1、 ICS 65.120 B 25 备案号: 233302008 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/ 4452008 科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程 Technical Guideline for Certification of Lespedeza hedysaroides（Pall.）Kitag. cv. Keerqin 2008-08-20发布 2008-10-01实施 内蒙古自治区质量技术监督局 发布 DB15 DB15/ 4452008 I 前 言 本标准的第2、第4章为强制性的，其余为推荐性的。 本标准由中国农业科学院草原研究所和中国农业大学提出，中国农业科学院草原研究
2、所负责解释。 本标准由中国农业科学院草原研究所、中国农业大学和内蒙古林西县草原工作站负责起草。 本标准主要起草人：孙启忠、韩建国、王赟文、玉柱、赵淑芬、乔玉梅。 DB15/ 4452008 1 科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程 1 范围 本标准给出了科尔沁尖叶胡枝子的品种名和来源，规定了植物学认定、幼苗认定、物候 期认定和 DNA认定方法。 本标准适用于科尔沁尖叶胡枝子的认定。 2 品种名 2.1 中文名 科尔沁尖叶胡枝子 2.2 学名 Lespedeza hedysaroides（Pall.）Kitag. cv. Keerqin 3 品种来源 科尔沁尖叶胡枝子是由中国农业科学院草原研究所、中国农
3、业大学和内蒙古林西县草原 工作站等单位，采用一次混合选择法，从内蒙古林西县野生尖叶胡枝子(Lespedeza hedysaroides（Pall.）Kitag.)群体中选出优良单株，经过多年人工栽培驯化而成。2006 年 12 月经全国草品种审定委员会审定登记为栽培品种（品种登记号：325）。品种原产地内蒙古林 西县，原种由中国农业科学院草原研究所保存。 4 植物学认定 4.1 株型 多年生草本状半灌木，直立，株型呈帚状，成熟株高85cm100cm。 4.2 根系 直根系，为表层聚积型，主要分布在20cm土层内。 4.3 枝条 1 年生枝条基部粗 0.5mm以下。2 年及 2 年生以上主枝基部
4、粗 1.3mm3.5mm，分枝为 27 个；主枝中下部侧枝较多，为 1558 个，长度25 cm48cm，与主枝呈 2535夹角。 4.4 叶片 羽状3出复叶，个别植株羽状45出复叶，托叶刺芒状，叶片条状长圆形，小而密，开 花前叶色呈黄绿色，花后稍暗。顶生小叶较大，椭圆状或长矩圆状披针形，长20mm25mm， 宽6mm7mm。叶脉伸出呈短刺尖，主叶脉凹陷。 4.5 花序 总状花序腋生，长于叶片，每花序 35 小花，小花较小，部分小花直接生于叶腋处。 总花梗和小花梗较短。花冠蝶形白色，旗瓣中央和龙骨瓣顶端为紫色。萼浅杯状，披针形， 顶端渐尖，较萼筒长。 DB15/ 4452008 2 4.6 果
5、实 荚果包于萼内，倒卵形或椭圆形，先端有宿存花柱，腹缝线略长于背缝线，伏生白柔毛， 内含种子1粒。种子椭圆形或卵形，黄色、紫色或具紫色、淡紫色斑纹，千粒重1.57g1.84g。 5 幼苗认定 子叶出土后呈长椭圆形、绿色、肉质，生长缓慢；真叶 45 片后生长加快，叶片黄绿 色。当年基部不分枝，主枝上分生侧枝较多，株高 30 cm40cm。 6 物候期认定 在原产地 5月下旬播种，6月初出苗，20d左右苗齐，6 月下旬至 7月上旬进入分枝期， 8 月上旬现蕾，中下旬少量开花，8 月下旬至 9 月上旬有少量植株结实，9 月中旬少数种子 成熟。翌年，5 月初开始萌动、下旬返青，6 月中下旬开始现蕾，7
6、 月下旬至 8 月上旬为开 花期，8 月下旬至 9月初为结实期，9 月中下旬种子成熟。生育期 115d120d。 7 DNA认定 7.1 实验仪器 PCR扩增仪；电泳仪；紫外分光光度计；多通道分子成像系统。 7.2 取样与保存 在开花期分单株采集嫩叶，样品置于液氮中，于实验室-20保存。 7.3 DNA提取 用DNA提取试剂盒提取总DNA，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。 7.4 ISSR反应体系及程序 7.4.1 ISSR反应体系 总体积20L，含有约40ng基因组DNA，0.2 mol/L引物，10L 2Taq PCR MasterMix0.1U /LTaq Polymerase，5
7、00M dNTP each ，20mM Tris-HCl(pH8.3)，100 mM KCl，3 mM MgC12)，用ddH2O补充体积至20L。 6.4.2 PCR扩增程序 94充分变性5min，然后进行35个循环：94变性30 s，50或52(根据引物而定)退 火45s，72延伸1.5 min，最后72延伸7 min，4终止反应（表1）。PCR产物在0.8琼脂 糖凝胶上电泳分离，核酸染料染色显带，多通道分子成像系统成像并观察。 DB15/ 4452008 3 表1 所用的ISSR引物序列和退火温度 引 物 序 列 退火温度/ UBC-812 (GA)8A 50 UBC-809 (AG)8G 52 UBC-811 (GA)8C 52 UBC-825 (AC)8T 52 UBC-827 (AC)8G 50 UBC-880 (GGAGA)3 50 UBC-842 (GA)8YG 52 UBC-824 (TC)8G 50 注：Y=C/T. 7.5 特异条带 用UBC-880引物或者扩增后，在500bp600bp处出现一清晰明显的特异条带。
