1、ICS 65.020.30 B 43 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 5107 2019 羊人工授精技术规 程 2019 - 11 - 28 发布 2019 - 12 - 28 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 5107 2019 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由 河北北方学院 提出。 本标准 起草单位：河北北方学院 。 本标准主要起草人： 王净、穆秀明、张璧珠、段汝和、陈登峰、叶和平、崔宏宇、范志军、李建 立、王玉亮、郭健、陈四海、张振祥、董建红、翟明成。 DB13/T 5107 2019 1 羊人工授精 技术规 程 1
2、范围 本标准规定了羊人工授精 的 前期准备 、采精、 精液品质检查 、鲜精稀释、精液 保存与运输 、发情 鉴定、输精、 人工授精器械的洗涤和存放 、 生产记录与档案管理 等技术要求。 本标准适用于羊的繁殖配种。 2 前 期 准备 2.1 羊的准备 2.1.1 母羊的准备 2.1.1.1 调整母羊群体结构，将 体重 、 年龄和膘情相近 母羊分群。 2.1.1.2 按照 营养 标准进行饲养管理，使母羊膘情达到中上等水平。 2.1.2 公羊的准备 2.1.2.1 要求公羊体质结实，膘情中上等，精力充沛 。 2.1.2.2 对初次参加配种的公羊进行调教。 2.1.2.3 配种前一个月开始采精，检查其精
3、液品质，对公羊定期排精。 2.1.2.4 每天驱赶公羊 运动 2 h。 2.2 器材与药 品的准备 2.2.1 所需 器 材与 药品 参照附 录 A准备。 2.2.2 器材的 消毒 假阴道内胎、玻璃棒、温度计、金属镊子，需用 75 %酒精棉球擦试消毒。集精杯、输精器、纱布、 离心管，需常规高压蒸汽灭菌。 3 采精 3.1 安装 假阴道 3.1.1 安装内胎 要求假阴道外壳两端光滑，内胎不漏水。使内胎的光面在内，将内胎放入外壳，并使内胎露出外 壳两端的部份等长，然后将内胎翻转套在外壳上，保证内胎平整、无扭曲，用橡皮圈固定两端。 3.1.2 注水 DB13/T 5107 2019 2 通过注水孔向
4、假阴道内、外壁之间注入 50 55温水， 使其能在采精时温度保持 38 42 。 水量 一般 为外壳与内胎间容量的 1/2 2/3。 3.1.3 涂润滑剂 用消毒好的玻璃棒，取少许灭菌液体甘油或者凡士林，均匀的涂抹在假阴道内胎的前二分之一处。 3.1.4 安装集精杯 将集精杯插入已 涂润滑剂 的假阴道的对侧端，并在外面套上保护套。 3.1.5 充气 通过注水孔向假阴道内、外壁之间注入 空气， 使 集精杯对侧的假阴道 端口呈“ Y”字形 。 3.2 采精方法 3.2.1 保定台羊 选择体型中等 的 发情母羊 作为台羊，在采精架内进行保定 。 3.2.2 卫生清洁 采精前，台羊的外阴、采精公羊 的
5、阴茎包皮 用 湿毛巾擦拭 。 3.2.3 激发公羊性欲 当公羊爬跨台羊时，迅速推开公羊，反复 2次后再使其爬跨采精。 3.2.4 采集精液 采精人员蹲于台羊右侧，右手 持假阴道；当公羊阴茎勃起并爬跨时，左手迅速轻托包皮将阴茎导 入假阴道；公羊向前耸身时即射精，立即竖起假阴道，取下集精杯，送往精液处理室。 3.3 采精频率 1.5岁左右的公羊，每天采精 1次，每周采精 3 d； 2.5岁以上公羊，每天采精 1 2次，每周采精 3 d 5 d。 4 精液 品质检查 精液品质检查在室温条件下 （ 20 25） 进行。 4.1 常规检查 4.1.1 肉眼 检查 合格的新鲜精液 为 ： 射精量一般为 0
