1、ICS 65.120 B 46 DB13 河北省地方标准 DB13/T 14442011 饲料添加剂 葡萄糖氧化酶 2011 - 09 - 05 发布 2011 - 09 - 15 实施 河北省质量技术监督局 发布 DB13/T 14442011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由河北省科学院提出。 本标准起草单位：保定鲜尔康生物工程有限责任公司、河北省饲料产品质量监督检验站、保定市 标准化所、河北省科学院。 本标准起草人：王卫国、米振杰、武英利、李海龙、李惠玉、唐金金、辛春艳。 DB13/T 14442011 1 饲料添加剂 葡萄糖氧化酶 1 范围 本
2、标准规定了饲料添加剂葡萄糖氧化酶的术语和定义、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、 运输、贮存。 本标准适用于以特异青酶（ Penicillium notatum）为生产菌种，发酵生产的葡萄糖氧化酶制剂。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法 GB/T 6435 饲料中水分和其他挥发性物质
3、含量的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 9724 化学试剂pH值测定通则 GB 10648 饲料标签 GB/T 13079 饲料中总砷的测定 GB/T 13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T 13082 饲料中镉的测定方法 GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的检测方法 GB 4789.32010 食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数 GB/T 174802008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 GB/T 13093 饲料中细菌总数的测定 GB/T 14699.1 饲料采样 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1
4、 葡萄糖氧化酶活力单位 在 pH 5.6 的磷酸缓冲液、30温度的条件下，每分钟催化氧化 1 mol 葡萄糖转化为葡萄糖酸的 酶的量，为一个酶活力单位，以 GODU 表示。 4 要求 4.1 感官指标 DB13/T 14442011 2 4.1.1 固体剂型：为黄棕色粉末，色泽一致，无结块，气味微酸、无其它异味； 4.1.2 液体剂型：为淡黄至浅棕色半透明液体，气味微酸、无其它异味。 4.2 理化指标 应符合表 1规定。 表1 理 化 要 求 项 目 要 求 固体 液体 畜禽用 水产动物用 反刍动物用 所有动物用 指标（酶活力） 15 GODU/g 12 GODU/g 15 GODU/mL 酶
5、活力为标示值的（） 85 干燥失重（） 12.0 _ 细度（通过0.45 mm 分析筛） 80 85 80 _ pH 值 4.65.4 4.45.4 4.3 卫生指标 应符合表 2规定 表2 卫 生 指 标 项 目 要 求 固 体 液 体 砷， mg/kg 3.0 3.0 铅（以 Pb 计） ， mg/kg 8.0 5.0 镉（以 Cd 计） ， mg/kg 0.5 0.5 沙门氏菌 不得检出 不得检出 大肠菌群（个/100 g） 3000 3000 黄曲霉毒素 B1（ g/kg） 0.1 0.1 细菌总数（ cfc/g）或（ cfc/ml） 510 5 510 4 5 试验方法 本标准所用试
6、剂除特殊表明外，均为分析纯。所用水均应符合 GB/T 6682 中三级水规格。所需的标 准溶液，没有表明时，均按 GB/T 601、 GB/T 603 规定的方法制备。 5.1 试剂和溶液 5.1.1 葡萄糖磷酸缓冲液（20 g/L）：称取20 g 无水葡萄糖，用 0.06 mol/L pH5.6 磷酸缓冲液溶解， 定容至 1 000 mL。 5.1.2 NaOH 标准滴定溶液（0.1 mol/L）。 5.1.3 HCL 标准滴定溶液（0.1 mol/L）。 DB13/T 14442011 3 5.1.4 酚酞指示剂（10 g/L） 称取酚酞 1 g 溶于100 ml 90乙醇中。 5.1.5
7、 磷酸缓冲液（0.06 mol/L pH 5.6） NaH2PO4 2 H2O 溶液：称取 NaH2PO4 2 H2O 9.36 g，加水溶解，定容至 1 000 mL，摇匀即可； Na2HPO412 H2O 溶液：称取 Na2HPO412 H2O 21.48 g，加水溶解，定容至 1 000 mL，摇匀即可； 取上述 NaH2PO4 2 H2O 溶液和 Na2HPO412 H2O 溶液按 20:1比例混合，用 NaH2PO4 2 H2O 溶液 或 Na2HPO412 H2O 溶液调 pH 值至 5.6 即可。 5.2 仪器设备 5.2.1 分析天平, 感量 0.01 g。 5.2.2 磁力搅
