1、ICS 65.020.01 B 10 备案号： 59985-2018 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1476 2018 液相色谱 -串联质谱法 测定土壤及马铃薯中 9 种种衣剂的残留量 Detection of 9 seed-coating agents residues from seed coating reagent in soil and potato by LC-MS-MS 2018-08-15 发布 2018-11-15 实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15/T 1476 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给
2、出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区农业标准化技术委员会 （ SAM/TC20） 归口。 本标准起草单位： 内蒙古 自治区 农牧业科 学院 。 本标准起草人： 张福金、张欣昕、姚一萍、李国银、 王雪娇、尹鑫、李秀萍、崔艳、骆洪。 DB15/T 1476 2018 1 液相色谱 -串联质谱法 测定土壤及马铃薯中 9 种种衣剂的残留量 1 范围 本标准规定了土壤和马铃薯中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜 灵和甲基托 布 津残留量的液相色谱 -串联质谱的测定方法 。 本标准适用于土壤中和马铃薯中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉
3、、嘧菌酯、戊唑醇、甲 霜灵和甲基托 布 津残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜的取样法 NY/T 52 土壤水分测定法 NY/T 1121.1 土壤检测 第 1部分：土壤样品的采集、处理和贮存 3 原理 试样中 种衣剂 残留物经乙腈提取，用键合硅胶吸附剂固相分散剂净化后，用液相色谱 -串联质谱进 行测定 ，外标法定量 。 4 试剂和材料 4.1 除另有
4、规定外 , 本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 乙腈：色谱 纯 4.3 甲酸：色谱 纯 4.4 氯化钠：分析 纯 4.5 无水硫酸镁：分析级，研磨后在 500 马弗炉内烘干，置于干燥器中保存。 4.6 0.1 % 甲酸溶液（体积分数）： 取 0.1 mL 甲酸加水稀释至 100 mL。 4.7 0.1 % 甲酸水 -甲醇溶液（ 90+10，体积比）。 4.8 标准品 DB15/T 1476 2018 2 噻虫嗪、多菌灵、克百威、 3-羟基克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托不 津标准品：纯度大于 98 % 4.9 标准溶液 4.9.1
5、标准储备液 准确称取适量的噻虫嗪、多菌灵、克百威、 3-羟基克 百威灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜 灵和甲基托布津标准品，用甲醇分别配制成 100 mg/L的标准储备液，保存于 -18 冰箱内，可使用 6个 月 。 4.9.2 混合标准 储备 液 分别准确吸取 1.00 mL 噻虫嗪、多菌灵、克百威、 3-羟基克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑 醇、甲霜灵和甲基托布津标准储备液至 10 mL容量瓶内，用甲醇稀释定容至刻度，配制成 10 mg/L的混 合标准储备液，于 -18 冰箱内避光保存，可使用 3个月 。 4.9.3 基质混合标准工作液 根据需要，用阴性样品基质系列稀释混合标准工作
6、液，使用前临时配制 。 4.10 键合硅固 相萃取吸附剂： C18， 15 mm ； PSA， 0.15 mm。 4.11 微孔过滤膜（尼龙）： 13 mm 0.2 m。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱 -串联质谱联用仪： 配有电喷雾离子源 （ ESI）。 5.2 分析天平： 感量 0.01 mg 和 0.01 g。 5.3 离心机：转数 6000 r/min 以上。 5.4 涡旋混合器。 6 试样制备和保存 按照 NY/T 1121.1 中有关规定采集土壤，去杂质后充分混匀，保存在 -18 冷 冻冰箱中。按照 NY/T 52 标准要求，取新鲜土壤， 1052 烘干冷却称重，测定土壤的水
7、分含量 （ a）， 在计算时土壤换算 至 烘干的水分换算系数 F（ F=1-a） 。 按照 GB/T 8855 标准要求， 取 样的马铃薯样品切碎、混匀、匀浆、密封，作为试样。将试样保存在 -18 冷冻冰箱中 。 7 测定步骤 7.1 提取 7.1.1 马铃薯样品 DB15/T 1476 2018 3 称取 10 g试样 (精确到 0.01 g)于 50 mL离心管中，加入 10.0 mL乙腈（ 4.1），涡旋振荡 0.5 min，超 声提取 10 min，再加入 1 g氯化钠（ 4.3）， 4 g无水硫酸镁（ 4.4），涡旋混合 1 min后，以 6000 r/min 的转速离心 5 min
8、，取上层有机相净化 。 7.1.2 土壤样品 称取 10 g新鲜试样 (精确到 0.01 g)于 50 mL离心管中，加入 10.0 mL乙腈（ 4.1）和 5 mL水，涡旋振 荡 0.5 min，超声提取 10 min，再加入 1 g氯化钠（ 4.3）， 4 g无水硫酸镁（ 4.4），涡旋混合 1 min后， 以 6000 r/min的转速离心 5 min，取上层有机相净化 。 7.2 净化 7.2.1 马铃薯样品 移取提取液 2 .00 mL于 5 mL离心管中，加入 150 mg无水硫酸镁（ 4.4）， 50 mg C18（ 4.9），涡旋 混合 1 min后，以 6000 r/min的