6、.8 mL 1.5 mL， 颜色呈乳白色 ， 肉眼感观 “ 云雾状 ” 明显 。 4.1.2 显微镜 检查 4.1.2.1 密度 DB13/T 5107 2019 3 用消毒玻璃棒蘸取原精液 1滴，滴在洁净的载玻片上，盖 好盖玻片，显微镜放大 100倍观察。视野 内精子彼此之间空隙小于一个精子 的长度 ，评为“密”； 视野内 精子彼此之间的 空隙 约为一个精子的 长度，评为“中”； 视野内 精子 彼此之间的空隙 超过一个精子长度，评为“稀”。 4.1.2.2 活率 用消毒 玻璃棒蘸取一滴经生理盐水稀释的精液，滴在洁净的载玻片上，盖好盖玻片，显微镜放大 400倍观察。视野中估算直线前进运动精子所
7、占全部精子的百分数，直线前进运动的精子为 100 %者评 为 1.0， 90 %者为 0.9，以此类推。 4.1.2.3 指标要求 显微镜检查精子活 率 不得低于 0.7；精子密度在中等以上 。 4.2 定期 检查 4.2.1 精子计数 用移液器或者红血球吸管吸取 3 %NaCl将精液稀释 200倍，取其滴加到血球计数板，盖好盖玻片， 放大到 400倍检测精子密度。首先数出四角和正中间的五个方格中的精子数，也就是 80个小方格中的精 子数。按照“数上不数下，数左不数右”的原则计数。计算精子数： 1 mL原精液内的精子数 =5个中方 格数的精子数 5 10 1000稀释倍数。 4.2.2 精子畸
8、形率 加一滴精液到载玻片偏右侧端，盖玻片一端接触精液并以 30夹角轻轻向左推，制作精液抹片， 浸入无水酒精固定 2 min 3 min后风干，浸入红墨水或者蓝墨水染色 15 min， 蒸馏水冲洗 1 min 2 min 后风干，放大到 400倍检测，随机观察 200个精子计算各类畸形精子的比例。 4.2.3 指标要求 每毫升精液中含精子数应在 20亿以上；精子畸形率一般要求不超过 14 %。 5 鲜 精 稀释 5.1 稀释液的选择 可选用处于保质期内的商品稀释液，或无菌脱脂羊奶或牛奶。若无上述稀释液，也可用生理盐水 代替。自配稀释液要求现配现用。 5.2 稀释倍数 根据输精需要和精液品质确定稀
9、释倍数 ，稀释比例为 1： 1 1： 3。 5.3 稀释方法 稀释液 需提前 预热 ，使其 温度与精液的温度 一致 。稀释液沿杯壁缓 慢 加入 到精液中 ，混合均匀， 防止剧烈震荡。 5.4 活率 检查 DB13/T 5107 2019 4 用消毒玻璃棒蘸取一滴经稀释的精液，滴在洁净的载玻片上，盖好盖玻片，显微镜放大 400倍观察。 具体检查方法同 4.1.2.2。 稀释后的精液 活率要求达到 0.7以上 。 6 精 液 保存 与 运输 6.1 精液 保存 液态稀释 精液可进行 常温（ 15 25）或低温（ 0 5）保存 。 6.2 精液运输 液态稀释精液 运输时，应避光，防 剧烈 震 荡 ，
10、防污染，防止温度急剧变化。 6.3 注意事项 液态稀释精液 远程运输 需 低温（ 0 5 ） 保存，运输时间不宜超过 72 h； 近程 运输的 液态稀释 精液 常温 保存 即可 ， 运输 时间不超过 24 h。 7 发情鉴定 7.1 鉴定时间 每日 早、晚 各进行一次。 7.2 鉴定方法 采用试情法。将系有试情布的公羊， 放入待鉴定的母羊群中。当观察到 主动 与试情公羊接近并接 受 公羊 爬跨的母羊，即为发情母羊 。 8 输精 8.1 母羊保定 将发情母羊固定在输精架内，或由助手用两腿夹住母羊头部并且用双手提起母羊后肢将母羊保定。 用温水清洗外阴部 ，再用生理盐水棉球擦拭。 8.2 阴道 输精
11、 先 将消毒的开膣器轻插入阴道，缓慢打开 ；再 轻旋开膣器，寻找子宫颈口，将输精器尖端插入子 宫颈口内 0.5 cm 1 cm处，注入精液 ；接着取出 输精器，拔出开膣器 ；然后轻 拍母羊 臀部 ，防止精液倒 流 ；最后将输精器和开膣器用 75 %酒精棉球由前向后擦拭消毒，待酒精干燥后，用生理盐水棉球擦拭， 继续为下一只母羊输精。 8.3 阴道炎处理 输精时若发现母羊阴道 感染 ，应先用生理盐水冲洗阴道，再进行输精。输精后阴道内放入青霉素 和链霉素粉各 0.1 g左右。 8.4 输精剂量 DB13/T 5107 2019 5 原精液 0.05 mL 0.1 mL，稀释精液 0.1 mL 0.2
