1、ICS 65.020.20 B 31 备案号： 51187-2017 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1058 2016 平菇菌种制作技术规程 Regulation of Strain Manufacture for Pleurotus Mushrooms 2016 - 09 - 25 发布 2016 - 12 - 25 实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15/T 1058 2016 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则编写。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出 。 本标准由内蒙古自治区农牧业厅归口。 本标准起草单位：内蒙古自
2、治区农牧业科学院。 本标准主要起草人：庞杰、孙国琴、王勇、王海燕 、张立华、康立茹 、 解亚杰 、于静 、 孟虎 、 乔慧蕾、李亚娇 。 DB15/T 1058 2016 1 平菇菌种制作技术规程 1 范围 本 标准 规定了制作平菇（ Pleurotus ostreatus）母种、原种和栽培种有关的定义、制作技术流程 要点等。 本 标准 适用于的平菇（ Pleurotus ostreatus）母种、原种和栽培种 制作 ，也适用于该属的紫孢侧 耳（ Pleurotus sapidus）、小平菇（ Pleurotus cornucopiae）、凤尾菇（ Pleurotus pulmonariuss
3、）、 佛罗里达平菇（ Pleurotus florida）母种、原种和栽培种制作要求。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 9688 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准 GB/T 23189-2008 平菇 NY/T 1731 食用菌菌种 良好作业规范 NY/T 1742 食用菌菌种 通用技术要求 3 术 语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 平菇 pleurotus mushroons 平菇，隶属于担子菌门（ Basiduomycota
4、）、伞菌目（ Agaricales）、侧耳科（ Plenrotaceae）、 侧耳属（ Pleurotus） 的木腐菌 。 GB/T 23189-2008，定义 3.1 3.2 菌种 spawn 通过生产试验验证具有特异性、均一性和稳定性，丰产性好、抗性强的平菇菌株或品种，培养生长 在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 3.3 母种 stock culture 经各种方 法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物， 以玻璃试管或培养皿为培养 容器和使用单位，也称为一级种、试管种。 3.4 DB15/T 1058 2016 2 原种 pre-culture spa
5、wn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶）或（ 12 17） cm（ 22 28） cm（ 0.04 0.05） mm聚丙烯塑料袋为容器。也称为二级种。 3.5 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（ 15 17） cm （ 33 35） cm（ 0.04 0.05） mm聚丙 烯塑料袋为容器。栽培种只能用于扩大到栽培 出菇 袋或直接出菇， 不可以再次扩大繁殖菌种。也称为三级种。 3.6 固体菌种 solid spawn 以富含木质素、纤维素和 淀粉 等 天然物 为主要原料，添加适量的有机氮源和无
6、机盐类，具一定水分 含量的培养基培养的纯菌丝体。 3.7 液体菌种 liquid spawn 指采用与母种营养成份相同不加琼脂的液体培养基培养而得到的纯双核菌丝体，菌丝体在培养基中 呈絮状或球状，液体菌种可以作为原种或栽培种直接接种在培养袋中。 4 菌种生产要求 4.1 人员 生产所需要的技术人员和检验人员应经过专业培训、掌握 平菇基础知识及平菇菌种生产技术规程要 求的相应专业技术人员。 4.2 场地 、 厂房要求 平菇菌种生产 应选择 地势高，通风良好，空气清新，水源近，排水通畅，交通便利 的场所 。 300m 之内无酿造厂、无食用菌栽培场、集贸市场 、 规模养殖的畜禽舍、垃圾和粪便堆积场，
