1、ICS 65.020.01 B 16 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1919 2020 马铃薯黑痣病室内抗性鉴定技术规程 Technique Standards for Resistant Identification of Stem Canker and Black Scurf by Rhizoctonia Solani in Potato in Room 2020-06-28 发布 2020-07-28 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 1919 2020 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古农
2、业大学提出。 本标准由 内蒙古自治区马铃薯生产与种植标准化技术委员会（ SM/TC42）归口 。 本标准起草单位：内蒙古农业大学、 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 、乌兰察布市农牧 业科学研究院 。 本标准主要起草人：张笑宇、于卓、李得宙 、于肖夏、卢艳丽、王凤梧、张冬梅、李宇晨、刘雨薇、 王野、冯亚艳、王丽玮、邢星。 DB15/T 1919 2020 马铃薯黑痣病室内抗性鉴定技术规程 1 范围 本 标准 规定了 室内条件下马铃薯抗黑痣 病鉴定 材料的选择与鉴定方法 。 本 标准 适用于 马铃薯 品 种（系 ）在室内条件下对黑痣病 抗性水平 的 鉴定。 2 鉴定材料 2.1 马铃薯 选
3、用抗病品种底西芮、感病品种大西洋、被鉴定品种（材料）的块茎和组培苗。 2.2 病原菌 选用 从 内蒙古 自治区 马铃薯主 要种植 区发病植株上分离得 到 的 黑痣病 致病菌株。 2.3 培养基 PDA培养基 、 改良的 Richard培养基 、 MS培养基。 3 鉴定方法 3.1 薯片接菌法 3.1.1 PDA 培养基制备 将马铃薯去皮切成 2 cm2 3 cm2的小块，取 200 g加入 1000 mL水，在锅内煮 20 min 30 min， 至 马铃薯软而不烂时 ，用 2层纱布过滤，滤液加入琼脂粉 15 g 18 g，加热搅拌至融化，再加葡萄糖 20 g搅拌溶解，然后定容至 1000 m
4、L，分装到三角瓶内， 121 高压湿热灭菌 20 min，冷却至室温备用。 3.1.2 病原菌活化 将保存的黑痣病 病原菌取小块放置 PDA平板 中央，放 25 恒温培养箱中培养 进行活化。 3.1.3 操作方法 灭菌。将健康的马铃薯块茎用自来水洗净，再用 0.5 %的 KMnO4溶液进行灭菌 20 min； 切片。将灭菌马铃薯 无菌操作切成厚约 0.6 cm的薯片，放在装有 2层湿润滤纸（加 10 mL 无菌蒸馏水）的培养皿中 ； 接种。 将在 PDA 培养基上培养 4 d的马铃薯黑痣病菌 菌饼（直径 0.5 cm）倒放在薯片中央， 每个薯片接 1个菌饼，每份材料处理 20片 ； 培养。接种
5、后的马铃薯片 置 25 恒温培养箱内 黑 暗培养 。 DB15/T 1919 2020 2 3.1.4 调查和抗性评价 接种的马铃薯片 培养 48 h，用 十字交叉法测量病斑直径，计算病斑面积，根据病斑面积大小评 价马铃薯材料的抗病性。 评价标准如下： 病 斑面积为 0.00 免疫（ I）； 病斑面积为 0.01 0.50 高抗（ HR）； 病斑面积为 0.51 1.00 中抗（ MR）； 病斑面积为 1.01 2.0 中感（ MS）； 病斑面积为大于 2.0 高感。 3.2 组培苗接种法 3.2.1 改良的 Richard 培养基制备 取 KNO3 10 g、 KH2PO4 5 g、 MgS
6、O47HO 2 2.5 g、 Fe2(SO4)3 0.02 g、 蔗糖 50 g加蒸馏水 1000 mL搅 拌溶解，调 pH 7.0，分装于 250 mL三角瓶中 ，每瓶 50 mL， 121 高压湿热灭菌 20 min，冷却至室温 备用。 3.2.2 毒素的制备 病原菌培养 。 将活化的马铃薯黑痣病菌在 PDA培养基上培养 4 d； 接种 。 用打孔器打取病原菌菌饼（直径 0.5 cm），接种到盛有 50 mL 改良的 Richard产毒 培养基的 250 mL 三角 瓶中，每瓶 5个； 培养 。 将接种后的三角瓶置 25 恒温培养箱内黑暗培养 20 d，每日人工手动振荡 1次； 处理 。
7、培养结束后，将培养液于 8000 r/min 离心 15 min，用定性滤纸过滤，滤液按 0.4 % 的比例加入琼脂粉，都分装于 18 cm 1.8 cm 的试管中，每试管 12 mL，于 115 灭菌 20 min，即为病原菌毒素。 3.2.3 操作 方法 接种 。 选取在 MS 培养基上培养 12 cm 左右长势一致的不同品种马铃薯脱毒组培苗，将组 培苗无菌操作移入装有毒素的试管中，每试管 1 株，共 20 株，重复 3 次； 培养 。 将接种的不同 材料组培苗于 4000 lx、 25 光照培养箱中培养，光照 16 h/d，培养 8 d。 3.2.4 病情调查和抗性评价 3.2.4.1
8、将培养 8 d 的马铃薯组培苗按下列病情分级标准进行病情调查，计算病情指数和相对抗病 指数，根据相对抗病指数进抗性行评价。 3.2.4.2 脱毒苗病情分级标准： 0 茎部没有溢缩坏死，叶片没有萎蔫； 1 茎部溢缩坏死长度占地下茎长 1 % 5 %，个别叶片变黄； 2 茎部溢缩坏死长度占地下茎长 6 % 25 %， 1/4叶片萎蔫枯死； 3 茎部溢缩坏死长度占地下茎长 26 % 50 %， 1/4 2/4叶片萎蔫 枯死； 4 茎部溢缩坏死长度占地下茎长 51 % 75 %， 2/4 3/4叶片萎蔫枯死； 5 茎部溢缩坏死长度占地下茎长 76 % 100 %， 3/4以上叶片萎蔫枯死。 DB15/T 1919 2020 3.2.4.3 病情指数和相对病情指数计算 公式如下： 病情指数 DI= （各级病株数 该病级代表数值） /（调查总株数 最高级代表数值） 100 （ 1） 相对抗病指数 =1-所测品种病情指数 /发病最重品种病情指数 （ 2） 3.2.4.4 相对抗病指数评价标准： 1 免疫（ I）； 0.99 0.80 高抗（ HR）； 0.79 0.50 中抗 （ MR）； 0.49 0.20 中感（ MS）； 0.19 0.00 高感（ HS）。 _