12、 mL。初配母羊可进行阴道输精，输精剂量加倍。 绵 羊一次输精剂量的有效精子数为 7000万个以上，山羊为 5000万个以上。 8.5 输精次数 母羊于发情后 12 h 24 h内进行第一次输精， 间隔 8 h 12 h进行第二次 输精， 再 间隔 8 h 12 h进行 第三次 输精。 9 人工授精器械的洗涤和存放 9.1 器械的洗涤 人工授精所用器械在每次使用后，需用洗涤剂洗刷干净，再经清水和蒸馏水各冲洗一次。 9.2 器械的 存放 保持清洁、干燥，存放于消毒柜内。 10 生产记录与 档案 管理 10.1 生产 记录 做好公羊精液品质检查及利用情况记录（ 附录 B.1）， 做好 母羊 配种记
13、录 （附录 B.2），并及时整 理分析并归档。 10.2 档案 管理 生产档案 保存年限一般为 3年。档案保管做到防水、防潮、防虫蛀、防霉变、防遗失、防火。 DB13/T 5107 2019 6 附 录 A （规范性附录） 羊人工授精 所需 的 主要 器 材与 药品 羊人工授精 所需的 主要 器 材与 药品 见表 A.1。 表 A.1 羊人工授精 所需的 主要 器 材与 药品 序号 类别 名称 规格 单位 数量 1 器材 显微镜 100 倍 400 倍 台 2 2 假阴道外壳 - 个 5 3 假阴道内胎 - 条 10 4 假阴道塞子（带气嘴） - 个 5 5 集精杯 - 个 10 6 开膣器
14、- 支 10 7 输精器 羊用 支 10 8 移液器 1 mL 10 L 支 各 1 9 消毒柜 - 个 1 10 医用直头剪 刀 - 把 2 11 恒温箱 - 台 1 12 高压灭菌消毒器 - 台 1 13 冰箱 - 台 1 14 恒温水浴锅 - 个 1 15 搪瓷盘 20 cm 30 cm、 40 cm 50 cm 个 各 2 16 红血球吸管 - 支 2 17 血球计数板 - 块 2 18 注射器 1 mL 5 mL 支 各 20 19 纱布 - 包 2 20 脱脂棉 - 包 2 21 离心管 5 mL、 10 mL 包 各 1 22 载玻片 - 盒 2 23 盖玻片 - 盒 4 24
15、温度计 100 支 5 25 玻璃棒 0.2 cm、 0.5 cm 根 各 10 26 试情布 30 cm40 cm 块 10 27 药品 无水 酒精 500 mL 瓶 1 28 75 %酒精 500 mL 瓶 10 29 红、蓝墨水 - 瓶 各 2 30 液体甘油 - mL 500 31 白凡士林 - kg 1 32 3 %氯化钠 - mL 500 DB13/T 5107 2019 7 表 A.1 羊人工授精 所需的 主要 器 材与 药品 （续） 序号 类别 名称 规格 单位 数量 33 药品 生理盐水 500 mL 瓶 20 34 无菌脱脂牛奶 - mL 250 35 无菌脱脂羊奶 - m
16、L 250 36 青 霉素 160 万单位 /支 支 10 37 链霉素 100 万单位 /支 支 10 注： 规模 100 只 DB13/T 5107 2019 8 附 录 B （ 资料 性附录） 羊人工授精记录表 表 B.1 给出了公羊精液品质检查及利用记录表 。 表 B.1 公羊精液品质检查及利用记录表 品种： 公羊耳号： 序号 采精 采精量 （ mL） 原精液 稀释精液 输精量 （ mL） 授精母 羊数 采精员 备注 月 日 时 间 次 数 色 泽 密 度 活 率 种 类 倍 数 活 率 表 B.2 给出了母羊配种记录表 。 表 B.2 母羊配种记录表 序号 母羊 公羊 第一次 配种 第 二 次 配种 第 三 次 配种 预产期 输精员 备注 品种 耳号 品种 耳号 月日 时间 月日 时间 月日 时间 _