7、无污水、废气、 废渣、烟尘和粉尘等污染源。 平菇菌种生产厂房 应 有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装库。 配套有 配料室、搅拌室、装袋 （瓶）室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种 检测 室及菌种冷藏库等各环节 的设施。冷却室、接种室，培养室都要有离子净化设施。 4.3 生 产设备 平菇菌种生产 应有 粉碎机、电子秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压 灭菌 锅或常压灭菌锅、离子净化 器、超净工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、液体菌种灌 （ 30 L 250 L） 、显微镜等 设备 。 5 母种生产 5.1 培养基 见附录 A。 DB15/T 1058 2016 3 5
8、.2 容器 试管 选用 18 mm180 mm或者 20 mm200 mm；培养皿 选用 直径 7 cm 9 cm玻璃培养皿或一次性塑料培养 皿。 5.3 分装和灭菌 5.3.1 试管分装和灭菌 分装培养基至试管 1/4处，用棉塞或硅胶塞子封闭试管口，每 5支试管为 1把， 牛皮纸包棉塞，橡皮 筋扎紧，棉塞向上 放置。棉塞应采用梳棉 ，不能使用脱脂棉。在 121 124 （ 0.11 MPa 0.12 MPa） 下灭菌 25 min。 灭菌后 温度降到 （ 655 ） 时， 在空气清洁的室内摆斜面，要求 斜面长度 不超过试管长度的 2/3。 从摆好的试管中抽取 3 % 5 %的试管，在 28
9、下培养 48 h，无微生物长出为灭菌合格。 5.3.2 培养皿分装和灭菌 培养基 装入 300 ml 500 ml三角瓶至 刻度的 2/3处，用带滤膜的封口膜封口后灭菌 。培养皿用报纸包 好，同时放入灭菌锅灭菌。在 121 124 （ 0.11 MPa 0.12 MPa）下灭菌 25 min。 灭菌后 温度降到 （ 655 ） 时， 在超净工作台内将三角瓶中的培养基分装至培养皿中，培养基占 培养皿高度的 1/3 1/2。 5.4 接种 在超净工作台或接种箱内 接种 ， 接种前用紫外灭菌灯照射 30 min，之后用 75 %酒精进行表面消毒。 接菌过程 严格执行无菌操作， 接种后及时 做好标签。
10、 接种的菌块 3 mm 5 mm，接种在培养皿或试管的中部。 培养皿 需 用石腊膜密封 。 5.5 培养 温度控制在 18 26 ， 空气湿度在 75 %以下，通风 避光培养。 接种后第 3天 、 第 5天 和 长满培养基后 分别 进行检验，挑出 未活、 污染和生长不良的 不合格培养物 。 检验方式应逐个检验。 6 原种、栽培种生产 6.1 固体菌种 6.1.1 培养基 见附录 B。 6.1.2 容器 原种 采用 850 ml以下 、 瓶口直径 4 cm、 耐 126 高温的 透明瓶子 ， 或 采用 （ 12 17） cm（ 22 28） cm（ 0.04 0.05） mm的聚丙烯塑料袋。 栽
11、培种 采用同原种要求的 瓶子 ， 也可 采用 （ 15 17） cm（ 33 35） cm（ 0.04 0.05） mm的聚丙 烯塑料袋 。 以上 聚丙烯塑料袋 均要求 符合 GB 9688的要求 。 DB15/T 1058 2016 4 6.1.3 装袋（瓶） 采用装袋（瓶）机或人工进行装袋（瓶），人工装袋（瓶）需用打孔器在袋口处打孔， 孔直径 1 cm 1.5 cm深度为 8 cm 12 cm，每袋（瓶）装培养基质 500 g 600 g。 6.1.4 灭菌 培养基质装袋（瓶）后 4 h内 进行灭菌，灭菌可分为高压灭菌和常压灭菌。 高压灭菌： 组合培养 料 在 121 124 （ 0.11
12、 MPa 0.14 MPa）下灭菌 2 h；粮食培养基在 121 124 （ 0.11 MPa 0.14 MPa）下灭菌 2.5 h。 常压灭菌：在 3 h之内使灭菌温度达到 100 ，保持 100 10 h 12 h。 6.1.5 接种 原种、栽培种在超净工作台或接种箱内 接种 ，接种前 打开 紫外 灯照射 30 min，接种时用 75 %酒精对 超净工作台或接种箱进行表面擦拭消毒。 每个原种接入母种块 2 cm 3 cm；每个栽培种接种量不得少于 15 g。 菌种都应从容器开口处接种，不应打孔多点接种。 要严格按无菌操作接种，每批接种应为单一品种，如中途换品种时采用 75 %酒精对超净工作
13、台或接 种箱进行表面擦拭消毒。 6.1.6 培养 温度控制在 21 26 ， 空气湿度在 75 %以下，通风 避光培养。 6.1.7 贮存 原种和栽培 种 在 0 4 下贮存，贮存期不超过 50 d。 6.2 液体菌种生产 6.2.1 培养基 按 附录 A中规定。 灭菌 同 5.3.2。 6.2.2 三 角瓶 液体菌种生产 采用 150 ml 500 ml三角瓶，培养基添加至刻度的 2/3处， 用带滤膜的封口膜封口后灭菌 。灭菌条件 同 5.3.2。 接种量是取 3 mm 5 mm大小母种 4块 6块放进液体培养基 中 ， 培养温度 在 16 26 ，振荡频率 （ 搅拌速度 ） 140 r/m
14、in 160 r/min， 下振荡培养 3 d 6 d。 6.2.3 菌种 罐 液体菌种生产条件 6.2.3.1 装罐和灭菌 填装培养基至液体菌种罐 2/3处，按照液体菌种罐说明书要求，对液体菌种罐和液体培养基灭菌， 待液体培养基冷却至 30 以下时进行接种。 6.2.3.2 接种与 培养 将培养好的三角 瓶液体菌种接入到液体菌种罐中， 接种量为培养基总体积的 8 % 10 %，培养温度 （ 232 ） ，搅拌转速 150 r/min 160 r/min，灌压 0.04 MPa， 通风量 0.7 Nm 3/h。培养时间 3 d 5 d。 DB15/T 1058 2016 5 7 检验、入库及留
