1、ICS 65.020.20 B 05 DB13 河北省 地方标准 DB 13/T 2828 2018 马铃薯抗旱性鉴定技术规程 2018 - 09 - 21 发布 2018 - 10 - 21 实施 河北省质量技术监督局 发布 DB13/T 2828 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北北方学院提出。 本标准由河北北方学院起草。 本标准主要起草人员：王燕、王宽、罗亚婷、郭三妮、王磊、冯琰、吴桂丽、祁利潘、刘畅、孙 明磊、李梦、苏云、柴莹、尹江、龚学臣。 DB13/T 2828 2018 1 马铃薯抗旱性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了马
2、铃薯抗旱性鉴 定方法及使用规则。 本标准适用于马铃薯品种、种质资源的抗旱性鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 18133 马铃薯种薯 DB13/T 865-2007 马铃薯有机栽培技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗旱系数 drought resistance coefficient（ DRC） 抗旱系数是同一材料的同一指标干旱处理组测定值与对照组测定值的比值。 3.2 抗旱指数 drought resis
3、tance index （ DRI） 抗旱指数是指抗旱系数与某材料旱地产量之积，再除以所有材料的平均旱地产量。 3.3 抗旱性级别 grade of drought resistance 抗旱性分五级，从强到弱依次为： 1级，极强（ HR， highly resistant）； 2级，强（ R， resistant ）； 3级，中等（ MR， middle resistant）； 4级，弱（ S， susceptible ）； 5级，极弱（ HS， highly susceptible）。 4 鉴定方法 马铃薯抗旱性鉴定时期分为苗期和全生育期两个时期，可根据工作目的，选用不同时期的鉴定结 果判
4、定待测材料的抗旱性。 4.1 苗期抗旱性鉴定 苗期抗旱性鉴定在温室或旱棚内进行。 4.1.1 种薯准备 DB13/T 2828 2018 2 种薯质量应符合 GB 18133的 要求。为减少种薯差异，先将块茎放于 18 条件下催芽，待芽长 1 cm 左右，按单芽切块，每个切块重相等（ 7 g 0.5 g），备用。 4.1.2 播种 将准备好的芽块播种于口直径 15 cm的塑料盆中，盆中 用透水性好的沙壤土（也可以用水洗沙）， 播后统一灌溉，出苗后，每盆只留 1个茎，每个材料种植 20株， 3次重复。 4.1.3 干旱胁迫处理 干旱处理材料在出苗后 40 d停止灌水 7 8片叶，使土壤水分保持在
5、田间最大持水量的 30 % 3 %， 处理 72 h后采集样品。 4.1.4 非干旱胁迫处理 正常供水材料按植株正常生长需要，给以充足水分，使土壤水分保持在田间最大持水量 55 % 5 %。 4.1.5 样品采集 干旱胁迫处理组胁迫 72h后取处理组和对照组主茎中上部功能叶片 1 2片置于冷藏箱内 带回实验 室备用。 4.1.6 测定指标和方法 马铃薯生理生化指标的测定按照常 规植物生理生化指标的测定方法。 叶绿素含量测定 （ SPAD502叶绿素仪测定）； 过氧化物酶（ POD）活性 测定（愈创木酚法），见附表 A； 过氧化氢酶（ CAT）活性 （紫外吸收法），见附表 B； 丙二醛（ MDA