9、转速离心 1 min。取上清液，用 0.1 %的甲酸水 -甲醇溶液（ 4.6）稀释定 容至 5.0 mL，过 0.2 m微孔过滤膜，待测。 7.2.2 土壤样品 移取提取液 2 .00 mL于 5 mL离心管中，加入 150 mg无水硫酸镁（ 4.4）， 25 mg C18（ 4.9）， 25 mg PSA（ 4.9）。涡旋混合 1 min后，以 6000 r/min的转速离心 1 min。取上清液，用 0.1% 的甲酸水 -甲醇溶 液（ 4.6）稀释定容至 5.0 mL，过 0.2 m微孔过滤膜，待测。 7.3 阴性样品提取液的制备 取不含待测物的阴性马铃薯和土壤样品，按 7.1和 7.2步
10、骤制备阴性样品提取液，用于配制基质混合 标准工 作液 。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱 -质谱法测定条件 具体如下 : a) 色谱柱： C18， 100 mm 2.1 mm（内径），粒径， 1.7 m； b) 流动相： A： 0.1 %甲酸 溶液 （ 4.5） ， B：乙腈 （ 4.1） ，梯度洗脱见表 1； 表 1 梯度洗脱表 时间 / min 流速 /（ mL/min） A / % B / % 0.00 0.35 90 10 2.00 0.35 70 30 3.00 0.35 10 90 5.50 0.35 10 90 6.50 0.35 90 10 c) 柱温： 40 ； d) 进
11、样量： 1 L； e) 离 子源： 电喷雾（ ESI） ； f) 扫描方式：正离子扫描模式 ； DB15/T 1476 2018 4 g) 检测方式：多反应监测（ MRM） ； h) 电离电压： 2500 V； i) 离子源温度： 120 ； j) 雾化温度： 450 ； k) 锥孔气流速： 50 L/h； l) 雾化气流速： 650 L/h； m) 待测物 保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量见表 2。 表 2 9 种种衣剂保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量 待测物名称 保留时间 min 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞电压 V 噻虫嗪 2.15
12、291.9211.0 291.9131.8 291.9211 15 12 30 多菌灵 1.41 192.1132.1 192.1160.1 192.1160.1 25 30 15 克百威 3.33 222.2123.1 222.2165.1 222.2165.1 25 20 12 3-oh 克百威 2.53 238.3163.2 238.3181.2 238.3181.2 20 15 10 灭多威 1.88 163.088.2 163.0106.1 163.088.2 5 8 10 吡虫啉 2.61 256.1175.1 256.1209.2 256.1209.2 25 20 20 嘧菌酯
13、3.60 404.1344.1 404.1372.1 404.1372.1 25 24 15 戊唑醇 3.71 308.170.1 308.1124.9 308.170.1 20 20 30 甲霜灵 3.43 280.0192.0 280.0220.0 280.0192.0 20 10 20 甲基托布津 3.24 343.1150.9 343.1311.1 343.1150.9 25 20 15 7.4.2 定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果样品中待测物质的色谱峰保留时间与标准品色谱峰保留时 间相差在 2.5% 以内，且样品色谱图中定性离子的相对离子丰度与浓度相近的基质标准工作液色
14、谱图 中对应的定性离子相对丰度进行比较，相对偏差不超过表 3 规定的范围，则可判定样品中存在该种待测 物。 表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差（ %） 相对离子丰度 K 50 20 K 50 10 K 20 K10 允许最大偏差 20 25 30 50 7.4.3 定量测定 DB15/T 1476 2018 5 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作 液（ 4.8.3）进行色谱分析，以峰面积为纵坐标，基 质混合标准工作液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，基质混合标准工 作液和试样中响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下，基质混合标准工作液
15、中 的各特征离子多反应监测（ MRM）色谱图参见附录 A中的图 A.1。 7.5 空白实验 按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定 。 7.6 空白试验 除不称取试样外，均按上述分析步骤进行。 8 结果计算 试样中待测组分的测定结果可由仪器工作软件计算，马铃薯样品中待测组分可按式（ 1）计算，土 壤样品中待测组分可按 式按式（ 2）计算： 1000100021 VVmVcX （ 1） 式中： X 试样中待测组分残留量， g/kg； c 从标准曲线得到的试样中待测组分的浓度， g/L； V 试样溶液定容体积， mL； V1 试样溶液提取体积， mL； V2 试样溶液分取体积， mL； m 试样的