15、样 7.1 检验 7.1.1 母种感官要求 见表 1。 表 1 平菇母种感官要求 项目 要求 容器 完整、无损 、洁净 棉塞或 无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求 培养基灌入量 为试管总容积的 1/4，培养皿高的的 1/3 1/2 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满斜面 或平板 菌丝体特征 洁白、 浓密、旺健 菌丝体表面 均匀、舒展、平整 菌丝体分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀，无暗斑、无色素 7.1.2 原种感官要求 见表 2。 表 2 平菇原种感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损 、洁净 棉塞或 无棉盖体 干燥、整洁、松紧适
16、度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口 的距离 （ 505） mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 洁白浓密，生长旺健 培养物表面菌丝体 生长均匀 、 无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁 、 无干缩 菌丝分泌物 无 、 允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 7.1.3 栽培种感官要求 见表 3。 表 3 平菇栽培种感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损 棉塞或 无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋） 口的距离 （ 505） mm DB15/T 1058 2016 6 表 3（续） 项目 要求 菌 种 外
17、 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 生长均匀 、 色泽一致 、 无角变 、 无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁 、 无干缩 菌丝分泌物 无 杂菌菌落 无 子实体原基 允许少量 、 出现原 基种类 5 % 7.1.4 液体菌种感官要求见表 4。 表 4 平菇液体菌种 感官要求 项目 要求 容器 完整、无破损、无裂纹 菌丝生长量 培养基 1/2 1/3 菌丝体特征 白色至透明块状 、 生长旺健 培养基 清澈、无杂色 杂菌 无杂菌 7.2 入库 检验参照 NY/T 1742和 NY/T 1731的 要求。菌种检验完成后应及时入菌种库，详细记录各生产环节， 菌种库温度应该 0 4 ，避光，适当
18、通风但应该对空气进行杀菌处理。 平菇菌种 在库中贮存时间不应长于 50 d，贮存时间超出 50 d的母种应该进行出菇检验后再进行后续 生产。 7.3 留样 母种应留样，每批次留样 3支试管，贮存在 0 4 ，贮存至购买者购买后正常生产条件下出第 一潮菇。 DB15/T 1058 2016 7 A A 附 录 A （资料性附录） 母种常用培养基配方 A.1 新鲜无霉变的 麦粒 100 g加水 1200 ml煮沸 15 min，滤液定容至 1000 ml，加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸氢二钾（ K2HPO4） 1 g、 蛋白胨 1 g、 蔗糖 10 g、 葡萄糖 10 g、 琼脂粉
19、10 g 15 g， pH自然 。 A.2 新鲜无病去皮 马铃薯 200 g加水 600 ml煮沸 20 min，滤液定容至 500 ml；新鲜无霉变的 麦粒 100 g 加水 600 ml煮沸 15 min，滤液定容至 500 ml， 二者混合，加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸氢二钾（ K2H PO4） 1 g、 蔗糖 10 g、 琼脂粉 10 g 15 g， pH自然； A.3 新鲜无病去皮 马铃薯 200 g加水 1200 ml煮沸 20 min，滤液定容至 1000 ml， 加入硫酸镁（ MgSO4） 0.5 g、磷酸氢二钾（ K2HPO4） 1 g、 蛋白胨 1 g、 蔗糖 10 g、 葡萄糖 10 g、 琼脂粉 10 g 15 g， pH自然 。 A.4 新鲜无病去皮 马铃薯 200 g加水 1200 ml煮沸 20 min，滤液定容至 1000 ml，加入 蔗糖 20 g、 琼脂粉 10 g 15 g， pH自然。 注： 制作液体菌种培养基不加食用琼脂粉。
