1、ICS 65.020.20B 05 DB14山 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 15912018草莓脱毒原原种苗制备技术规程 2018 -01- 10发布 2018- 03-10实施山西省质量技术监督局 发 布 DB14/ T 15912018 I 目 次前言 .II1 范围 .12 规范性引用文件 .13 术语和定义 .14 外植体的选择 .15 脱毒与检测 .16 茎尖的初代培养 .27 组培苗的继代扩繁 .2 8 组培苗的生根诱导 .29 组培苗的驯化移栽 .3附录 A（资料性附录） 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表 .4附录 B（资料性附录） 草莓脱毒原原种苗出圃登记表 .5
2、DB14/ T 15912018 II 前 言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西省农业科学院提出并归口。本标准起草单位：山西省农业科学院果树研究所。本标准主要起草人：刘伟、樊新萍、王国平、陈冲、霍辰思、曹贵寿、史华平、尚勇进。 DB14/ T 15912018 1 草莓脱毒原原种苗制备技术规程1 范围 本标准规定了草莓脱毒原原种苗制备的术语和定义、外植体的选择、脱毒方法、茎尖的初代培养、组培苗的继代扩繁、生根诱导及驯化移栽。 本标准适用于草莓脱毒原原种苗的制备。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标
3、准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 406 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 草莓脱毒原原种苗脱毒的草莓组培苗移栽于无草莓病源、虫源的隔离区内成活的植株。3.2 微茎尖脱毒 从匍匐茎上切取约0.2 mm茎尖分生组织接种至培养基中，分化出的组培苗可有效脱除病毒。4 外植体的选择4.1 选择标准选取健壮、无病、开花结果正常的草莓植株作为母株，采集刚抽出且叶片未展开的匍匐茎作为外植体材料。4.2 采集时期外植体宜在结果后期匍匐茎大量抽生阶段进行采集。5 脱毒与检测 5.1 脱毒方法 DB14/ T 1591
4、2018 2 采用微茎尖脱毒法对草莓匍匐茎外植体材料进行脱毒处理。5.2 病毒检测依据 NY/T 406 的要求执行。6 茎尖的初代培养6.1 初代培养基的选择草莓茎尖初代培养的培养基为MS+ 0.5 mg/L1.0 mg/L 6-BA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。6.2 外植体消毒方法 切取匍匐茎顶端2 cm左右作为外植体进行消毒，流水冲洗0.5 h2 h。在超净工作台下，用75%酒精将外植体浸泡30 s，再用1.0%次氯酸钠消毒10 min15 min或0.1%升汞溶液消毒5 min10 min，无菌水冲洗35次。所用消毒液与外植体体积的比例约为10:1。6.3 茎尖分
5、生组织切取将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干水分。在解剖镜下用镊子将外植体顶端一层一层小心剥开，直至露出茎尖分生组织部分，用锋利的解剖刀切取约 0.2 mm 的茎尖，接种于初代培养基中。6.4 初代培养条件初始接种的茎尖暗培养 2 d，之后转置于常规培养条件下培养，培养温度 25 ，光照强度3 000 Lux 5 000 Lux，光照时间每天 14 h 16 h，相对湿度 70% 75%。茎尖组织在该培养条件下生长约 50 60 d形成幼小无根植株后即可转至继代培养阶段。 7 组培苗的继代扩繁7.1 继代培养基的选择适宜草莓继代扩繁的培养基为MS + 0.1 mg/L0.3 mg/L 6-BA +
6、 0.1 mg/L NAA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。7.2 继代过程的条件控制草莓组培苗继代培养条件为：培养温度25 ，光照强度3 000Lux5 000Lux，光照时间每天14h16 h，相对湿度70%75%。继代培养每隔3040 d 需继代一次。用于制备脱毒原原种苗的组培苗在继代次数上应控制在7次以内，总继代培养时间不宜超过一年。即草莓组培苗应在每年重新制备。组培生产过程应参照附录A.1进行详细登记。 8 组培苗的生根诱导8.1 生根培养基的选择诱导草莓生根的培养基为1/2MS + 0.1 mg/L NAA，添加蔗糖30 g/L，调节培养基pH值至5.8。 DB14
7、/ T 15912018 3 8.2 生根过程的条件控制用生长健壮且无明显变异的组培苗进行生根诱导。选择高度在2 cm以上的组培幼苗接种至生根培养基进行生根。一般无根苗转接至生根培养基培养30 d左右即有多条根系产生，此时即达到驯化移栽的条件。生根阶段的培养条件与继代过程相同。9 组培苗的驯化移栽9.1 组培苗的炼苗措施将达到驯化移栽条件的组培苗移至温室，在自然光条件下炼苗7d左右，控制温室内温度 30 ，每天10：0015：00需进行适当遮荫，避免日光曝晒。采用闭盖炼苗2 d、松盖炼苗2 d、开盖炼苗3 d的方式使组培苗逐渐适应瓶外环境。 9.2 移栽基质的准备移栽基质的成分配比草炭:蛭石:
8、珍珠岩=4:3:1， 添加复合肥料（N:P2O5:K2O=20:10:20）200g/m 3。移栽容器采用50 孔育苗穴盘，提前装好基质并浇透水备用。9.3 组培苗移栽及栽后管理9.3.1 移栽时间与方法组培苗炼苗后叶片舒展变成深绿色且出现表皮毛，此时即可进行移栽。移栽适宜在晴天的傍晚或阴天进行。移栽时需将幼苗用镊子小心地从瓶中夹出，用清水将根部的培养基清洗干净，然后将幼苗在75%百菌清可湿性粉剂8001 000倍液浸泡杀菌10 min。杀过菌的幼苗即可移栽至育苗穴盘，移栽时应注意使根系保持舒展直立的状态，以利于新根的发生与幼苗的成活。9.3.2 移栽后管理 移栽后将育苗穴盘整齐摆放于温室，然
9、后需立即浇水，并搭建小拱棚外覆薄膜保湿。第一遍水需浇透，以利于迅速发根，以后每天上下午需各浇水一次。移栽后需仔细观察幼苗状态，及时控制温室内环境条件。移栽一周内温室内温度应控制在25 30 ，湿度70%以上，并且晴天的10：0015：00需特别注意遮阴。移栽一周后草莓植株挺立且有新叶发生则证明移栽成活。9.4 脱毒原原种苗出圃脱毒原原种苗达到3叶1心时即达到出圃标准。出圃的草莓脱毒原原种苗应参照附录B.1中的出圃登记表进行严格登记，实行可追溯管理。 DB14/ T 15912018 4 AA附 录 A（资料性附录）草莓脱毒原原种苗组培生产记录表表A.1 给出了草莓脱毒原原种苗组培生产过程中需要登记记录的内容。 表 A.1 草莓脱毒原原种苗组培生产记录表接种时间 品种名称 继代次数 接种数量（瓶） 备注 DB14/ T 15912018 5 BB附 录 B（资料性附录）草莓脱毒原原种苗出圃登记表表B.1 给出了草莓脱毒原原种苗出圃销售过程中需要登记的内容。 表 B.1 草莓脱毒原原种苗出圃登记表出圃时间 品种名称 苗龄（天） 出圃数量（株） 出圃去向 备注 _
