1、ICS 65.020 B 40 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 2954 2019 畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 高效液相色谱法 2019 - 03 - 25 发布 2019 - 04 - 25 实施 河北省市场监督管理局 发布 DB13/T 2954 2019 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准 由 衡 水市质量技术监督局 提出 。 本标准起草单位： 河北美创检测科技有限公司、衡水市食品药品检验检测中心、衡水市农业农村 局 。 本标准 主要 起草人： 耿春辉、崔婧、梁勃、 段培姿、王晖、王哲、王权、路明、高晶、刘志祥、 陈宁 。 DB
2、13/T 2954 2019 1 畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 高效液相色谱法 警告 使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能 的安全问题。 使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇高效液相色谱测定方法的原理、试剂、仪器和设备、 检测步骤、结果计算、 准确度和精密度。 本标准适用于饲料原料、配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。 本标准的方法检出限为 10 g/kg，定量限为 20 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日
3、期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和乙腈的混合溶液提取 ,经层析柱净化 ,浓缩、定容和过滤后用 高效液相色谱 -紫外检测器测定 ,外标法定量。 4 试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇 (CH3OH， CAS 号： 67-56-1)，色谱纯。 4.2 乙腈 (CH3CN， CAS 号： 75-05-8)，色谱
4、纯。 4.3 正己烷 (C6H14， CAS 号： 110-54-3)，色谱纯。 4.4 活性炭， 120 400 目 。 4.5 酸性氧化铝， 40 80 目 。 4.6 层析柱 ,内径 10 mm ，长度 150 mm，砂芯有活塞 。 4.7 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品 (C15H20O6， CAS 号： 51481-10-8)，纯度 99 %。 DB13/T 2954 2019 2 4.8 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液（ 1.0 mg/mL），准确称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品 (4.7)10.0 mg 于 50 mL 烧杯中，用乙腈溶解，转移到 10 mL 棕色容量瓶中，用乙腈定容。避光放
5、置于 4 冰箱中， 有效期为 6 个月。 4.9 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准中间液（ 100 g /mL），准确吸取 10.0 mL 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储 备溶液 (4.8)于 100 mL 容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于 4 冰箱中，有效期为 1 个月。 4.10 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液，分别准确吸取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准中间液 (4.9)适量，用 水配制成 1 g/mL、 2 g/mL、 5 g/mL、 10 g/mL、 20 g/mL 系列标准工作液。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。 5.2 粉碎机。 5.3 涡旋混合器。 5.4 振荡器。 5.5 离心
6、机，转速不低于 5000 r/min。 5.6 超声波清洗机。 5.7 旋转蒸发仪。 5.8 天平，感量分别为 0.1 g 和 0.01 mg。 6 检测步骤 6.1 样品 饲料原料或配合饲料。 6.2 试样制备 按 GB/T 14699.1采集有代表性的样品，按 GB/T 20195进行试样的制备，粉碎，通过 0.85 mm试验筛， 装入密封的玻璃容器中，低温保存备用。 6.3 试样提取 称取试样 25 g（精确至 0.01 g）置于 250 mL具塞锥形瓶中，准确加入 100 mL乙腈 -水溶液（ 84+16）， 置于振荡器振荡 30 min， 5000 r/min离心 5 min，收集上
7、清液于干净的容器中备用， 取 10.0 mL上清液置 于 50 mL离心管中，加 10.0 ml乙腈饱和正己烷溶液，涡旋混合 2 min， 5000 r/min离心 2 min，弃去正己 烷层后，待净化。 6.4 试样净化 6.4.1 层析柱制备：在层析柱底部加入适量脱脂棉，加入 6 ml 乙腈 +水溶液。 按下列顺序湿法装柱： DB13/T 2954 2019 3 a) 酸性氧化铝 1g； b) 活性炭 0.5g。 c) 脱脂棉少量 注： 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 6.4.2 过柱、洗脱，当柱内溶剂液面降至上层脱脂棉与活性炭界面时，加入提取液，控制流速为每秒 1
8、 2 滴，待溶液全部过柱后，用 5 mL 乙腈淋洗柱子，收集全部流出液于鸡心瓶中，于旋转蒸发仪减压 浓缩至干，加 1 mL 水溶解残留物，涡旋混匀 1 min，过 0.22 m 微孔滤膜于进样瓶，待测。 6.5 仪器条件 高效液相色谱参考条件： a) 色谱柱， C18 柱， 250 mm4.6 mm，粒径 5 m； b) 流动相，甲醇 +乙腈 +水（ 10+10+80），用前过 0.45 m 滤膜，脱气； c) 流速， 1 mL/min； d) 检测波长， 218 nm； e) 柱温， 40； f) 进样量， 50 L。 注： 当存在干扰峰或需要辅助定性时，可以采用乙腈 +水 =8+92 为流
9、动相来测定。 6.6 定量测定 以脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标 ，将系列标准溶液由 低到高浓度依次进样检测，得到标准工作曲线。 试样液中待测物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应适当稀释处理后再进样分 析。 7 结果计算 所得实验数据按公式（ 1）计算 。 = m 10V (1) 式中： 供试试料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 的含量， 单位为微克每千克（ g/kg）； 试样溶液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 的浓度， 单位微克每毫升（ g/mL）； V 样液最终定容体积，单位毫升（ mL）； m 试样的称样量，单位为克（ g）； 1000。 平行测量结果用算术平均值表示，结果保留到小数点后一位。 8 准确度和精密度 8.1 重复性 在重复条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过这两个测定值的算术平均值的 15 %。 DB13/T 2954 2019 4 8.2 再现性 在再现条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过这两个测定值的算术平均值的 20 %。 8.3 回收率 本方法的回收率为 80 % 110 %。 _