6、）含量 （硫代巴比妥酸），见附表 C 4.1.7 隶属函数值 数据分析采用隶属函数法。 首先用（ 1）式求每材料各指标的抗旱系数，用（ 2）式或（ 3）式求每个材料各指标的具体隶属函 数值，用（ 4）式求每材料的平均隶属函数值 : 抗旱系数 DRC=干旱处理测定值 /对照测定值 （ 1） Uij=(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin) （ 2） 或 Uij=1-(Xij-Xmin)/(Xmax-Xmin) （ 3） Ui= （ 4） 式中 : Uij i材料 j指标的隶属函数值； Xij 为 i材料 j指标的抗旱系数； Xmax 为所有材料中此指标的最大值； Xmin 为所有材料中此指标
7、的最小值； Ui 为 i材料各性状的平均抗旱隶属函数值。 注 ： 叶绿素、 过氧化氢和过氧化物等指标的隶属函数值计算用 (2)式 ， 丙二醛指标的隶属函数值计算用 (3)式。 n1j ijUn1 DB13/T 2828 2018 3 4.1.8 苗期抗旱性评价标准 马铃薯苗期抗旱性评价标准应符合表 1。 表 1 马铃薯苗期抗旱性评价标准 级别 平均抗旱隶属函数值 (Ui) 抗旱性 1 Ui 0.63 极强（ HR） 2 0.53 Ui0.63 强（ R） 3 0.37 Ui0.53 中等（ MR） 4 0.28 Ui0.37 弱（ S） 5 Ui0.28 极弱（ HS） 4.2 全生育期抗旱性
8、鉴定 马铃薯 全生育期抗旱性鉴定在旱棚内进行。 4.2.1 种薯要求 同 4.1.1。 4.2.2 试验设计 旱棚内用塑料布深埋 1米，把旱棚面积分成相等的两区域，一区域用于正常浇水材料种植，一区域 用于干旱胁迫处理材料种植。每区域内部材料随机排列，三次重复。 4.2.3 干旱胁迫处理 干旱处理区播种后少量灌水，确保苗全苗齐。出苗后至收获不供水。 4.2.4 非干旱胁迫处理 对照试验的土壤状况与胁迫处理的基本一致，保证马铃薯全生育期处于水分适宜状态。其它管理 与胁迫处理一致。 4.2.5 栽培管理 参考引用标准 整地、播种、田间管理等栽培技术应符合 DB13/T 865-2007。 4.2.6
9、 收获记产 每个材料取 10个单株的薯块计产。 4.2.7 抗旱指数 抗旱指数按式（ 5）计算。 DRI= （ 5） n 1j Dj D w D Yn1 Y Y Y DB13/T 2828 2018 4 式中： DRI 抗旱指数； YD 干旱胁迫处理产量（ kg）； YW 对照处理产量（ kg）； j 第 j个参试品种（系）。 4.2.8 全生育期抗旱性评价标准 马铃薯全生育期抗旱性评价标准见表 2。 表 2 马铃薯全生育期抗旱性评价标准 级别 抗旱指数（ DRI） 抗旱性 1 DRI1.41 极强（ HR） 2 1.03 DRI1.41 强（ R） 3 0.51 DRI1.03 中等（ MR
10、） 4 0.14 DRI0.51 弱（ S） 5 DRI0.14 极弱（ HS） 5 使用规则 5.1 以育种和生产应用为目的马铃薯抗旱性鉴定，应采用全生育期抗旱性鉴定的方法。 5.2 以快速筛选遗传和生理方面为目的马铃薯抗旱性鉴定，应采用苗期抗旱性鉴定的方法。 _ DB13/T 2828 2018 5 A A 附 录 A （规范性附录） 过氧化物酶（ POD）活性测定 A.1 试剂 A.1.1 试剂 a) 磷酸氢二钠 ； b) 磷酸二氢钠 ； c) 愈创木酚 ； d) H2O2。 A.1.2 试剂配制 A液： 0.2mol/L Na2HPO4，（ Na2HPO4 2H2O 35.61g或 5
11、3.65g Na2HPO4 7H2O或 71.7g Na2HPO4 12H2O用 蒸馏水配成 1000ml） B液： 0.2mol/L NaH2PO4，（ 27.6g NaH2PO4H2O用蒸馏水配成 1000ml） 31.2g NaH2PO42H2O 磷酸缓冲液 (pH6.0， 0.1mol/L)： A： B=12.3:87.7，混匀稀释至 200ml 磷酸缓冲液 (pH7.8， 0.05mol/L)： A： B=91.5:8.5，混匀稀释至 400ml A.2 仪器和设备 a) 微量进样器 ； b) 高速冷冻离心机 ； c) 分光光度计 ； d) 恒温水浴锅 。 A.3 测定步骤 A.3.
