密吸取对照品溶液5 L（8.3）、供试品溶液5 L（8.2），注入高效液相色谱仪（6.15）， 按“8.4”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。 9 试验数据处理 供试品图谱中应有10个特征峰，与对照品参照物峰相应的峰为S峰（见附录A 图A,1），计算各特征 峰与S峰的相对保留时
8、间，其相对保留时间应在规定值的10%之内。规定值为：0.10（峰1）、0.24（峰 2）、0.28（峰3）、0.38（峰4）、0.67（峰5）、0. 68（峰6）、0.71（峰7）、0.73（峰8）、0.74（峰 9）、1.00（峰S）（见附录A 图A.2）。 积分参数 斜率灵敏度为1.2；峰宽为0.1 ；最小峰面积为1.1；最小峰高为0.2。 10 试验报告 试验报告应包括下列内容： a) 本标准的名称和编号； b) 样品的详细信息； c) 试验条件； d) 试验结果； e) 在试验过程中观察到的任何异常现象； f) 试验日期。 DB22/T 2908 2018 4 A A 附 录 A （规范性附录） 对照品图谱和对照特征图谱 图A.1和图A.2给出了对照品图谱和对照特征图谱。 图A.1 对照品图谱 峰 S：胆固醇 图A.2 对照特征图谱 峰 S：胆固醇 _