8、拌器。 5.2.3 pH 计：精度为 0.01 单位。 5.2.4 分样标准筛：孔径 0.45 mm。 5.2.5 恒温水浴震荡器：温差0.2，震荡频率 50220 rpm。 5.3 pH 测定 a) 固体产品取样 10 g 加 50 ml 水摇匀，浸 30 分钟，用滤纸过滤，取上清液按 GB/T 9724 规定 的方法测定。 b) 液体产品直接按 GB/T 9724 规定的方法测定。 5.4 干燥失重的测定 称取试样约 5 g，按照 GB/T 6435中 8.2 的规定测定。 5.5 细度测定 按照 GB/T 5917 的规定执行。 5.6 砷含量的测定 按照 GB/T 13079 规定执行
9、。 5.7 铅含量的测定 按照 GB/T 13080规定执行。 5.8 镉含量的测定 按照 GB 13082规定执行。 5.9 饲料中沙门氏菌的测定 按照 GB/T 13091规定执行。 5.10 大肠菌群计数 按照 GB 4789.32010规定执行。 5.11 饲料中黄曲霉毒素 B1测定 DB13/T 14442011 4 按照 GB/T 174802008规定执行。 5.12 细菌总数的测定 按照 GB/T 13093 规定执行。 5.13 葡萄糖氧化酶测定 5.13.1 原理 葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化氧化葡萄糖生成葡萄糖酸。用过量的氢氧化钠中和产生的 葡萄糖酸，再用盐酸返滴
10、定，即可求得葡萄糖酸的产量，根据产葡萄糖酸量表示酶活力高低。 5.13.2 测定方法 取固体产品10.00 g置250 mL锥形瓶中。准确加入适量蒸馏水稀释,使酶液浓度控制在2.43.5 U/mL 范围（记录稀释倍数f）。搅拌摇匀后于48冰箱中浸提1516小时，用中性快速滤纸或细绸布过滤， 滤液作为测定液；准确量取液体产品，用适量蒸馏水稀释，使酶液浓度控制在2.43.5 U/mL范围（记 录稀释倍数f），作为测定液。 取2葡萄糖磷酸缓冲液25.00 mL置250 mL 锥形瓶中，于恒温摇床上30、150 rpm预热3分钟，准 确加入上述测定液1.00 mL，立即置恒温摇床上，30、150 rp
11、m振荡反应60分钟取出（准确计时）；立 即准确加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶液 20.00 ml，振摇终止反应；加酚酞指示剂1滴 ，用0.1 mol/L盐酸 滴定剩余的氢氧化钠，记录所消耗的盐酸毫升数A。 空白对照，取2葡萄糖磷酸缓冲液25.00 mL置250 mL锥形瓶中，准确加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶 液20.00 ml，摇匀，再准确加入酶液1.00 mL，酚酞指示剂1滴，用0.1 mol/L盐酸滴定剩余的氢氧化钠， 记录所消耗的盐酸毫升数B。 5.13.3 计算 葡萄糖氧化酶活力单位( GOD/g 或 mL)= 60 1000fB NA）（ (1) 式中： A-反应后消耗的盐
12、酸（ mL） ； B -反应前消耗的盐酸（ mL） ； N-盐酸摩尔浓度（ mol/L） ； f-稀释倍数 60-为反应60分钟，按分钟计； 6 检验规则 6.1 出厂检验 6.1.1 每批产品应有企业质量检验部门进行出厂检验，检验合格后签发合格证出厂。 6.1.2 出厂检验项目 a) 固体剂型：感官指标、酶活力、干燥失重、细度、 pH 值、细菌总数。 b) 液体剂型：感官指标、酶活力、 pH 值、细菌总数。 6.2 型式试验 DB13/T 14442011 5 6.2.1 型式检验项目 为本标准第 4 章规定的全部项目。 6.2.2 有下列情形之一时，应进行型式检验： a) 新产品定型投产时
13、； b) 原料、加工工艺有调整可能影响产品质量时； c) 连续正常生产每年进行一次； d) 停产或转产半年又继续生产时； e) 上级质检部门提出型式检验要求时。 6.3 组批抽样 6.3.1 组批 以每一班次生产的、同一质量规格、同一包装的产品为一批。 6.3.2 采样方法 按照 GB/T 14699.1 规定的方法进行。 6.4 判定规则 检验结果全部指标符合标准要求，判定该批产品合格。如果检验结果中有一项指标不符合标准要求 时，应重新抽样进行复检。复检取样范围或样品数量是第一次的两倍，复检结果中仍有指标不合格时， 则判定整批产品不合格。卫生指标不合格不得进行复检。 7 标志、包装、运输、贮
14、存 7.1 标志 7.1.1 包装标志 产品外包装需注明：品名、规格、注册商标、生产厂家等，并采用鲜明的饲料标签和检验合格证。 7.1.2 标签 产品标签应符合 GB 10648 之规定。 7.2 包装 内包装为塑料膜或瓶（桶），外包装为复合纸袋或纸箱，也可按用户要求包装。 7.3 运输 在运输过程中应防雨、防潮、防晒，装卸时应轻拿轻放。 7.4 贮存 产品贮存在清洁、阴凉、干燥的库房中，严禁与有毒、有腐蚀性物品和其它污染物混装、混贮。液 体产品可贮存在48或常温条件下。 7.5 保存期 DB13/T 14442011 6 在规定的贮运和包装条件下，原包装从生产之日起液体产品（48）为 12 个月，常温下为 6 个月。固体产品常温下为 12 个月。 _