12、1 酶液制备 称取样品 0.5g，加入 2m1磷酸缓冲液 (pH7.8， 0.05mol/L)，冰浴研磨，再以 3m1磷酸缓冲液分两次 冲洗残渣，一并转入 10ml离心管中。 0-4低温， 12000rpm离心 20min，离心后冷藏保存，酶液供丙二 醛、 POD、 CAT测定用。 A.3.2 过氧化物酶（ POD）活性测定 A.3.2.1 反应混合液配制： 0.l mol/L磷酸缓冲液 (pH6.0) 100m1，愈创木酚 56 l，加热搅拌至溶解， 冷却后，加入 30%H2O2 38 l，混匀，冰箱保存。 A.3.2.2 测定：取 50 l酶液，加入 3m1反应混合液，以 50 l磷酸缓冲
13、液 (pH7.8)代替酶液作为空白， 470nm比色并计时，每隔 lmin读一次 (读 0， 1， 2min的 OD值 )，以每分钟内 OD470变化值表示酶活性大小。 DB13/T 2828 2018 6 A.3.2.3 结果计算： POD活性 (U.min-l.g-1FW)= A470 Vt/0.01 W Vs t。 式中， A470：反应时 间内吸光值的变化； Vt：提取酶液总体积 (ml)； W：样品鲜重（ g）； Vs：测定时 取用酶液体积 (ml)； t： 反应时间 (min) ； 0.01：每分钟增加 0.01为一个酶活单位。 DB13/T 2828 2018 7 B B 附 录
14、 B （规范性附录） 过氧化氢酶（ CAT）活性 B.1 试剂 B.1.1 试剂 a) 磷酸氢二钠 ； b) 磷酸二氢钠 ； c) H2O2。 B.1.2 试剂配制 a) A 液： 0.2mol/L Na2HPO4，（ Na2HPO4 2H2O 35.61g 或 53.65g Na2HPO4 7H2O 或 71.7g Na2HPO4 12H2O 用蒸馏水配成 1000ml） b) B 液： 0.2mol/L NaH2PO4，（ 27.6g NaH2PO4H2O 用蒸馏水配成 1000ml） 31.2g NaH2PO42H2O 磷酸缓冲液 (pH7.8， 0.05mol/L)： A： B=91.
15、5:8.5，混匀稀释至 400ml 磷酸缓冲液 (pH7. 0， 0.05mol/L) ， A： B=61.0:39.0，混匀稀释至 400ml B.2 仪器和设备 a) 微量进样器 ； b) 高速冷冻离心机 ； c) 紫外分光光度计 。 B.3 测定步骤 B.3.1 酶液制备，同 A3.1 B.3.2 过氧化氢酶（ CAT）活性的测定 B.3.2.1 反应混合液配制： 0.05mol/L磷酸缓冲液 (pH7. 0)100m1， 30% H2O2100 l，冰箱保存。 B.3.2.2 测定：取 50 l酶液，加入反应混合液 3m1，用 50 l磷酸缓冲液（ pH7.8)代替酶液作为空白， 24
16、0nm比色，并计时，每隔 lmin读一次。以每分钟内 OD240变化值表小酶活性大小。 B.3.2.3 结果计算： CAT活性 (U.min-l.g-1FW)= A240 Vt/0.1 W Vs t式中， A240：反应时间内 吸光值的变化； Vt：提取酶液总体积 (ml)； W：样品鲜重（ g）； Vs：测定时取用酶液体积 (ml)； t：反 应时间 (min) ； 0.01：每分钟下降 0.1为一个酶活单位。 DB13/T 2828 2018 8 C C 附 录 C （规范性附录） 丙二醛（ MDA）含量测定 C.1 试剂 C.1.1 试剂 a) 磷酸氢二钠 ； b) 磷酸二氢钠 ； c)
17、 硫代 巴比妥酸（ TBA） ； d) 三氯乙酸（ TCA） ； e) NaOH。 C.1.2 试剂配制 a) A 液： 0.2mol/L Na2HPO4，（ Na2HPO4 2H2O 35.61g 或 53.65g Na2HPO4 7H2O 或 71.7g Na2HPO4 12H2O 用蒸馏水配成 1000ml） b) B 液： 0.2mol/L NaH2PO4，（ 27.6g NaH2PO4H2O 用蒸馏水配成 1000ml） 31.2g NaH2PO42H2O 磷酸缓冲液 (pH7.8， 0.05mol/L)： A： B=91.5:8.5，混匀稀释至 400ml C.2 仪器和设备 a)
18、 微量进 样器 ； b) 高速冷冻离心机 ； c) 分光光度计 ； d) 水浴锅 。 C.3 测定步骤 C.3.1 酶液制备，同 A3.1 C.3.2 丙二醛（ MDA）含量测定 C.3.2.1 反应混合液配制： 0.6克 TBA（硫代巴比妥酸），先用少量 1MNaOH溶解，再用 10%TCA（三氯乙 酸）定容至 100毫升。 C.3.2.2 测定： 1毫升酶液 +2毫升 0.6%的 TBA，封口沸水浴 15分钟，迅速冷却后 1500转 10min离心，取 上清液，在 600、 532、 450nm三个波长下比色。 C.3.2.3 C结果计算： MDA浓度 C（ mol/L） =6.45（ OD532-OD600 - 0.56OD450 MDA含量（ mol/g FW） =CV/W V为提取液体积（ ml）， W为样品鲜重（ g）。