16、质量， g； FVVmVcX 1000100021 （ 2） 式中： X 试样中待测组分残留量 ， g/kg； c 从标准曲线得到的试样中待测组分的浓度， g/L； V 试样溶液定容体积， mL； V1 试样溶液提取体积， mL； V2 试样溶液分取体积， mL； m 试样质量， g ； F 土壤水分换算系数； 计算结果应扣除空白值，保留两位有效数字。 9 检出限、回收率和精密度 9.1 检出限 DB15/T 1476 2018 6 本标准土壤试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托 布津残留量的检出限和定量限参见附录 B中的 表 B.1。 本标准马铃薯试样
17、中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、 吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基 托布津残留量的检出限和定量限参见附录 B中的 表 B.2。 9.2 回收率 在 10 200 g/kg 添加浓度范围内，本标准土壤试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫 啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的检出限和定量限参见附录 C中的 表 C.1；本标准马铃 薯试样中噻虫嗪、多菌灵、克百威、灭多威、吡虫啉、嘧菌酯、戊唑醇、甲霜灵和甲基托布津残留量的 平均回收率参见附录 C中的 表 C.2。 9.3 精密度 在实验室内重复性条件下获得的两次独立测定 结果的绝对差值不超过算数平均值 10 %，在 实验室间 再
18、现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的 20 %。 DB15/T 1476 2018 7 A A 附 录 A （资料性附录） 9 种种衣剂多反应监测（ MRM）色谱图 9种种衣剂多反应监测（ MRM）色谱图 A.1如下 。 1.噻虫嗪 2. 多菌灵 3.1 克百威 3.2 3-羟基克百威 4. 灭多威 5. 吡虫啉 6. 嘧菌酯 7. 戊唑醇 8. 甲霜灵 9. 甲基托不津 图 A.1 9种种衣剂多反应监测（ MRM）色谱图 DB15/T 1476 2018 8 B B 附 录 B （资料性附录） 9 种种衣剂检出限和定量限数据表 马铃薯和土壤中 9种种衣剂检出限和定量限
19、数据表见表 B.1和表 B.2。 表 B.1 马铃薯中 9种种衣剂中文与英文名称、方法检出限和定量限数据 序号 中文名称 英文名称 检出限 g/kg 定量限 g/kg 1 噻虫嗪 thiamethoxam 1.5 15 2 多菌灵 carbendazim 1.7 17 3 克百威 carbofuran 1.2 12 3-羟基克百威 3- carbofuran 1.0 10 4 灭多威 methomyl 1.5 15 5 吡虫啉 Imidacloprid 0.50 5.0 6 嘧菌酯 azoxystrobin 1.0 10 7 戊唑醇 tebuconazole 0.9 9.0 8 甲霜灵 met
20、alaxyl 1.4 14 9 甲基托布津 thiophanate-Methyl 0.50 5.0 表 B.2 土壤中 9种种衣剂中文与英文名称、方法检出限和定量限数据 序号 中文名称 英文名称 检出限 g/kg 定量限 g/kg 1 噻虫嗪 thiamethoxam 2.5 25 2 多菌灵 carbendazim 3.8 38 3 克百威 carbofuran 2.1 21 3-羟基克百威 3- carbofuran 2.6 26 4 灭多威 methomyl 1.8 18 5 吡虫啉 Imidacloprid 2.3 23 6 嘧菌酯 azoxystrobin 3.5 35 7 戊唑醇
21、tebuconazole 0.8 8.0 8 甲霜灵 metalaxyl 2.6 26 9 甲基托布津 thiophanate-Methyl 1.4 14 DB15/T 1476 2018 9 C C 附 录 C （资料性附录） 9 种种衣剂回收率数据表 马 铃薯和土壤中 9种种衣剂回收率数据，见表 C.1和 C.2。 表 C.1 马铃薯中 9种种衣剂添加浓度及平均回收率数据 序号 名称 添加浓度 g/kg 平均回收率 % 添加浓度 g/kg 平均回收率 % 1 噻虫嗪 20 89.2 100 95.4 2 多菌灵 20 88.0 100 103 3 克百威 20 90.0 100 98.2
22、3-羟基克百威 20 76.0 100 89.8 4 灭多威 20 80.9 100 101 5 吡虫啉 20 92.5 100 101 6 嘧菌酯 20 91.2 100 103 7 戊唑醇 20 98.7 100 105 8 甲霜灵 20 88.2 100 107 9 甲基托布津 20 82.1 100 91.0 表 C.2 土壤中 9种种衣剂添加浓度及平均回收率数据 序号 名称 添加浓度 g/kg 平均回收率 % 添加浓度 g/kg 平均回收率 % 1 噻虫嗪 20 78.1 100 92.7 2 多菌灵 20 87.0 100 95.7 3 克百威 20 88.0 100 95.8 3-羟基克百威 20 85.2 100 94.8 4 灭多威 20 82.4 100 93.0 5 吡虫啉 20 86.1 100 95.5 6 嘧菌酯 20 87.3 100 99.6 7 戊唑醇 20 91.4 100 102 8 甲霜灵 20 83.5 100 94.4 9 甲基托布津 20 75.3 100 91.2 _
