1、ICS 65.120 B 46 备案号： 53561-2017 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1164 2017 饲草中中性洗涤纤维瘤胃液体外 30小时降 解率的测定 A method to assess 30-h ruminal in vitro neutral detergent fiber degradability of the forage 2017-02-25发布 2017-05-25实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15/T 1164 2017 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 .
2、 1 4 试剂 . 1 5 仪器和设备 . 2 6 试样 . 2 7 分析步骤 . 2 8 测定结果的计算 . 3 DB15/T 1164 2017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古 自治区 农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古 自治区农牧业厅归口。 本标准起草单位：内蒙古 自治区 农牧业科学 院。 本标准主要起草人：孙海洲、金鹿、桑丹、李胜利、张春华、张崇志、凌树礼、任晓萍、珊丹 、 艳 城 、谷英、刘志友、斯登丹巴、王美秀 。 DB15/T 1164 2017 1 饲草中中性洗涤纤维瘤胃液体外 30小时降解率的测定 1 范围 本标准规定了
3、 饲草中中性洗涤纤维瘤胃液体外 30小时降解率的测定 方法 。 本标准适用于 单一 饲草 、混合 饲草 和青贮 饲料 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3358.1 统计学词汇及符 号 第 1部分：一般统计术语与用于概率的术语 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维 (NDF)的测定 3 术语 和 定义
4、 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 中性洗涤纤维 Neutral Detergent Fiber 用中性洗涤剂去除 饲草 中的脂肪、淀粉、蛋白质和糖类等成分后，残留的不溶解物质的总称。 3.2 中性洗涤纤维 体外降解率 The Degradability of Neutral Detergent Fiber In Vitro 瘤胃 液体外降解的饲草中中性洗涤纤维 含量占 饲草原样中中性洗涤纤维 含量的百分比。 3.3 相对 相差 Relative Difference 重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值与算术平均值的比值 。 4 试剂 4.1 如无特别说明，所用试剂均为分析纯。 4
5、.2 本 标准 所用 水 ， 一律指 GB/T 6682 中三级水 。 4.3 丙酮（ 100 %）。 DB15/T 1164 2017 2 4.4 缓冲 液 A：将 10.00 g K2HPO4、 0.50 g MgSO47H 2O、 0.50 g NaCl、 0.10 g CaCl22H 2O和 0.50 g 尿素加入到 1000 ml的容量瓶中，用蒸馏水定容。 4.5 缓冲 液 B：将 15.00 g Na2CO3和 1.00 g Na2S9H 2O 加入到 1000 ml的容量瓶中，用蒸馏水定容。 4.6 3 %十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液：称取 18.60 g 乙二胺四乙酸二钠
6、（ C10H14N2O8Na2 2H2O） 和 6.80 g四硼酸钠 （ Na2P4O7 10H2O） 加入到 100 mL 烧杯中，加少量水加热溶解后，再加入 30.00 g 十二烷基硫酸钠 (C12H25NaSO4)和 20 mL 乙 二醇乙醚。称取 4.65 g 无水 磷酸氢二钠（ Na2HPO4） ，置于另一 烧杯中，加少量水，微微加热溶解后倒入第一个烧杯中，稀释至 1000 mL。 5 仪器和设备 5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。 5.2 瘤胃液取样器（ 长 30 cm 内径 12.70 mm PPR管）。 5.3 分析天平（ 分度值 0.0001 g）。 5.4 烘 干 箱（室温
7、 300 ）。 5.5 磁力搅拌器（转速为 100 r/min 1400 r/min）。 5.6 纤维袋（ ANKOM F57， 25 m 孔隙） 。 5.7 封口机。 5.8 体外模拟培养箱（ ANKOM DAISY 型，美国） 。 5.9 纤维分析仪（ ANKOM 220P，美国） 。 5.10 量筒（ 100 mL和 1000 mL） 。 6 试样 6.1 取样 按 GB/T 14699.1 进行 采样。 6.2 制备 样品根 据 GB/T 20195 制备，置于 烘箱内于 65 烘干 ，研磨 ， 过 1 mm筛 。 7 分析步骤 7.1 瘤胃液的制备 选择 健康、体重接近的 3 头 装
8、有永久性瘤胃瘘管的供体羊 (牛 )，单独饲养。 在晨饲前经瘤胃瘘管 利 用 瘤胃液取样器 采集 3 头供试羊（牛）的瘤胃液 1500 mL 2000 mL,转 入预热至 39 的保温容器中 , 混合均匀后经 4层纱布过滤 ,同时通入 CO2气体，然后量取试 验所需体积的瘤胃液备用。 7.2 体外消化步骤 7.2.1 消化 称取 0.5000 g样品放置于纤维袋中， 平行样 封口后平铺放置于体外 模拟 培养箱中消化罐的分隔板两 侧。取两个容器分别加入 266 mL缓冲液 B和 1330 mL缓冲液 A，于 39 条件下调节其 pH达到 6.80。于每个 消化罐中加入 1600 mL混合缓冲溶液后
9、放置于体外 模拟 培养箱中，打开加热和转动开关，使消化罐的温 DB15/T 1164 2017 3 度在 20 min 30 min内达到平衡。取出消化罐 加入提前预处理好的 400 mL瘤胃液，持续通入 CO2然后盖 紧盖子 ， 置于体外 模拟 培养箱 中连续培养 30 h。 7.2.2 洗涤 培养完毕后 取出消化罐倒掉液体，再将纤维袋取出，用流动的自来水冲洗干净。 7.2.3 干燥 将纤维袋 置 于 105 烘箱中烘 干 6 h，放入干燥器中冷却 30 min后，称重。然后再烘 干 30 min， 再 冷却称重，直至 两次 称 重 之差 小于 0.0020 g为 恒重。 7.3 中性洗涤纤
10、维含量的测定 原样样品和残渣样品中 中性洗涤纤维 含量按照 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维 (NDF)的测定 进行 。 8 测定结 果的计算 8.1 样品中中性洗涤纤维含量以质量分数 (%)表示，按式（ 1）计算。 Y =（ W3-W2） /W1100 （ 1） 式中： Y 代表样品中中性洗涤纤维的含量，单位为百分比 (%)； W1 样品的重量， 单位为克（ g） ； W2 纤 维袋的重量， 单位为克（ g） ； W3 洗涤后样品和纤维袋的重量， 单位为克（ g） 。 8.2 样 品 中 中性洗涤纤维体外降解率 以质量分数（ %）表示，按式（ 2）计算。 Z=（ W4-W5） /W4100 （ 2） 式中： Z 代表样品在 30 h 时间点的 中性洗涤纤维 瘤胃液体外降解率，单位为百分比 (%)； W4 代表 原样 样品中中性洗涤纤维的重量，单位为克（ g）； W5 代表经过 30 h体外降解后残渣样品中中性洗涤纤维的重量， 单位为克（ g） 。 8.3 取两次测定结果的算数平均值， 计算结果 保留 2 位小数点。 8.4 根据 GB/T 3358.1，在重复条件下同一样品 同时两次平行测定所得结果 相对相差 10 %。 _
